【文章內(nèi)容簡介】 兩面是平面。適用于冷凍切片和輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)的石蠟切片。雙凹型：刀身兩側(cè)均有凹度，適用于輪轉(zhuǎn)式石蠟切片。一次性刀片：需配置專用刀架。（二）刀背套與刀柄：刀背套供磨刀時(shí)用，刀背套有金屬和塑料兩種。刀柄有木制及塑料制兩種。（三）磨刀與被刀：手工磨刀法：①磨刀前用軟布試凈磨刀石面塵垢；②裝上刀背和刀柄，滴磨刀油于磨刀石上；③右手緊握刀柄，左手緊按刀背另一端，刀刃向前，逐漸推動刀片至磨刀的一端，從右到左全部磨完。被刀：用被刀皮革被刀，與磨刀的動作相反；三、石蠟切片制作 P60（一）切片前的準(zhǔn)備：修整蠟塊，然后置于冷水或冰箱中冷卻，以增加硬度；準(zhǔn)備毛筆、眼科彎鑷子；載玻片均勻涂上薄層蛋清甘油，占2/3；接通攤片機(jī)電源，調(diào)節(jié)攤片（42℃～48℃）烤片（6070℃左右）的溫度；（二）快速石蠟切片 P63 快速石蠟切片時(shí)，組織取材應(yīng)薄，厚度一般不超過2mm，以利脫水，將組織塊埋入預(yù)制的蠟塊內(nèi)，冷卻硬化后方可切片（取材、脫水、透明浸蠟、包埋見）。切片撈至載波片上，用酒精燈略加烘烤，再入二甲苯脫蠟，經(jīng)95%酒精后即刻入水水化，隨后即可進(jìn)行常規(guī)快速蘇木素伊紅染色。（三）冷凍切片制作 P64 組織經(jīng)過冷凍后，其內(nèi)的水分結(jié)冰，使組織變硬，有利于切成薄片。一、設(shè)備要求：（一）冷凍切片機(jī)：一般由轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)或推拉式切片機(jī)加上制冷裝置而成：二氧化碳制冷器；半導(dǎo)體制冷器；（二）恒冷箱冷凍卻片機(jī)：利用壓縮機(jī)通過制冷劑循環(huán)制冷。冰凍切片機(jī)二、制作過程（一）取材、固定：選取有代表性的組織制片，厚度1～2mm。一般病理急診、組織化學(xué)顯示酶和免疫病理學(xué)進(jìn)行熒光抗體研究等，多數(shù)都用新鮮組織直接冷凍，切片后再進(jìn)行固定、染色或直接染色或孵化。采用二氧化碳冷凍設(shè)備制作須先固定。（二）冷凍切片方法：恒溫箱冷凍切片法（1）開機(jī)預(yù)冷：切片前2～3小時(shí)，所需溫度如下： 各種新鮮組織冷凍切片參考溫度（℃）腦、淋巴結(jié)、肝、腎、脾、睪丸1216 肌肉、腎上腺、甲狀腺、子宮、卵巢1822 乳腺、皮膚、前列腺2228（2）放入、速凍、修整組織，待恒冷箱內(nèi)溫度降至要求溫度后，將組織用OT包埋，再速凍1～2分鐘，裝于機(jī)樣本夾上，修平；（3）調(diào)節(jié)抗卷板，以與刀刃平行對齊；（4）切片：所需厚度為4181。m～8181。m，用毛筆展平，貼于潔凈玻片上，晾干或吹干后染色；（5）切片后處理：清潔保養(yǎng)。半導(dǎo)體冷凍切片法二氧化碳冷凍切片法（三）冷凍切片粘片法蛋白甘油粘片法：按石蠟切片的粘片法處理，但溫度不宜超過40℃?？靖珊蠹慈〕?，70%酒精和自來水洗后即可染色。Lillie明膠粘片法：切片放入1%明膠水溶液數(shù)分鐘，撈到載玻片上，5%甲醛水溶液固定5分鐘，水洗10分鐘，即可染色。酒精明膠粘片法：%%明膠溶液（用40%酒精配制）數(shù)分鐘，用載玻片撈起后，室溫干燥，入氯仿1分鐘，經(jīng)95%和75%酒精洗去氯仿，再經(jīng)蒸餾水洗后即可染色。三、注意事項(xiàng)冷凍切片的組織不用固定；組織盡可能新鮮，不能用濕的鹽水紗布包裹和放入10℃冰箱內(nèi)緩慢冷卻，否則組織內(nèi)水分可逐漸析出形成水晶，造成組織結(jié)構(gòu)破壞；冷凍包埋劑應(yīng)適量；組織太小，不能做冷凍切片；冷凍時(shí)間太久的組織不能馬上切片，以免損傷切片刀；一般來說骨組織和鈣化組織不能做冷凍切片。觀察第七章組織切片染色技術(shù)第一節(jié) 病理切片染色概述 P68一、概念：用染液對組織切片進(jìn)行處理，使組織中的不同成分被染上相應(yīng)的顏色，產(chǎn)生不同的折射率，以利于顯微鏡觀察和分析。