【文章內(nèi)容簡介】 子在人類許多癌細胞中表達都降低表明它或許在腫瘤細胞的侵襲和轉移[10]及維持正常細胞的表型中起重要作用[11]、T/H—鈣粘蛋白與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有著密切的聯(lián)系，也許它會為腫瘤的診斷和治療帶來新的39。契機、T—鈣粘蛋白是否對惡性黑色素瘤也有作用，目前還沒有相關研究的報道，所以本實驗將進行相關方面的探討性研究！二、研究內(nèi)容及預期成果（說明具體研究內(nèi)容、創(chuàng)新點及擬解決的關鍵問題、預期成果及提供形式）研究內(nèi)容：第一部分：正常表皮組織、痣細胞及黑色素瘤細胞中T—cadherin表達情況第二部分T—cadherin基因克隆和真核表達載體的構建第三部分：T—cadherin基因的真核表達及生物活性分析創(chuàng)新點：首次將T—cadherin基因轉染黑素瘤細胞擬解決的關鍵問題：通過RT—PCR反應擴增出T—cadherin的基因全長。預期成果及提供形式：觀察T—鈣粘蛋白在正常皮膚組織細胞、痣細胞及黑色素瘤細胞中的表達情況！進一步闡明T—鈣粘蛋白作用機制T—鈣粘蛋白基因轉染入黑色素瘤細胞后觀察對其增殖和轉移活性的抑制情況，探索臨床診斷和治療黑色素瘤及其它腫瘤的方法！三、研究方案（包括研究方法、技術路線、研究進度安排）研究方法：第一部分：正常表皮組織、痣細胞及黑色素瘤細胞中T—cadherin表達情況免疫組織化學和免疫細胞化學材料：從正常人皮膚切取的痣組織，人黑色素瘤細胞株主要試劑和溶液（1）第一抗體：兔抗人T—cadherin抗體（2）第二抗體：生物素標記羊抗兔IgG（3）“三抗”：鏈親和霉素標記HRP設備方法（1）冷凍切片的免疫染色程序（2）活細胞的免疫染色程序熒光顯微鏡檢注意：為保證結果的可靠性應該同時設有對照陽性對照（正常組織）；陰性對照（PBS代替一抗）以證明抗體的特異性。第二部分T—cadherin基因克隆和真核表達載體的構建材料：（1）組織和細胞（2）菌株與質(zhì)粒（3）工具酶（4）試劑（5）儀器方法（1）引物的設計（2）總RNA的提取：異硫氰酸胍—酚—氯仿抽提一步法（3）甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳分析其質(zhì)量，觀察所提RNA有無明顯降解；（4）逆轉錄RT反應：為了證實RT反應的成功設管家基因GAPDH為內(nèi)對照（5）PCR擴增：利用上下游引物，在DNA聚合酶下對目的片段進行擴增，PCR過程設β—actin為內(nèi)對照（6）PCR產(chǎn)物的回收、純化（7）PCR產(chǎn)物的克?。?）DNA序列測定（9）真核重組表達質(zhì)粒的構建（10）陽性重組質(zhì)粒的鑒定和篩選（11）質(zhì)粒的大量提?。?2）轉染黑色素瘤細胞第三部分：T—鈣粘蛋白基因的真核表達及生物活性分析材料方法（1）轉染細胞的培養(yǎng)（2）Western印跡法檢測轉染后蛋白的表達（3）流式細胞周期分析（4）凋亡的檢測技術路線圖：研究進度安排：20xx、9——20xx、7學習學位課程，查閱文獻，完成課題設計20xx、9——20xx、9基本完成實驗研究工作20xx、10——20xx、3完成實驗補遺工作并進行統(tǒng)計分析，撰寫論文20xx、4——20xx、6論文答辯四、經(jīng)費預算試劑費用：15000元組織及細胞：1000元文獻資料費：500元論文打印費：1000元答辯費：1500元總計：19000元五、課題可行性分析實驗在導師的指導下進行，導師段昕所教授、主任醫(yī)師對黑色素瘤的診斷治療、檢測方法和研究進展有深入的了解，對本課題的研究設計及實驗有重要的指導意義。已完成黑色素瘤及T—鈣粘蛋白研究最新進展的文獻檢索和綜述報告工作。所有實驗均在承德醫(yī)學院附屬醫(yī)院皮膚病研究室和中心實驗室完成。實驗室的老師實驗技術熟練，在細胞培養(yǎng)、免疫組化及分子生物學等方面都可給予指導；實驗所需的科研儀器設備實驗室均具備。