20xx年醫(yī)學(xué)專題—單細(xì)胞測序技術(shù)-(編輯修改稿)
2024-11-05 02:29 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 使新獲得的擴(kuò)增產(chǎn)物形成閉合的環(huán)狀分子。由于這些環(huán)狀分子不能夠被進(jìn)一步擴(kuò)增，所以整個擴(kuò)增過程就變成了線性擴(kuò)增。然后再進(jìn)行常規(guī)的PCR擴(kuò)增，由于此時采用的模板更加均一，所以在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時就不易造成較大的差異。,兩種擴(kuò)增技術(shù)(j236。sh249。)：MALBAC方法和MDA方法,MDA方法是使用隨機(jī)引物，讓這些引物與基因組廣泛結(jié)合，同時使用一種特定的聚合酶，這種聚合酶能夠置換與它自身附著在同一模板上的DNA鏈片段，形成一種反復(fù)分支結(jié)構(gòu)(ji233。g242。u)，擴(kuò)增出大段的DNA。,第五頁，共十八頁。,基因組模板DNA,擴(kuò)增引物,Phi 29 DNA聚合酶,MALBAC法擴(kuò)增,第六頁，共十八頁。,5’端有通用擴(kuò)增序列(x249。li232。)的DNA片段,第一個循環(huán)(xnhu225。n)下來，得到的是一批5’端有通用擴(kuò)增序列的DNA片段,第七頁，共十八頁。,5’端有通用序列(x249。li232。)，3’端有與通用序列互補(bǔ)的序列的DNA片段,在第二個循環(huán)(xnhu225。n)完成后，所產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物中大部分是5’端有通用序列，而3’端有與通用序列互補(bǔ)的序列的這些片段,共循環(huán)(xnhu225。n)5次,第八頁，共十八頁。,58℃退火(tu236。 huǒ),MALBAC的巧妙之處，就是在每個循環(huán)的最后，加了一步58度退火，這一退火過程，他讓完整擴(kuò)增的產(chǎn)物的兩端(liǎnɡ duān)發(fā)生鏈內(nèi)雜交,第九頁，共十八頁。
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