20xx年醫(yī)學(xué)專題—三維細(xì)胞培養(yǎng)簡(jiǎn)介--閆輝20xx109(編輯修改稿)
2024-11-04 14:17 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 十一頁(yè)，共二十五頁(yè)。,膠上培養(yǎng)模式的建立方法 在24 孔培養(yǎng)板中每孔加入(jiār249。)75 181。l冰上過(guò)夜解凍的Matrigel，置于37℃孵箱中 孵 育15min以上使Matrigel 聚集。同時(shí)胰酶消化常規(guī)培養(yǎng)的正常鼻咽細(xì)胞及其高轉(zhuǎn)移潛能亞株58F, 計(jì)數(shù)后離心收集細(xì)胞.然后把細(xì)胞懸浮于含2%Matrigel的KeratinocyteSFM培養(yǎng)液中，細(xì)胞濃度為2*104/ml用 加樣槍吹打成單個(gè)細(xì)胞后, 每孔加入400 181。l 細(xì)胞懸液于已經(jīng)凝固的Matrigel上，置于含5%CO2的37℃孵箱中培養(yǎng)，每34 天換新鮮培養(yǎng)液[2]。,第十二頁(yè)，共二十五頁(yè)。,三明治培養(yǎng)模型的建立方法 三明治模式前期工作和凝膠上模式相同,不同之處在于凝膠上的細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)融合至(70、80)%左右時(shí),吸去培養(yǎng)液,用無(wú)菌PBS沖洗兩次后添加(tiān jiā)第二層膠(200181。l/孔),在37℃下培養(yǎng)30min使其凝固后,再在膠原凝固面上添加培養(yǎng)液[3]。,第十三頁(yè)，共二十五頁(yè)。,三種(sān zhǒnɡ)模型的簡(jiǎn)單解釋,第十四頁(yè)，共二十五頁(yè)。,4.3不同(b249。 t243。nɡ)模型的比較,對(duì)于膠上培養(yǎng)模式，細(xì)胞可以黏附于細(xì)胞外基質(zhì)表面并向再造基質(zhì)膠中生長(zhǎng)，但是只有貼近 Matrigel 膠的細(xì)胞才能得到固體細(xì)胞外基質(zhì)的支撐，其他不能貼近再造基質(zhì)膠的細(xì)胞仍然處于 2D 培養(yǎng)條件下，在培養(yǎng)過(guò)程中不能形成完全的立體克??；對(duì)于膠內(nèi)培養(yǎng)模式，細(xì)胞直接重懸于完全融化的 Matrigel 膠條件下，細(xì)胞生長(zhǎng)于完全固態(tài)的細(xì)胞外基質(zhì)中，可以很好地模擬體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)微環(huán)境，在培養(yǎng)過(guò)程中形成了巨大的、無(wú)極性的球狀細(xì)胞克隆。所以大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)建立三維模型采用膠內(nèi)培養(yǎng)模式，但相對(duì)來(lái)說(shuō)膠上培養(yǎng)模式簡(jiǎn)單一些，對(duì)于操作的要求低一些。三種模型共同的缺點(diǎn)(quēdiǎn)是無(wú)法對(duì)細(xì)胞直接利用顯微鏡進(jìn)行連續(xù)的觀察，需要對(duì)某一特定時(shí)間的膠原塊進(jìn)行固定制作電鏡標(biāo)本。,第十五頁(yè)，共二十五頁(yè)。,B C,A 2D細(xì)胞培養(yǎng)模型 B細(xì)胞生長(zhǎng)(shēngzhǎng)于 Matrigel 膠表面 C細(xì)胞重懸于 Matrigel 膠中 [4],第十六頁(yè)，共二十五頁(yè)。,5三維細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(j236。sh249。)的應(yīng)用,5.1腫瘤(zhǒngli)生物學(xué) 三維細(xì)胞培養(yǎng)已被廣泛運(yùn)用到腫瘤學(xué)研究,在腫瘤的實(shí)驗(yàn)性治療、腫瘤的侵襲
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