實(shí)驗(yàn)四、細(xì)胞器分離、制備與觀察-資料下載頁(yè)
2024-10-19 16:03本頁(yè)面
【正文】 00 r／ min離心，可獲得沉淀的葉綠體 (混有部分細(xì)胞核 )。在室溫下進(jìn)行分離要迅速。 ? 某些物質(zhì)在一定短波長(zhǎng)的光 (如紫外光 )的照射下吸收光能進(jìn)入激發(fā)態(tài)，從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)，就能在極短的時(shí)間內(nèi)放射出比照射光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光 (如可見(jiàn)光 )，這種光就稱為熒光。若停止供能熒光現(xiàn)象立即停止。有些生物體內(nèi)的物質(zhì)受激發(fā)光照射后，可直接發(fā)出熒光 (稱為自發(fā)熒光 )，如葉綠素的火紅色熒光。有的生物材料本身不發(fā)熒光，但它吸收熒光染料后同樣也能發(fā)出熒光 (稱為間接熒光 )，如葉綠體吸附吖啶橙后可發(fā)橘紅色熒光。本實(shí)驗(yàn)利用熒光顯微鏡對(duì)發(fā)熒光的葉綠體進(jìn)行觀察。 【 材料 】 菠萊葉片。 【 實(shí)驗(yàn)用品 】 1．試劑：蒸餾水， mol／ L氯化鈉溶液，％吖啶橙。 2．器材：普通離心機(jī)，組織搗碎機(jī)，天平，熒光顯微鏡，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，鑷子，接種針，目鏡測(cè)微尺，物鏡測(cè)微尺，恒溫箱，培養(yǎng)皿，濾紙，試管，試管架，移液管，滴管，燒杯，無(wú)熒光載片，蓋玻片，離心管。 【 實(shí)驗(yàn)步驟 】 1．選取新鮮的菠菜嫩葉，洗擦干后去除葉梗及粗脈，稱 3g于 mol／ L氯化鈉溶液 45mL中，置入組織搗碎機(jī)或研缽中。 2．利用組織搗碎機(jī)低速 (5000 r／ min)勻漿 3~5 min，或研磨成勻漿。 3．用 6層紗布過(guò)濾，濾液盛于燒杯中。 4．取濾液 4 mL在 1000 r／ min下離心 2 min，棄去沉淀。 5．將上清液在 3000 r／ min下離心 5 min．棄去上清液，沉淀即為葉綠體 (混有部分細(xì)胞核 )。 6．沉淀用 mol／ L氯化鈉溶液懸浮。 7．取葉綠體懸液 l滴置于載玻片上，加蓋玻片后用普通光學(xué)顯微鏡觀察。使用熒光顯微鏡觀察時(shí)，將葉綠體懸液滴在無(wú)熒光的載玻片上，再滴加 l滴 ％吖啶橙熒光染料，蓋上無(wú)熒光的蓋玻片后即可觀察。 8．觀察葉綠體的形態(tài)結(jié)構(gòu)、測(cè)量 5~10個(gè)葉綠體的長(zhǎng)軸和短軸、葉綠體發(fā)射熒光的現(xiàn)象。 【 實(shí)驗(yàn)報(bào)告 】 ? 繪制普通光學(xué)顯微鏡下觀察的葉綠體形態(tài)示意圖，記錄熒光顯微鏡觀察的現(xiàn)象，分析結(jié)果。
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