[經(jīng)濟(jì)學(xué)]第二節(jié)其他重要工具酶-資料下載頁(yè)
2024-10-16 22:29本頁(yè)面
【正文】 接一般在 16～ 26 ℃ 進(jìn)行。 ? 大腸桿菌 DNA 連接酶催化的連接反應(yīng)中所需要的能量由 NAD+提供， ? T4 DNA連接酶催化的反應(yīng)中所需要的能量由 ATP 提供。其他方面大腸桿菌 DNA 連接酶和 T4 DNA 連接酶的作用機(jī)制相同。 各種連接酶特性的比較 反轉(zhuǎn)錄酶 ? 商品化的反轉(zhuǎn)錄酶有兩種，一種來自禽成髓細(xì)胞瘤病毒 (AMV)，另一種來自大腸桿菌中表達(dá)的 Moloney 鼠白血病病毒 (MoMLV)。 ? 它們均具有：① 依賴于 RNA 的 DNA 聚合酶活性；② RNase H 活性 (即持續(xù)地、特異地降解 DNARNA 雜交鏈中的 RNA 鏈的活性 )；③ 依賴于 DNA 的 DNA 聚合酶活性。 ? AMV 及 MoMLV 反轉(zhuǎn)錄酶在許多方面有差別，如 RNase H 活性強(qiáng)弱，最適反應(yīng)溫度及 pH 等。 ? 反轉(zhuǎn)錄酶的主要作用是將 mRNA 轉(zhuǎn)錄成雙鏈 cDNA，并可用反轉(zhuǎn)錄的 cDNA 進(jìn)行序列分析，再推導(dǎo)出 RNA 序列。 反轉(zhuǎn)錄酶 Taq DNA 聚合酶 ? Taq DNA 聚合酶是一種熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶，因從生存在熱泉水中的耐熱的水生嗜熱菌 (Thermus aquaticus)體內(nèi)分離得到而命名。 ? Taq DNA 聚合酶最適反應(yīng)溫度是 72 ℃ ，但能夠耐受 96 ℃ ，即使在 100 ℃ 處理 5 min 也能具有一半活性。這種熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶的發(fā)現(xiàn)解決了早期 PCR 反應(yīng)中所存在的 DNA 聚合酶在 DNA 變性溫度下也會(huì)變性的問題，使 PCR 反應(yīng)實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化循環(huán)反應(yīng)。這也是 PCR 技術(shù)能被廣泛應(yīng)用的重要原因。 ? 現(xiàn)在市場(chǎng)銷售的 Taq DNA 聚合酶是將這種酶的基因轉(zhuǎn)入 細(xì)胞中表達(dá)的產(chǎn)物。Taq DNA 聚合酶的分子質(zhì)量為 95kD，有強(qiáng)的 5‘→3’DNA 聚合酶活性，但缺乏 3‘→5’ 外切酶活性，能擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)幾千個(gè)堿基對(duì)的 DNA 片段。
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