三、染色的原理染色就是染色劑和組織細(xì)胞相結(jié)合的過程。（一）染色的化學(xué)反應(yīng)：組織細(xì)胞的酸性物質(zhì)與堿性染料的陽離子相結(jié)合，堿性物質(zhì)與酸性染料的陰離子相結(jié)合。具有酸性的細(xì)胞核被堿性蘇木素液所染色，堿性的胞質(zhì)與酸性染料伊紅所染色。（二）染色的物理作用：滲透作用：染料進(jìn)入組織；吸附作用：把另一種物質(zhì)的分子、原子、離子集中在界面上的過程；吸收作用（溶解作用）。三、常用染料概述：（一）染料的性質(zhì)：有色的無機(jī)物或有機(jī)化合物發(fā)色團(tuán)：能使染料分子產(chǎn)生顏色的基團(tuán)，叫發(fā)色團(tuán)；助色團(tuán)：能使染料分子顏色加深，并與被染物質(zhì)分子形成親和力的基團(tuán)。（二）染料的分類：據(jù)染料來源：天然、合成染料和無機(jī)化合物根據(jù)染料化學(xué)反應(yīng)：酸性、堿性和中性染料據(jù)染色對象：（1）組織染料： 1）結(jié)締組織和肌纖維染料：有膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、彈力纖維和肌原纖維等染料； 2）神經(jīng)組織的染料：尼氏體、神經(jīng)軸突、神經(jīng)髓鞘、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞等染料；（2）細(xì)胞染料：細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)染料等常用染色劑簡介見附錄一。五、常用染色術(shù)語的概念一、普通染色：最常應(yīng)用的是蘇木素伊紅染色法，簡稱HE染色。二、特殊染色：特染是為了顯示特定的組織結(jié)構(gòu)或其他的特殊成分。三、單一染色：選用一種染料染色。四、復(fù)染色：用兩種不同性質(zhì)的染料染色方法。五、多種染色法：用兩種以上染料的染色法。第三節(jié) 染色前后的處理 P74一、染色前的處理：脫蠟至水：必須經(jīng)過二甲苯脫蠟、各級酒精（100%、95%、85%、75%）至水洗的過程。脫汞鹽結(jié)晶：%～%碘酒精處理5～15分鐘，使汞鹽沉淀物溶解。脫甲醛色素：在切片脫蠟至水后，用Verocay液（1%氫氧化鉀水溶液1ml，80%酒精100ml）處理10分鐘，然后流水沖洗5分鐘再常規(guī)染色。（二）染色后的處理：分化作用：必須用1%鹽酸酒精脫去所吸附的染料。藍(lán)化作用：分化后，用堿性水使細(xì)胞核變成藍(lán)色。染色后的脫水：低度到高度酒精逐步脫水。染色后的透明：透明劑用二甲苯。三、封固：封固劑：（1）甘油明膠封固劑配制方法：明膠10g，蒸餾水60ml，甘油70ml。（用前將甘油明膠置于溫箱內(nèi)融化后即可封片）。（2）中性樹膠（二甲苯樹膠液）：屬油性封固劑，組織切片需徹底脫水、透明。優(yōu)良封固劑，可直接封片。七、染色的注意事項(xiàng)（1）具備實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)備和染色準(zhǔn)備工作（2）正確完成固定、脫水、透明、脫蠟步驟；（3）染色過程中，既要按書本的方法進(jìn)行操作，又要根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行靈活運(yùn)用。第八章 組織切片常規(guī)染色技術(shù) 第一節(jié) 常規(guī)染色的概念一、染色原理（一）蘇木素染色原理：蘇木紅和鋁結(jié)合形成帶正電的 藍(lán)色色精，帶負(fù)電的細(xì)胞核與帶正電的藍(lán)色色精以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木素在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。