【正文】 反應(yīng)混合液：取 100mmol/L磷酸緩沖液（ ） 50ml于燒杯中，加入愈創(chuàng)木酚 28μl ， 于磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創(chuàng)木 酚完全溶解，待溶液冷卻后，加入 30% 過氧化氫 19μl ，混合均勻，保存于冰 箱中。 操作方法 ?（ 1）酶液制備 20mmol/L KH2PO4溶液 5ml 研缽中研磨成勻漿 － 1下離心 10min 上清液轉(zhuǎn)入 25ml容量瓶，定容 （ 2）比色測(cè)定 ＋ 3ml KH2PO4 ＋ 3ml 反應(yīng)混合液 （ 2）比色測(cè)定 每隔 1min讀數(shù) 1次，共讀 5次數(shù)。 結(jié)果計(jì)算 ? （ 1）以時(shí)間為橫座標(biāo)，光密度為縱座標(biāo)作圖，曲線并非一直都為直線，由于其他酶的作用，一定時(shí)間后顏色可能消褪向曲線下行。轉(zhuǎn)折出現(xiàn)的早晚取決于溫度。 在曲線的前期部分找到一段近似直線的部分，和直線起點(diǎn)的時(shí)間 t光密度 A1和直線終點(diǎn)的時(shí)間 t光密度 A2。 過氧化物酶反應(yīng)動(dòng)力曲線0011 2 3 4 5 6時(shí)間（m i n ）吸光度（A470nm）系列1（ 2）計(jì)算 以每分鐘 A470變化 1個(gè)過氧化物酶活力單位（ μ ），計(jì)算其過氧化物酶的活力及比活力。 ? ? ? ? DttAA ??????m i n/1212酶活力? ? ? ?? ?gWuu 酶活力酶的比活力 ?/g 式中， t2t1為時(shí)間變化； A2A1為時(shí)間 t1至 t2時(shí)吸光度的變化；W為材料鮮重（干重或 mg蛋白等）； D為稀釋倍數(shù)，即提取的酶液總量為反應(yīng)系統(tǒng)內(nèi)酶液的倍數(shù)。本實(shí)驗(yàn)酶液總量為 25ml，如取 ， D=50。 ? （ 1）稱完材料后，將材料沖洗一下，洗掉表面的褐色，防止其顏色對(duì)吸光度的影響。 ? （ 2）離心機(jī)的使用過程中需注意：離心管要對(duì)稱放，放之前先調(diào)平衡；離心機(jī)里的套管不能隨便拿出，因?yàn)閷?duì)稱位置上的是已經(jīng)調(diào)好平衡的；轉(zhuǎn)速要一級(jí)一級(jí)往上加到 3000 r/min。 ? （ 3）定容酶液和調(diào)平衡時(shí)要用什么？（提取液磷酸二氫鉀） ? 測(cè)定過氧化物酶的活性除比色法外，你還 知道什么其他方法？ ? 除愈創(chuàng)木酚外，還有什么化合物作為過氧 化物酶的底物？ ? 計(jì)算酶比活力時(shí)，材料重量可用鮮重 （ g）或干重（ g）及也可用蛋白重（ mg）三種 單位來表示，哪種表示較好？為什么？ 實(shí)驗(yàn)原理 ? 葉綠素易溶于有機(jī)溶劑，不溶于水，所以可以用乙醇或丙酮等有機(jī)溶劑來提取它。根據(jù)葉綠體色素提取液對(duì)可見光譜的吸收，利用分光光度計(jì)在某一特定波長(zhǎng)（選擇紅光區(qū)的吸收峰，以減少類胡蘿卜素對(duì)其的影響）下測(cè)定其消光度，即可用公式計(jì)算出提取液中各色素的含量。 分別測(cè)定在 663nm、 645nm的吸光值，然后根據(jù) LambertBeer定律，計(jì)算出提取液中葉綠素 a和葉綠素 b的濃度。 Ca = Cb = Ct = Ca + Cb = + Ca：葉綠素 a的濃度； Cb：葉綠素 b的濃度； Ct：葉綠素 a+b的濃度 實(shí)驗(yàn)材料 ?不同鹽濃度處理的小麥葉片。 實(shí)驗(yàn)步驟 葉綠素的提?。ㄑ心シǎ? 稱取葉片 ，按下列所示步驟操作： 最后將提取液過濾到 25ml容量瓶中，定容。 注：研缽中先加入少許 80％乙醇，、石英砂、 CaCO3 比色測(cè)定 ? 以 80％乙醇做空白對(duì)照，分別在 663nm、645nm波長(zhǎng)下測(cè)其吸光度，然后帶入公式計(jì)算出色素的濃度后，再按下式計(jì)算組織中各色素的含量 (用每克鮮重或干重所含毫克數(shù)表示 )： ? 葉綠素含量＝色素的濃度（ C) 提取液體積 稀釋倍數(shù) /樣品鮮重 ? 