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a連接,感受態(tài)細(xì)胞制備,轉(zhuǎn)化及篩選-資料下載頁

2025-05-11 23:52本頁面
  

【正文】 min ,收集菌體。 1) 將 200?l感受態(tài)細(xì)胞 置冰上融化 , 然后加入 3?l DMSO, 混合后 , 加入 10?l連接反應(yīng)液 (含重組質(zhì)粒 ), 溫和混勻 , 置冰上 10分鐘 。 (目的:防止細(xì)胞被脹破 。 ) 2) 42oC, 45秒, 然后 迅速放回冰中 12分鐘。 1. 轉(zhuǎn)化的實驗步驟 3) 加入 1 ml LB培養(yǎng)液 , 37oC, 225rpm搖蕩培養(yǎng) 30min。 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化 4) 6,000rpm, 離心 10秒鐘 , 倒掉上清 , 用剩余的約 200?l LB培養(yǎng)液重懸菌體 。 5) 將殘存菌液輕輕混勻 , 鋪于含有氨基芐青霉素的 LB瓊脂培養(yǎng)板上涂勻 , 室溫放置 510min, 倒置于37℃ 孵箱中培養(yǎng) 1416小時 。 注意事項:轉(zhuǎn)化后的平皿面朝下放置: 防止水蒸氣形成的水滴影響細(xì)菌單菌落的形成。 實驗結(jié)束后整理實驗臺 , 值日生值日 !
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