（二）伊紅染色原理：伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料。在伊紅Y染料液中加入醋酸，使胞質(zhì)中蛋白質(zhì)帶正電荷，可被帶負(fù)電的伊紅染料染色，從而使細(xì)胞質(zhì)及紅細(xì)胞等染成紅色或粉紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對比。二、染液的配制 P80（一）蘇木素液：從蘇木素的樹中提煉的天然染料。Harris蘇木素液：最常用。蘇木素 1g 蒸餾水 200ml 無水酒精 10ml 氧化汞 硫酸鋁鉀 20g 配置方法見書81頁。染色3～4分鐘。保存時(shí)間為一年。（二）伊紅染液：%伊紅酒精染液:，95%酒精100ml。染色時(shí)間1～3分鐘。水溶性伊紅酒精液： 沉淀酸化伊紅Y酒精液：Mayer蘇木素改良配法：（1）A液：蘇木素2g，無水酒精40ml加熱溶解；（2）B液：硫酸鋁鉀100g，蒸餾水600ml，稍加熱使硫酸鋁鉀在水中溶解，再將A與B液混合2分鐘。用蒸餾水補(bǔ)足600ml，加入400mg碘酸鈉充分混勻，蘇木素染液呈紫紅色即可。染色時(shí)間為10～20分鐘。Ehrlich蘇木素液：蘇木素2g，無水酒精100ml，甘油100ml，硫酸鋁鉀15g，蒸餾水100ml，冰醋酸10ml。（染色時(shí)間為10～20分鐘）。Gill改良蘇木素液：蘇木素2g，無水酒精250ml，蒸餾水750ml，,冰醋酸20ml。染色時(shí)間為5分鐘。（三）%～1%鹽酸酒精分化液：鹽酸 ～1ml, 75%酒精99ml。此液用一段時(shí)間后需要延長時(shí)間或更換液體，新液體分化時(shí)間要短。（四）藍(lán)化液：“藍(lán)化”是指蘇木素液染細(xì)胞核后，通過鹽酸酒精分化，切片由酸性轉(zhuǎn)入弱堿性液體，使之變藍(lán)的過程。50℃溫水稀氨水（1%氫氧化銨液）3 蒸餾水 100ml，氨水1ml。三、染色方法 P83（一）人工操作蘇木素伊紅染色方法：脫蠟至水：（1）二甲苯Ⅰ脫蠟（脫蠟25分鐘）；（2）二甲苯Ⅱ（25分鐘）；（3）無水酒精Ⅰ（12分鐘）；（4）95%酒精1分鐘；（5）85%酒精1分鐘；（6）75%酒精1分鐘；（7）自來水洗2分鐘；蘇木素染色：蘇木素液染色510分鐘；自來水洗1分鐘；分化返藍(lán)：%～1%鹽酸酒精分化數(shù)秒至30分鐘呈紫紅色；自來水1分鐘；用溫水(50℃)藍(lán)化5～15分鐘(或稀氨水藍(lán)化30秒，自來水洗5～10分鐘)；伊紅染色：水溶性伊紅可直接入伊紅液，1分鐘；自來水洗1分鐘；脫水、透明：（1）85%酒精（20秒）；（2）95%酒精Ⅰ（1分鐘）；（3）無水酒精Ⅰ（1分鐘）；（4）二甲苯Ⅰ（1～2分鐘）；（5）二甲苯Ⅱ（1～2分鐘）。封固：（1）用中性樹膠封片；（2）附貼標(biāo)簽可書寫病理編號。（二）冷凍切片HE染色：冷凍切片貼片后，用95%酒精和冰醋酸5ml的混合液固定1分鐘，自來水洗30秒～1分鐘，HE染色。（三）快速石蠟切片染色：脫蠟至水、HE染色第三節(jié) 染色中常見問題及注意事項(xiàng) P85 HE染色結(jié)果：細(xì)胞核被蘇木素染成明顯的藍(lán)色；細(xì)胞質(zhì)被伊紅染成紅色。第九章 組織切片特殊染色 P87 為了顯示特定的組織結(jié)構(gòu)或組織細(xì)胞特殊成分，采用特定的染料和方法對組織切片進(jìn)行染色。第一節(jié) 結(jié)締組織染色 P88一、膠原纖維染色Van Gieson染色法（簡稱VG染色）（書上無）染料配制：（1）鐵蘇木素液：見Masson三色染色（2）Van Gieson苦味酸酸性品液：甲液：%苦味酸飽和水溶液90ml，乙液 ： 1%酸性品紅水溶液10ml。兩液提前配制，臨用前混合使用。染色步驟：（1）切片脫蠟至水（2）蒸餾水洗（3）Weigert鐵蘇木素液染5～10分鐘（4）自來水洗2分鐘（5）%鹽酸酒精分化（6）自來水洗至變藍(lán)再用蒸餾水洗（7）Van Gieson液染色3～5分鐘（8）去染液，用95%酒精分化脫水（9）無水酒精脫水（10）二甲苯透明（11）中性樹膠封固。