注：如一開始提取液的吸光度大于 1，應(yīng)將其稀釋后再測(cè)；如吸光度小于 1，則不用稀釋，稀釋倍數(shù)為 1。 【 注意事項(xiàng) 】 ? 1 為了避免葉綠素的光分解，操作時(shí)應(yīng)在弱光下進(jìn)行，研磨時(shí)間應(yīng)盡量短些。 ? 2 葉綠體色素提取液不能渾濁。可在 710nm或 750nm波長(zhǎng)下測(cè)量消光度，其值應(yīng)小于當(dāng)波長(zhǎng)為葉綠素 A吸收峰時(shí)消光度值的 5％，否則應(yīng)重新過濾。 ? 3 用分光光度計(jì)法測(cè)定葉綠素含量，對(duì)分光光度計(jì)的波長(zhǎng)精確度要求較高。如果波長(zhǎng)與原吸收峰波長(zhǎng)相差1nm，則葉綠素 A的測(cè)定誤差為 2％，葉綠素 B為 19％，使用前必須對(duì)分光光度計(jì)的波長(zhǎng)進(jìn)行校正。校正方法除按儀器說明書外，還應(yīng)以純的葉綠素 A和 B來校正。 ? 4 (如： 7 12721型等 )測(cè)定葉綠素 A、 B含量時(shí)，因儀器的狹縫較寬，分光性能差，單色光的純度低 (177。 5～ 7nM)，與高中檔儀器如島津 UV－ 1 UV－ 240等測(cè)定結(jié)果相比，葉綠素 A的測(cè)定值偏低，葉綠素 B值偏高，A／ B比值嚴(yán)重偏小。因此，使用時(shí)必須用高檔分光光度計(jì)對(duì)低檔的分光光度計(jì)進(jìn)行校正 思考題 ?1 葉綠素 A、 B在藍(lán)光區(qū)也有吸收峰，能否用這一吸收峰波長(zhǎng)進(jìn)行葉綠素 A、 B的定量分 ? 2 為什么提取葉綠素時(shí)干材料一定要用 80％的丙酮，而新鮮的材料可以用無水丙酮提 電導(dǎo)率的測(cè)定 目的和原理： 電導(dǎo)率是指溶液電阻的倒數(shù)，表示的是溶液的導(dǎo)電性能，可表示水的純凈度。在植物生理中用于檢測(cè)物質(zhì)透過質(zhì)膜的多少，可以反映膜受傷害的程度。 了解鹽分脅迫對(duì)小麥幼苗細(xì)胞質(zhì)膜傷害的情況，掌握電導(dǎo)率的使用方法。 材料、設(shè)備及試劑 1 材料 小麥幼苗葉片 2 設(shè)備 電導(dǎo)儀、冰箱、恒溫箱、真空抽氣裝置（或注射器）、小燒杯、量筒、刀片、打孔器、無離子水（或蒸餾水）。 三、操作方法 （ 1）選取植物葉片，用濕紗布擦去塵土，用刀片切取等 。 （ 2）將材料放入注射器中，堵住其下端開孔，加 20ml無離子水，反復(fù)抽氣，直到葉片完全浸入水中，然后轉(zhuǎn)入潔凈燒杯中，浸提 30min后測(cè)定電導(dǎo)率 用無離子水進(jìn)行電導(dǎo)儀校正后，將電極放入燒杯中，分別測(cè)定組織浸提掖和蒸餾水的電導(dǎo)率。 四、結(jié)果計(jì)算 G小麥幼苗電導(dǎo)率 =（ G組織浸提掖 G蒸餾水 ） /W 電 導(dǎo) 儀 的 使 用 方 法 ，讓本機(jī)預(yù)熱 10分鐘后，安上電極進(jìn)行儀器的校正。 ，先將開關(guān)調(diào)到校正擋。后將溫度補(bǔ)償調(diào)節(jié)到 250C。 。在電導(dǎo)儀顯示屏上，通過電極常數(shù)旋鈕，將電極常數(shù)值調(diào)節(jié)到與電極相符合的值。 ：儀表上有 20ms、 2ms、 200us、 20us四個(gè)量程。這四個(gè)數(shù)值表示測(cè)量的范圍。 20ms表示 0~、 2ms表示0~、 200us表示 0~、 20us表示 0~。因此 ,在測(cè)量末知溶液時(shí)，選擇量程應(yīng)是從高向低轉(zhuǎn)換，這樣避免儀器儀表?yè)p壞。 ms與 us的關(guān)系是 1000倍，所以，最后結(jié)果單位統(tǒng)一為 us/cm。 ，將電極放入浸泡液中進(jìn)行測(cè)量，將校正開關(guān)調(diào)至測(cè)量擋，測(cè)量出浸泡液的電導(dǎo)值。完后，取出電極沖洗，用吸水紙吸干表面水分，再測(cè)下一個(gè)溶液。以此類推，整過操作過程完成。 玻璃器皿 天平、烘箱、生長(zhǎng)箱 離心機(jī) 顯微鏡 熒光顯微鏡 顯微成像系統(tǒng) 解剖顯微鏡 普通顯微鏡 植物組織培養(yǎng) 超凈工作臺(tái) 無土栽培技術(shù)