原生質(zhì)體制備和轉(zhuǎn)化(編輯修改稿)
2025-06-18 18:28 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 質(zhì)體的釋放情況 待酶解完全后，加等體積 1mol/L山梨醇溶液，用四層無(wú)菌鏡頭紙過(guò)濾，除去未酶解的菌絲體殘片，收集原生質(zhì)體液 4000r/min室溫離心 10min，收集原生質(zhì)體沉淀 去上清，沉淀用 1mol/L 山梨醇溶液洗滌 2次，每次 4000r/min離心 10min 棄上清將原生質(zhì)體懸浮于 5mL 1mol/L 山梨醇溶液中， 70℃ 冰箱冷凍保存?zhèn)溆? L o g o Company Logo 將制備好的原生質(zhì)體溶液 3200r/min， 4℃ 離心 10min； 棄上清，沉淀重懸于預(yù)冷的 STC溶液中，將原生質(zhì)體濃度調(diào)整為5 106 ~ 5 107個(gè)細(xì)胞 /mL； 將約 2~5181。g質(zhì)粒 DNA(體積不超過(guò) 10181。L)與 100181。L米曲霉原生質(zhì)體置冰上輕輕混勻； 加入 25181。L PTC溶液，冰浴 20min； 加入 1 mL PTC溶液，室溫放置 15min； 最后加入 2mL STC溶液，混勻。 將適量上述轉(zhuǎn)化液涂布于高滲再生基本培養(yǎng)基上， 30℃ 培養(yǎng) 5~7天，所長(zhǎng)出的菌落即為轉(zhuǎn)化成功的菌株；同時(shí)設(shè)置未加質(zhì)粒而轉(zhuǎn)化的原生質(zhì)體涂布平板作為陰性對(duì)照。 L o g o Company Logo 菌絲培養(yǎng)基 葡萄糖含量為 %的葡萄糖 蛋白胨完全培養(yǎng)基。 高滲再生培養(yǎng)基 以 （山梨糖醇）配制的葡萄糖 蛋白胨基本固體培養(yǎng)基。 mol/L 磷酸緩沖液（ ）： mol/L NaH2PO42H2O（約 240mL）和 mol/L Na2HPO412H2O（約 60mL）混合至 pH為 L o g o Company Logo 混合酶液： 2%纖維素酶， 1%蝸牛酶， 5mmol/L 二硫蘇糖醇（ DTT）用 含 mol/L NH4Cl的 ，經(jīng) 濾除菌，保存于 4℃ PTC溶液： 25%PEG8000， 50mmol/L CaCl2， 10mmol/L TrisHCl (pH )
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