【正文】 反應混合液：取 100mmol/L磷酸緩沖液（ ） 50ml于燒杯中，加入愈創(chuàng)木酚 28μl ， 于磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創(chuàng)木 酚完全溶解，待溶液冷卻后，加入 30% 過氧化氫 19μl ，混合均勻，保存于冰 箱中。 操作方法 ?（ 1）酶液制備 20mmol/L KH2PO4溶液 5ml 研缽中研磨成勻漿 － 1下離心 10min 上清液轉入 25ml容量瓶，定容 （ 2）比色測定 ＋ 3ml KH2PO4 ＋ 3ml 反應混合液 （ 2）比色測定 每隔 1min讀數(shù) 1次，共讀 5次數(shù)。 結果計算 ? （ 1）以時間為橫座標，光密度為縱座標作圖，曲線并非一直都為直線，由于其他酶的作用，一定時間后顏色可能消褪向曲線下行。轉折出現(xiàn)的早晚取決于溫度。 在曲線的前期部分找到一段近似直線的部分，和直線起點的時間 t光密度 A1和直線終點的時間 t光密度 A2。 過氧化物酶反應動力曲線0011 2 3 4 5 6時間（m i n ）吸光度（A470nm）系列1（ 2）計算 以每分鐘 A470變化 1個過氧化物酶活力單位（ μ ），計算其過氧化物酶的活力及比活力。 ? ? ? ? DttAA ??????m i n/1212酶活力? ? ? ?? ?gWuu 酶活力酶的比活力 ?/g 式中， t2t1為時間變化； A2A1為時間 t1至 t2時吸光度的變化；W為材料鮮重（干重或 mg蛋白等）； D為稀釋倍數(shù)，即提取的酶液總量為反應系統(tǒng)內酶液的倍數(shù)。本實驗酶液總量為 25ml，如取 ， D=50。 ? （ 1）稱完材料后，將材料沖洗一下，洗掉表面的褐色，防止其顏色對吸光度的影響。 ? （ 2）離心機的使用過程中需注意：離心管要對稱放，放之前先調平衡；離心機里的套管不能隨便拿出，因為對稱位置上的是已經(jīng)調好平衡的；轉速要一級一級往上加到 3000 r/min。 ? （ 3）定容酶液和調平衡時要用什么？（提取液磷酸二氫鉀） ? 測定過氧化物酶的活性除比色法外，你還 知道什么其他方法？ ? 除愈創(chuàng)木酚外，還有什么化合物作為過氧 化物酶的底物？ ? 計算酶比活力時，材料重量可用鮮重 （ g）或干重（ g）及也可用蛋白重（ mg）三種 單位來表示，哪種表示較好？為什么？ 實驗原理 ? 葉綠素易溶于有機溶劑，不溶于水，所以可以用乙醇或丙酮等有機溶劑來提取它。根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，利用分光光度計在某一特定波長（選擇紅光區(qū)的吸收峰，以減少類胡蘿卜素對其的影響）下測定其消光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。 分別測定在 663nm、 645nm的吸光值，然后根據(jù) LambertBeer定律，計算出提取液中葉綠素 a和葉綠素 b的濃度。 Ca = Cb = Ct = Ca + Cb = + Ca：葉綠素 a的濃度； Cb：葉綠素 b的濃度； Ct：葉綠素 a+b的濃度 實驗材料 ?不同鹽濃度處理的小麥葉片。 實驗步驟 葉綠素的提?。ㄑ心シǎ? 稱取葉片 ，按下列所示步驟操作： 最后將提取液過濾到 25ml容量瓶中，定容。 注：研缽中先加入少許 80％乙醇，、石英砂、 CaCO3 比色測定 ? 