染色結(jié)果：膠原纖維紅色,肌纖維黃色, 、膠原纖維染色的應(yīng)用 P88（1）對梭形細(xì)胞腫瘤來源、性質(zhì)提供診斷和鑒別診斷的依據(jù)；（2）顯示各種組織、器官病變時(shí)的修復(fù)情況與纖維化程度，如肝穿組織中纖維組織的含量與分布的觀察；（3）鑒定心肌壞死后疤痕的形成；（4）鑒別心內(nèi)膜彈力纖維增生癥與心內(nèi)膜心肌纖維化。三、網(wǎng)狀纖維染色 Gomori銀染法: P92染液配制：銀氨溶液：甲液：,蒸餾水100ml；乙液:,蒸餾水100ml染色步驟：（1）切片脫蠟至水（2）高錳酸鉀氧化液（,蒸餾水95ml,再加3%硫酸5ml)5分鐘(3)水洗1分鐘(4)2%草酸漂白2分鐘,水洗2分鐘(5)2%硫酸鐵銨媒染2分鐘(6)蒸餾水充分洗(7)氨銀溶液染色1分鐘(8)蒸餾水洗3次(9)20%福爾馬林液還原5分鐘(10)蒸餾水洗2次(11)%氯化金液中調(diào)色2分鐘,蒸餾水洗2次(12)2%硫代硫酸鈉固定2分鐘,自來水、蒸餾水洗（13）必要時(shí)用VG或伊紅復(fù)染（14）無水酒精脫水（15）二甲苯透明（16）中性樹脂封固。染色結(jié)果：網(wǎng)狀纖維呈黑色，膠原纖維呈紅色。網(wǎng)狀纖維染色的應(yīng)用（1）區(qū)分上皮性與非上皮性腫瘤；（2）區(qū)分血管內(nèi)皮瘤與血管外皮瘤；（3）判斷原位癌與早期浸潤癌；（4）觀察肝臟病變處的網(wǎng)狀支架塌陷或增生的情況，判斷病變性質(zhì)、程度及發(fā)展與轉(zhuǎn)歸。四、多色染色： P93（一）Masson三色染色法： P93染液配制：（1）麗春紅酸性品紅液：，冰醋酸1ml，蒸餾水99ml（先配好醋酸溶液后，分別溶解麗春紅或酸性品紅）；亮綠液：，冰醋酸1ml，蒸餾水99ml。（2）苯胺藍(lán)液：苯胺藍(lán)2g，冰醋酸2ml，蒸餾水加至100ml。（3）Weigert鐵蘇木素液：甲液：蘇木素1g，95%酒精或無水酒精100ml；乙液：29%三氯化鐵水溶液4ml，純鹽酸1ml，蒸餾水95ml（臨用前取甲、乙兩液混合即可，24小時(shí)內(nèi)使用有效。）Masson三色的染色步驟：（1）切片脫蠟至蒸餾水；（2）Weigert鐵蘇木素染色5～10分鐘；（3）流水稍洗；（4）鹽酸酒精分化；（5）流水沖洗數(shù)分鐘；（6）麗春紅酸性品紅液染色5分鐘；（7）蒸餾水稍沖洗；（8）1%磷鉬酸水溶液處理5分鐘，鏡下見肌肉纖維呈紅色，膠原纖維呈淡紅色即可；（9）不經(jīng)水而直接用苯胺藍(lán)液或亮綠液染5分鐘；（10）1%冰醋酸處理1分鐘；（11）95%酒精、無水酒精脫水；（12）二甲苯透明；（13）中性樹膠封固。染色結(jié)果：膠原纖維呈藍(lán)色（用苯胺藍(lán)染）或綠色（用亮綠染），肌纖維、細(xì)胞質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)褐色。（二）Mallory三色染色法 P94染液配制：（1）%酸性品紅水溶液；（2）苯胺藍(lán)橙黃G液：，橙黃G 2g，磷鎢酸1g，蒸餾水100ml。（先將1%的磷鎢酸溶液配好，一半用于溶解苯胺藍(lán)，另一半用于溶解橙黃G，加熱溶解，冷卻后分別過濾，可長期保存。臨用前將兩液混合）。（3）重鉻酸鉀液；染色步驟：（1）切片脫蠟至水；（2）Zenker固定液固定1小時(shí)；（3）充分水洗；（4）%碘酒精處理5～10分鐘；（5）%硫代硫酸納處理2～5分鐘；（6）充分水洗，再用蒸餾水浸洗；（7）酸性品紅液染5分鐘；（8）水洗、蒸餾水洗；（9）苯胺藍(lán)橙黃G液染20～30分鐘；（10）直接95%酒精快速分化；（11）無水酒精脫水；（12）二甲苯透明；（13）中性樹膠封固。染色結(jié)果：膠原纖維、網(wǎng)狀纖維呈藍(lán)色，心機(jī)纖 維橘紅色，紅細(xì)胞呈淺黃色，細(xì)胞核呈黑色。結(jié)締組織復(fù)合染色的應(yīng)用（1）區(qū)分各種