原生質(zhì)體制備和轉(zhuǎn)化-資料下載頁(yè)
2025-05-13 18:28本頁(yè)面
【正文】 至原生質(zhì)體形成率接近 100%時(shí)停止酶解，用 ，最后將原生質(zhì)體懸于 。 在原生質(zhì)體制備過(guò)程中每隔一定時(shí)間取酶解液制成水封片于顯微鏡下觀察。 L o g o Company Logo 取原生質(zhì)體懸液 1mL與 5mL上層再生培養(yǎng)基混勻，傾倒于下層再生培養(yǎng)基平板上，待培養(yǎng)基凝固后于 28℃ 培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)。用下式計(jì)算再生率： 再生率（ %） =（ AB） /C 100% 式中： A為經(jīng)高滲溶液稀釋的原生質(zhì)體在再生培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落數(shù)； B為經(jīng)無(wú)菌水稀釋的原生質(zhì)體在再生培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的菌落數(shù)；C為顯微鏡下計(jì)數(shù)的原生質(zhì)體數(shù)。 L o g o Company Logo 培養(yǎng)時(shí)間 22h 酶種類(lèi)和濃度 單一蝸牛酶， 3% 酶解時(shí)間 酶解溫度 36℃ 滲透壓穩(wěn)定劑 無(wú)機(jī)鹽溶液有利于原生質(zhì)體的釋放，而糖醇類(lèi)不利于原生質(zhì)體釋放（ NaCl） 原生質(zhì)體制備 L o g o Company Logo 原生質(zhì)體再生 酶種類(lèi)和濃度 單一蝸牛酶， 2% 酶解溫度 30℃ 滲透壓穩(wěn)定劑 糖 ﹑ 醇類(lèi)有利于原生質(zhì)體的再生而無(wú)機(jī)鹽類(lèi)物質(zhì)不利于再生（蔗糖） 再生培養(yǎng)基中蔗糖濃度 康氏木霉原生質(zhì)體制備的最適菌齡為 22h，蝸牛酶濃度為 %，酶解溫度為 30℃ ，酶解時(shí)間為 ，蝸牛酶溶液中的滲透壓穩(wěn)定劑為，再生培養(yǎng)基中的滲透壓穩(wěn)定劑為 L o g o Company Logo 菌絲體培養(yǎng) 60 h,用 1. 5%溶菌酶 + 0. 5%蝸牛酶混合酶液 , pH值6. 0～ 6. 5,溫度 30～ 35 ℃ ,酶解 4 h,以 0. 7mol/L甘露醇為穩(wěn)滲劑 ,此條件下原生質(zhì)體產(chǎn)量可達(dá) 1. 68 107 個(gè) /ml。 PDA再生培養(yǎng)基 , 穩(wěn)滲劑為 0. 5 mol/L蔗糖 ,雙層固體培養(yǎng) ,此條件下原生質(zhì)體再生率可達(dá) 6. 05% ～ 6. 12% L o g o C l i c k to e d i t c o m p a n y s l o g a n .
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