20xx年醫(yī)學專題—三維細胞培養(yǎng)簡介--閆輝20xx109(編輯修改稿)
2025-11-04 14:17 本頁面
【文章內容簡介】 十一頁，共二十五頁。,膠上培養(yǎng)模式的建立方法 在24 孔培養(yǎng)板中每孔加入(jiār249。)75 181。l冰上過夜解凍的Matrigel，置于37℃孵箱中 孵 育15min以上使Matrigel 聚集。同時胰酶消化常規(guī)培養(yǎng)的正常鼻咽細胞及其高轉移潛能亞株58F, 計數(shù)后離心收集細胞.然后把細胞懸浮于含2%Matrigel的KeratinocyteSFM培養(yǎng)液中，細胞濃度為2*104/ml用 加樣槍吹打成單個細胞后, 每孔加入400 181。l 細胞懸液于已經凝固的Matrigel上，置于含5%CO2的37℃孵箱中培養(yǎng)，每34 天換新鮮培養(yǎng)液[2]。,第十二頁，共二十五頁。,三明治培養(yǎng)模型的建立方法 三明治模式前期工作和凝膠上模式相同,不同之處在于凝膠上的細胞經培養(yǎng)融合至(70、80)%左右時,吸去培養(yǎng)液,用無菌PBS沖洗兩次后添加(tiān jiā)第二層膠(200181。l/孔),在37℃下培養(yǎng)30min使其凝固后,再在膠原凝固面上添加培養(yǎng)液[3]。,第十三頁，共二十五頁。,三種(sān zhǒnɡ)模型的簡單解釋,第十四頁，共二十五頁。,4.3不同(b249。 t243。nɡ)模型的比較,對于膠上培養(yǎng)模式，細胞可以黏附于細胞外基質表面并向再造基質膠中生長，但是只有貼近 Matrigel 膠的細胞才能得到固體細胞外基質的支撐，其他不能貼近再造基質膠的細胞仍然處于 2D 培養(yǎng)條件下，在培養(yǎng)過程中不能形成完全的立體克??；對于膠內培養(yǎng)模式，細胞直接重懸于完全融化的 Matrigel 膠條件下，細胞生長于完全固態(tài)的細胞外基質中，可以很好地模擬體內腫瘤細胞生長微環(huán)境，在培養(yǎng)過程中形成了巨大的、無極性的球狀細胞克隆。所以大多數(shù)的實驗建立三維模型采用膠內培養(yǎng)模式，但相對來說膠上培養(yǎng)模式簡單一些，對于操作的要求低一些。三種模型共同的缺點(quēdiǎn)是無法對細胞直接利用顯微鏡進行連續(xù)的觀察，需要對某一特定時間的膠原塊進行固定制作電鏡標本。,第十五頁，共二十五頁。,B C,A 2D細胞培養(yǎng)模型 B細胞生長(shēngzhǎng)于 Matrigel 膠表面 C細胞重懸于 Matrigel 膠中 [4],第十六頁，共二十五頁。,5三維細胞培養(yǎng)技術(j236。sh249。)的應用,5.1腫瘤(zhǒngli)生物學 三維細胞培養(yǎng)已被廣泛運用到腫瘤學研究,在腫瘤的實驗性治療、腫瘤的侵襲
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