【文章內(nèi)容簡介】 注的休藥期為28天,牛肌注和內(nèi)服的休藥期分別為28天和21天。奶牛用藥后的棄乳期為4天。主要經(jīng)膽汁和腎排泄。 豬、牛用藥后14~42天,肝、腎和注射部位的母藥殘留在總殘留中占很低的百分比,同時肌肉(jīr242。u)和脂肪的殘留量低于檢測方法的測定限。豬皮中含相當(dāng)高的母藥殘留,而且降解和消除都比?？?殘留量相應(yīng)亦低。,第二十二頁，共五十七頁。,二、樣品(y224。ngpǐn)處理,常用的磺胺類藥物,除少數(shù)外,一般(yībān)具有以下的基本結(jié)構(gòu):,其化學(xué)性質(zhì)可從四部分結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)(biǎoxi224。n)出來, 即:磺酰胺基(— SO2NHR)、 芳伯氨基(— NH2)、芳環(huán)、N1及N4上的取代基。,(R′=H),兩性化合物,可溶于酸或堿溶液。,磺酰氨基的酸性表現(xiàn)在N1上的活潑氫原子,其酸性的大小取決于N1上的取代基R。R的吸電性越大,則其酸性越強(qiáng)。,第二十三頁，共五十七頁。,化學(xué)性質(zhì)(hu224。xu233。 x236。ngzh236。),本類藥物水溶性較低,易溶于極性有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮、乙腈、氯仿和二氯甲烷,難溶于非極性有機(jī)溶劑。 由于磺胺藥具有酸堿兩性,通過調(diào)節(jié)溶液的pH值(pH7~9),可以使磺胺藥呈不同狀態(tài),即中性分子還是離子分子,從而改變水相和有機(jī)相的分配系數(shù)。 例如,磺胺的中性分子,在二氯甲烷等有機(jī)溶劑中分配系數(shù)大。離子態(tài)分子,則水性溶液中分配系數(shù)大。 生物樣品通過多次液液萃取(cu236。qǔ),可達(dá)到凈化的目的。,第二十四頁，共五十七頁。,提取(t237。qǔ),液體樣品(如牛奶)可用水稀釋過濾后,熒光直接檢測,亦可用水性緩沖液或氯化鈉溶液稀釋,再進(jìn)行凈化處理。 蜂蜜樣品可用水或水性緩沖液稀釋。 組織樣品(如肌肉、腎臟、肝臟)的預(yù)處理相對復(fù)雜些,一般采取均質(zhì)、液液萃取或固相萃取凈化等步驟。 液液萃取操作(cāozu242。)煩瑣,而蛋白沉淀后直接進(jìn)樣,雖操作簡便、并具有較高的回收率,但對色譜柱的損害較為嚴(yán)重。,第二十五頁，共五十七頁。,溶劑(r243。ngj236。)提取,溶劑提取時,應(yīng)盡可能使組織中結(jié)合態(tài)的殘留物溶解,并且除去大部分的蛋白質(zhì)。 一般可采用酸性水溶液、乙腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、丙酮或混合溶劑等極性溶劑進(jìn)行提取。 二氯甲烷中加入離子對試劑四丁基銨(pH10),對魚肉(yr242。u)和動物組織的提取,發(fā)現(xiàn)磺胺二甲氧嘧啶和奧美普林的提取率很高。 另外,提取過程中加入無水硫酸鈉可脫去組織樣品中的水分,有助于樣品的充分提取。,第二十六頁，共五十七頁。,凈化(j236。nghu224。),初提取液中含大量的內(nèi)源性干擾雜質(zhì),在痕量分析時會干擾組分的測定,因此還需要凈化處理。 凈化方法有液液萃取、固相萃取、基質(zhì)固相分散(fēns224。n)、在線痕量富集、液相色譜、在線透析和超臨界流體萃取等。 有時為了獲得高的凈化效果,幾種方法相結(jié)合應(yīng)用。,第二十七頁，共五十七頁。,液液萃取(cu236。