以 80％乙醇做空白對照，分別在 663nm、645nm波長下測其吸光度，然后帶入公式計算出色素的濃度后，再按下式計算組織中各色素的含量 (用每克鮮重或干重所含毫克數(shù)表示 )： ? 葉綠素含量＝色素的濃度（ C) 提取液體積 稀釋倍數(shù) /樣品鮮重 ? 注：如一開始提取液的吸光度大于 1，應將其稀釋后再測；如吸光度小于 1，則不用稀釋，稀釋倍數(shù)為 1。 【 注意事項 】 ? 1 為了避免葉綠素的光分解，操作時應在弱光下進行，研磨時間應盡量短些。 ? 2 葉綠體色素提取液不能渾濁?？稍?710nm或 750nm波長下測量消光度，其值應小于當波長為葉綠素 A吸收峰時消光度值的 5％，否則應重新過濾。 ? 3 用分光光度計法測定葉綠素含量，對分光光度計的波長精確度要求較高。如果波長與原吸收峰波長相差1nm，則葉綠素 A的測定誤差為 2％，葉綠素 B為 19％，使用前必須對分光光度計的波長進行校正。校正方法除按儀器說明書外，還應以純的葉綠素 A和 B來校正。 ? 4 (如： 7 12721型等 )測定葉綠素 A、 B含量時，因儀器的狹縫較寬，分光性能差，單色光的純度低 (177。 5～ 7nM)，與高中檔儀器如島津 UV－ 1 UV－ 240等測定結果相比，葉綠素 A的測定值偏低，葉綠素 B值偏高，A／ B比值嚴重偏小。因此，使用時必須用高檔分光光度計對低檔的分光光度計進行校正 思考題 ?1 葉綠素 A、 B在藍光區(qū)也有吸收峰，能否用這一吸收峰波長進行葉綠素 A、 B的定量分 ? 2 為什么提取葉綠素時干材料一定要用 80％的丙酮，而新鮮的材料可以用無水丙酮提 電導率的測定 目的和原理： 電導率是指溶液電阻的倒數(shù)，表示的是溶液的導電性能，可表示水的純凈度。在植物生理中用于檢測物質透過質膜的多少，可以反映膜受傷害的程度。 了解鹽分脅迫對小麥幼苗細胞質膜傷害的情況，掌握電導率的使用方法。 材料、設備及試劑 1 材料 小麥幼苗葉片 2 設備 電導儀、冰箱、恒溫箱、真空抽氣裝置（或注射器）、小燒杯、量筒、刀片、打孔器、無離子水（或蒸餾水）。 三、操作方法 （ 1）選取植物葉片，用濕紗布擦去塵土，用刀片切取等 。 （ 2）將材料放入注射器中，堵住其下端開孔，加 20ml無離子水，反復抽氣，直到葉片完全浸入水中，然后轉入潔凈燒杯中，浸提 30min后測定電導率 用無離子水進行電導儀校正后，將電極放入燒杯中，分別測定組織浸提掖和蒸餾水的電導率。 四、結果計算 G小麥幼苗電導率 =（ G組織浸提掖 G蒸餾水 ） /W 電 導 儀 的 使 用 方 法 ，讓本機預熱 10分鐘后，安上電極進行儀器的校正。 ，先將開關調到校正擋。后將溫度補償調節(jié)到 250C。 。在電導儀顯示屏上，通過電極常數(shù)旋鈕，將電極常數(shù)值調節(jié)到與電極相符合的值。 ：儀表上有 20ms、 2ms、 200us、 20us四個量程。這四個數(shù)值表示測量的范圍。 20ms表示 0~、 2ms表示0~、 200us表示 0~、 20us表示 0~。因此 ,在測量末知溶液時，選擇量程應是從高向低轉換，這樣避免儀器儀表損壞。 ms與 us的關系是 1000倍，所以，最后結果單位統(tǒng)一為 us/cm。 ，將電極放入浸泡液中進行測量，將校正開關調至測量擋，測量出浸泡液的電導值。完后，取出電極沖洗，用吸水紙吸干表面水分，再測下一個溶液。以此類推，整過操作過程完成。 玻璃器皿 天平、烘箱、生長箱 離心機 顯微鏡 熒光顯微鏡 顯微成像系統(tǒng) 解剖顯微鏡 普通顯微鏡 植物組織培養(yǎng) 超凈工作臺 無土栽培技術