20xx年醫(yī)學(xué)專題—動植物細(xì)胞器離心法分離(編輯修改稿)
2024-11-17 22:19 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 鼠肝勻漿 700g離心 (l237。xīn)10 min 沉淀 (細(xì)胞核及質(zhì)膜碎片 ) 上清液 (1) 洗滌 ( mol／ L預(yù)冷蔗糖溶液 5 mL洗滌 2次，每次 1000g離心 15 min。 沉淀 (細(xì)胞核及質(zhì)膜碎片 ) 上清液 (2)→ 與上清(1)合并第十二 頁 ，共二十六 頁 。分離 (fēnl237。)線粒體：混合上清液 10000g離心 10 min沉淀 (線粒體 ) 上清液 (棄去 )洗滌加預(yù)冷的 mol／ L蔗糖溶液 (r243。ngy232。)10 mL， 10000g離心 10 min沉淀 (純化的線粒體 ) 上清液 (棄去 )第十三 頁 ，共二十六 頁 。3．活性鑒定 (ji224。nd236。ng)： (1) 細(xì)胞核：取核沉淀 1滴涂于載玻片，加入 Carnoy固定液 15 min，晾干。 Giemsa染液染 10 min，蒸餾水漂洗數(shù)秒，用濾紙吸干水、用顯微鏡 (40)檢查(jiǎnch225。)，細(xì)胞核呈紫紅色，混雜的胞質(zhì)為淺藍(lán)色碎片。(2) 線粒體： 取線粒體沉淀滴在載玻片上，勿太密。滴加 1％詹鈉斯綠溶液染液， 10 min后用光學(xué)顯微鏡觀察，線粒體藍(lán)綠色，呈小棒狀或啞鈴狀。第十四 頁 ，共二十六 頁 。玉米 (y249。mǐ)線粒體的分離n 從植物細(xì)胞分離線粒體，除了作線粒體功能測定外，在植物細(xì)胞遺傳工程中，常用于分離核外基因 — 線粒體 DNA等目的。n 分離線粒體的方法仍采用均勻 (jūnyn)介質(zhì)中的差速離心。介質(zhì)中 醇代替。 EDTA整合二價陽離子， Ca2＋除去后細(xì)胞間粘著解體，促使組織分散成單個細(xì)胞。牛血清白蛋白 (BSA)能包在細(xì)胞外面，并作為競爭性底物削弱蛋白酶的作用。第十五 頁 ，共二十六 頁 ?！?材料 】玉米黃化幼苗 (水稻、高粱等幼苗均可 )。【 實(shí)驗用品 】1．試劑 (sh236。j236。)：（ 1）分離介質(zhì)： ， 50mmol/L的 Tris鹽酸緩沖液()， 3mmol/LEDTA， (BSA)。 50mmol/L的 TrisHcl緩沖液 ()配法： 甲基氨基甲烷 (Tris)溶液與 42mL ，加水稀釋至 100mL。第十六 頁 ，共二十六 頁 。（ 2）保存液： ()（ 3） 20％次氯酸鈉 (NaClO)溶液 (r243。ngy232。)。（ 4） 1％詹納斯綠 B染液，
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