qǔ),液液萃取盡管操作煩瑣、耗費(fèi)溶劑,但在所有凈化方法中應(yīng)用最廣。 通過調(diào)節(jié)樣液的pH值,使磺胺類藥物有選擇性地在有機(jī)相與水相之間進(jìn)行分配。 例如,有機(jī)相提取液中的磺胺類藥物可以被強(qiáng)酸溶液或堿性(jiǎn x236。nɡ)溶液抽提,若將水相提取液調(diào)節(jié)pH至5.1~5.6,可用二氯甲烷或乙酸乙酯進(jìn)行再抽提。 離子對提取法亦有應(yīng)用,例如,水相提取液調(diào)節(jié)pH至10~11,加入四丁基銨離子對試劑,形成磺胺類離子對,可以被二氯甲烷提取。 用正己烷或乙醚進(jìn)行液液萃取,可以脫脂肪。,第二十八頁，共五十七頁。,固相萃取(cu236。qǔ),由于(y243。uy)甲氧芐啶常和其他磺胺藥物同時使用,而它們具有不同的pKa和溶劑親和力,難以在給定的pH值和溶劑系統(tǒng)中同時提取,宜采用固相萃取法(SPE)。 常用的SPE柱,如C18和C硅膠柱、離子交換柱、Florisil柱和堿性氧化鋁柱等。 該法操作較為簡便、并對生物樣品具有較高的“凈化”能力,可提高方法的提取回收率和精密度。亦可將幾種小柱串聯(lián)應(yīng)用,可獲得更高的凈化效果。 基質(zhì)固相分散法目前只使用C18吸附劑,該方法簡便、提取率和凈化能力均高,已應(yīng)用于魚肉、牛肉、豬肉和牛奶樣品的預(yù)處理。,第二十九頁，共五十七頁。,柱切換(qiē hu224。n)技術(shù),在線痕量富集技術(shù)可分離/凈化牛奶(ni nǎi)樣品中9種磺胺類藥物： 磺胺類藥物在預(yù)富集柱RPC18(10181。m)中被保留濃縮,干擾雜質(zhì)用淋洗劑洗去后,預(yù)柱中的磺胺類藥物再用洗脫液洗脫,進(jìn)入分析柱中分離。 有研究者將TSK凝膠滲透柱和PLRPS預(yù)富集柱串聯(lián)使用,用于凈化豬組織中的磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑和甲氧芐啶。,第三十頁，共五十七頁。,在線(z224。i xi224。n)透析,采取在線透析、富集的方法,可測定動物源食品(肌肉、牛奶和蛋)中的13種磺胺類藥物： 利用纖維素膜選擇性滲過分析物,到達(dá)預(yù)富集柱(C1XAD2或XAD4),干擾(gānrǎo)雜質(zhì)用淋洗劑洗去,濃縮后的分析物被洗脫后,進(jìn)入分析柱分離。,第三十一頁，共五十七頁。,超臨界流體(litǐ)萃取,超臨界流體萃取法被用于豬腎臟(sh232。nz224。ng)樣品中甲氧芐啶和3種類固醇激素的提取分離。 CO2提取時,分析物被保留在柱的進(jìn)樣端,大部分內(nèi)源性干擾物被洗去后,分析物和一些極性干擾物用加入改性劑的CO2洗脫。,第三十二頁，共五十七頁。,三、分析方法,生物(shēngw249。)樣品中磺胺類藥物的分析,光譜法(分光光度法、熒光光譜法)和色譜法（薄層色譜、氣相色譜、液相色譜、超臨界流體色譜）具有靈敏、快速、方便等優(yōu)點(diǎn)。 例如：分光光度法測定牛組織中的磺胺甲嘧啶，蜂蜜中的磺胺噻唑，奶中的乙?；前?、 N乙?；前范奏奏ぃ?薄層色譜法測定動物組織、豬肝、奶中的磺胺甲嘧啶，蜂蜜中的磺胺噻唑。,第三十三頁，共五十七頁。,光譜法,光譜法主要用于樣品中個別磺胺類藥物的分析,最常用的方法為重氮化偶合反應(yīng)分光光度法。 無N4取代基的磺胺類藥物,或N4為酰氨基的磺胺類藥物,經(jīng)水解,在酸性介質(zhì)中經(jīng)重氮化后,可在堿性中與酚類(如β萘酚、麝香草酚)偶合,在中性中與變色酸偶合,或在弱酸性中與胺類偶合呈色,于空白校正下,在一定波長處測其吸收度。與標(biāo)準(zhǔn)品對照,即可測定其含量。 最常