20xx年醫(yī)學(xué)專題—雙染法檢測細胞凋亡(編輯修改稿)
2024-11-17 22:20 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 A、流式細胞儀分析 流式細胞儀激發(fā)光波長采用Ex.= 488nm雙波長激發(fā)，Em.= 510 nm檢測EGFP熒光(FL1 channel)和575 nm的發(fā)射檢測PI。細胞應(yīng)可分成三個亞群：活細胞僅有很低的熒光強度，凋亡細胞有較強的綠色熒光，壞死細胞（包括極晚期凋亡細胞）有綠色和紅色熒光雙重染色。使用流式細胞儀正確分析Annexin VEGFP/PI 雙染的細胞前要求儀器的熒光補償來去除兩種染料激發(fā)光之間的疊加。因為熒光補償設(shè)置與PMT 的電壓直接相關(guān)，所以不同儀器之間的補償不同。建議在實驗開始階段分析經(jīng)Annexin V、PI 分別單染的細胞來調(diào)整熒光補償去除光譜重疊。 根據(jù)未處理細胞空白對照和經(jīng)Annexin V、PI 分別細胞染色后的單染對照的分析設(shè)定十字門的位置。1. 上樣未經(jīng)染色的細胞，在線性FSSS 點圖上顯示細胞并設(shè)門圈出目標細胞群體。2. 建立LogFL1LogFL2（最好用FL3）雙參數(shù)點圖并分析以上光散射圖中設(shè)門的細胞；保證98%的細胞處于在X、Y 軸Log 1 為邊界的左下象限中心區(qū)域。3. 檢測Annexin VEGFP 單染的細
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