過氧化物酶ppt課件-資料下載頁
2025-01-05 19:57本頁面
【正文】 同重量或不同蛋白含量的酶活力并無實際意義，不同酶或同一種酶在不同情況下的比較應有一個重量標準，于是產(chǎn)生出另一個酶的重要參數(shù) ——比活力。 ? 比活力 指單位質(zhì)量的酶蛋白所具有的酶活力 ? 單位 酶活力單位 / mg酶蛋白 ( IU / mg酶蛋白 ) ? 比活力是酶學研究及酶制劑生產(chǎn)制備中經(jīng)常使用的數(shù)據(jù)，用來比較單位重量酶蛋白的催化能力 ( 即酶活力大小 )。 2022/2/2 比活力實際意義 可以說明酶的質(zhì)量好壞，純度高低。不同酶比較時，比活力高，說明其質(zhì)量好，純度高；對同一種酶，可以比較不同批次的質(zhì)量和純度。在酶的生產(chǎn)制備過程，考察比活力尤為重要，隨著該酶不斷被提純，它的比活力升高，說明酶逐步被純化，比如，粗制品總活力很高，蛋白質(zhì)含量也很高 (雜蛋白多 )，比活力低。純化后雖然總活力降低，但蛋白質(zhì)含量也因大量雜蛋白被除去而減少，使比活力升高。酶愈純，比活力愈高，比活力不再升高，酶就相當純了，因此比活力用以衡量生產(chǎn)工藝優(yōu)劣、生產(chǎn)效率高低。它是一個很有實際用途的參數(shù)，是經(jīng)常要測定的數(shù)據(jù)。 2022/2/2 三、操作步驟 每人取 16支試管，按下表平行操作 ： 1 2 3 4 5 6 7 8 標準蛋白質(zhì)溶液 /mL 0 — — 待測蛋白質(zhì)溶液 /mL — — — — — — dH2O/mL 0 甲試劑 /mL 混勻，于室溫放置 10min 乙試劑 /mL 迅速混勻，室溫放置 30min后，以 dH2O為空白，在 640nm處比色 A640nm(1) A640nm (2) A640nm 2022/2/2 * 標準蛋白質(zhì)溶液為牛血清清蛋白 ( 150181。g/mL )。 * 侍測樣品 x為 POD酶原液，輕輕倒置搖勻后用注射器加 50181。L( mL)，去離子水加 mL。 2022/2/2 ： * 定量測定要求各種試劑量取準確，正確規(guī)范使用移液管。 * 乙試劑在酸性條件下穩(wěn)定，而甲試劑在堿性條件下與蛋白質(zhì)反應，生成堿性的銅 蛋白質(zhì)絡(luò)合物溶液，所以在加入乙試劑后，應迅速搖勻(用振蕩器 )，使還原反應發(fā)生在磷鉬酸 磷鎢酸試劑被破壞之前。加一管搖一管，直接取，二人可合作，乙試劑比重大，一定要搖起來。 * 待測樣品所取體積應使其濃度在標準曲線范圍內(nèi)。 2022/2/2 四 . 數(shù)據(jù)處理 1. 制作標準曲線 以標準蛋白質(zhì)含量 ( 15,30,45,60,75181。g )作橫座標，每管減空白的光吸收值(A640nm) 作縱座標，過原點作直線。 2022/2/2 2. 計算樣品 (POD)蛋白質(zhì)濃度 根據(jù) 7號待測樣品管光吸收值從曲線上查出對應的蛋白質(zhì)含量代入下式： 7號樣品對應蛋白質(zhì)含量 ( 181。g ) 10–3 C POD ( mg/mL ) = ———————————— 樣品體積 ( mL ) 2022/2/2 3. 計算比活力 POD比活力（ μmol/min/mg蛋白質(zhì)） 酶活力單位 = —————————————— 酶活力測定所用酶蛋白量 酶活力單位 ( IU ) = ——————————————— C POD( mg/mL ) ( ~ )mL 2022/2/2 ? 注意： 用 Folin酚法測出的是 酶原液蛋白質(zhì)濃度（ mg/mL）， 而計算比活力時所用酶蛋白量應是酶原液蛋白質(zhì)濃度（ mg/mL） 實際測定時用的該酶體 (~)mL
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