參考文獻：Toyooka，KO，Toyooka S，Virmani AK，Sathyanarayana UG et al Cancer Res 20xx Jun 1；61（11）：4556—60Lee，S、W， Nat、Med，2：776—782Zhong，Y，Y、Delgado，J、Gomez，S、W、Lee et al 20xx Clin Cancer Res、Takeuchi，M，Misaki，A，Chen，B、K，et alHistopathology，35，87—8Kawakami，M，Staub，J，Cliby，W，et al 1999Int、J、Oncol，15，715—720Sato，M，Mori，Y，Sakurada，A，et al（1998）Hum、Genet，43，285—286Sato，M，Mori，Y，Sakurada，A，et al（1998）Hum、Genet，103，96—101Mori，Y，Matsunaga，M，Abe，T，et al（1999）Br J、Cancer，80，556—562Lee、S、W（1996）Nat、Med，2，776—782Hung、Z、Y，Wu，Y、Hedric，Namp。Gutmann，D、H（20xx）Mol Cell、Biol 23，566—5781Lee SW、Reimercl、Campbell DB、et al 1998Jun；19（6）：1157—9醫(yī)學研究生開題報告4一、開題報告——畢業(yè)論文題目題目是畢業(yè)論文中心思想的高度概括，要求:①準確、規(guī)范。要將研究的問題準確地概括出來，反映出研究的深度和廣度，反映出研究的性質(zhì)，反映出實驗研究的基本要求——處理因素、受試對象及實驗效應等。用詞造句要科學、規(guī)范。②簡潔。要用盡可能少的文字表達，一般不得超過20個漢字。二、開題報告——畢業(yè)設計立論依據(jù)開題報告中要考慮：①畢業(yè)論文的選題目的與意義，即回答為什么要研究，交代研究的價值及需要背景。一般先談現(xiàn)實需要——由存在的問題導出研究的實際意義，然后再談理論及學術價值，要求具體、客觀，且具有針對性，注重資料分析基礎，注重時代、地區(qū)或單位發(fā)展的需要，切忌空洞無物的口號。②國內(nèi)外研究現(xiàn)狀，即文獻綜述，要以查閱文獻為前提，所查閱的文獻應與研究問題相關，但又不能過于局限。與問題無關則流散無窮；過于局限又違背了學科交叉、滲透原則，使視野狹隘，思維窒息。所謂綜述的“綜”即綜合，綜合某一學科領域在一定時期內(nèi)的研究概況；“述”更多的并不是敘述，而是評述與述評，即要有作者自己的39。獨特見解。要注重分析研究，善于發(fā)現(xiàn)問題，突出選題在當前研究中的位置、優(yōu)勢及突破點；要摒棄偏見，不引用與導師及本人觀點相悖的觀點是一個明顯的錯誤。綜述的對象，除觀點外，還可以是材料與方法等。此外，文獻綜述所引用的主要參考文獻應予著錄，一方面可以反映作者立論的真實依據(jù)，另一方面也是對原著者創(chuàng)造性勞動的尊重。三、開題報告——畢業(yè)設計研究方案開題報告中要考慮：①研究的目標。只有目標明確、重點突出，才能保證具體的研究方向，才能排除研究過程中各種因素的干擾。②研究的內(nèi)容。要根據(jù)研究目標來確定具體的研究內(nèi)容，要求全面、詳實、周密，研究內(nèi)容籠統(tǒng)、模糊，甚至把研究目的、意義當作內(nèi)容，往往使研究進程陷于被動。③研究的方法。選題確立后，最重要的莫過于方法。假如對牛彈琴，不看對象地應用方法，錯誤便在所難免，相反，即便是已研究過的課題，只要采取一個新的視角，采用一種新的方法，也常能得出創(chuàng)新的結論。④研究的過程。整個研究在時間及順序上的安排，要分階段進行，對每一階段的起止時間、相應的研究內(nèi)容及成果均要有明確的規(guī)定，階段之間不能間斷，以保證研究進程的連續(xù)性。⑤擬解決的關鍵問題。對可能遇到的最主要的、最根本的關鍵性困難與問題要有準確、科學的估計和判斷，并采取可行的解決方法和措施。⑥創(chuàng)新點。要突出重點，突出所選課題與同類其他研究的不同之處。優(yōu)秀醫(yī)學在職碩士研究生開題報告寫作中有兩點尤為關鍵。第一點：提出問題注意是否有層次性。選題是撰寫學術論文的第一步，選題是否妥當，直接關系到論文的質(zhì)量，甚至