20xx年醫(yī)學(xué)專題—pc12細胞(編輯修改稿)
2024-11-17 22:17 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 超凈臺內(nèi)安裝好過濾裝置，準備過濾。2．合成培養(yǎng)基的配制DMEM NaHCO3 HEPES DDW溶解定容1L(1)將干粉型培養(yǎng)基DMED溶于300ml的三蒸水中，再用300ml水沖洗包裝內(nèi)面兩次，倒入培養(yǎng)液中，以保證所有干粉都溶解成培養(yǎng)液。(2)參加NaHCO3 HEPES 磁力攪拌器攪拌。完全溶解即可，不易在空氣中攪拌過長時間，大量的CO2融入會影響培養(yǎng)基的pH〔3〕。〔4〕過濾除菌。于超凈臺中濾器過濾。〔5〕濾前、濾后分別取10ml的培養(yǎng)基于15ml的離心管中，置37℃ 24h，檢測是否無菌?！?〕檢測無污染后，2℃－8℃下避光保存。〔7〕使用時參加加抗生素：最終濃度青霉素為100U/ml，鏈霉素100μg/ml。一般市售青霉素為80萬U/瓶，將其溶解在4ml體積內(nèi)，即成最終濃度為100U/ml。市售鏈霉素為100萬U/瓶，將其溶解5ml體積內(nèi)，使其最終濃度為100μg/ml。〔8〕參加小牛血清市場上出售的小牛血清一般做了滅菌處理，但在使用前還應(yīng)做熱滅活處理，即通過加熱的方法破壞補體。將血清放入56℃水浴中30min，其間要不時輕輕晃動，使受熱均勻，防止沉淀析出。根據(jù)培養(yǎng)基量參加小牛血清，使其終濃度為10%。每次配液量以使用兩周左右的量為宜。一次配液不要太多，一是營養(yǎng)成分有損失，二是容易污染。注：DMEM/F12培養(yǎng)基說明書一．【組成成分】成分 mg/L 成分 mg/L 成分 mg
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