cr的種類及應(yīng)用ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-08 00:23本頁(yè)面
【正文】 （ 3）基因型 /等位基因分析，例如 SNP檢測(cè)等 （ 4）轉(zhuǎn)基因生物檢測(cè) ，比如可以準(zhǔn)確的檢測(cè)食品中某一種轉(zhuǎn)基因成分的含量。其實(shí)就是跟野生型生物相比該基因表達(dá)量 RTPCR RTPCR有很高的敏感性，可以用來分析不同組織，或是相同組織不同發(fā)育階段中 mRNA表達(dá)狀況的相關(guān)性。 2022/2/3 24 巢式 PCR 巢式 PCR是一種變異的聚合酶鏈反應(yīng) (PCR)，使用兩對(duì)（而非一對(duì)） PCR引物擴(kuò)增完整的片段。第一對(duì) PCR引物擴(kuò)增片段和普通 PCR相似。第二對(duì)引物稱為巢式引物（因?yàn)樗麄冊(cè)诘谝淮?PCR擴(kuò)增片段的內(nèi)部）結(jié)合在第一次 PCR產(chǎn)物內(nèi)部，使得第二次 PCR擴(kuò)增片斷短于第一次擴(kuò)增。巢式 PCR的好處在于，如果第一次擴(kuò)增產(chǎn)生了錯(cuò)誤片斷，則第二次能在錯(cuò)誤片段上進(jìn)行引物配對(duì)并擴(kuò)增的概率極低。因此，巢式 PCR的擴(kuò)增非常特異 。 一般應(yīng)用于動(dòng)物方面。如：病毒，梅毒螺旋體， HIV，腫瘤基因等 巢式 PCR，可以在 106基因組背景下檢測(cè)到一個(gè)拷貝的病毒基因，所以特異性很好，但也是最容易污染的 PCR。 Touchdown PCR 用來避免非特異性序列的擴(kuò)增 PCR中引物的黏合溫度 (annealing temperature)決定了黏合的特異性，溫度越高特異性越強(qiáng)，但過高則不能實(shí)現(xiàn)引物和模板的結(jié)合，而過低會(huì)產(chǎn)生大量非特異性產(chǎn)物。因此進(jìn)行 PCR時(shí)需要尋找合適的黏合溫度。 遞減 PCR開始先設(shè)定一個(gè)比較高的黏合溫度，每個(gè)循環(huán)黏合溫度下降1℃ ，到一個(gè)較低溫度以后每個(gè)循環(huán)的黏合溫度保持不變直到結(jié)束。在剛下降到特異性結(jié)合可以進(jìn)行的最高溫度時(shí)，可以達(dá)到最高的特異性。這樣在起初的幾個(gè)循環(huán)中，特異性擴(kuò)增序列可以相對(duì)非特異性序列多擴(kuò)增若干倍，從而減輕非特異性擴(kuò)增對(duì)結(jié)果的干擾。這種方法可用于省去多次試驗(yàn)最佳黏合溫度的工作。 2022/2/3 29 ? 鑒定基因 ? 親子鑒定 ? 診斷遺傳病 ? 克隆基因 ? 誘變 ? 分析遠(yuǎn)古 DNA ? 鑒定特定表型的突變體基因 ? 比較基因表達(dá)量 PCR的應(yīng)用 2022/2/3 30 參考文獻(xiàn)： 1 吳曉梅 .人工雜交法獲得擬南芥酯酶基因位點(diǎn) AT1G54790/AT2G429雙 突變體及其 PCR鑒定與表型分析 [J](6):12851288 2 陳陽(yáng)婷 .三重 RTPCR快速檢測(cè)多種馬鈴薯病毒的研究 [J]:7577 3 徐君怡 曹際娟 于珂 徐楊 .PCR方法特異性鑒定獅源性制品[J]:4446 4 袁繼紅 .實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)的實(shí)驗(yàn)研究 [J]:2022 5 徐君怡 曹際娟 王秋艷 王長(zhǎng)文 .SYBR Green Ⅰ 實(shí)時(shí)熒光 PCR檢測(cè)鑒定獅制品 [J](4):171174 6 雷群英 .PCR 技術(shù)的種類及其應(yīng)用 [J](4):4447 2022/2/3 31 7 楊坤，優(yōu)化反向 PCR法分離轉(zhuǎn)基因油菜外源 TDNA側(cè)翼序列的研究 [J] ： 50025005 8 王靜，反向 PCR分離側(cè)翼序列技術(shù)研究進(jìn)展 [J]： 200202 9 馬沁沁，水稻花藥絨氈層特異表達(dá)啟動(dòng)子的分離與表達(dá)載體構(gòu)建[J]（ 4）： 200205 10 張于勤，多對(duì)型特異性引物巢式 PCR檢測(cè)乙型肝炎病毒基因型分析[J]（ 13）： 13061308 謝謝
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