【文章內(nèi)容簡介】 會接 觸不利環(huán)境從而發(fā)生變質(zhì)，具有很好的保護效果，從而使得芯材能夠在不同環(huán)靜中發(fā)生作用 [16]。 截止到目前，還沒有見到關(guān)于 GACh復(fù)凝聚法制得 BSA微膠囊的報道。所以，本課題選擇殼聚糖和阿拉伯膠作為壁材成分 [2]， 經(jīng)過復(fù)凝聚工藝制備 BSA微膠囊。通過分析不同制備條件對微囊的包埋率的影響以選擇出最好的制備工藝條件。本文對敏感類物質(zhì) BSA的研究和應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 殼聚糖 阿拉伯膠復(fù)凝聚法制備 BSA 微膠囊 4 2 實驗材料與方法 實驗試劑 殼聚糖（粘度 500mPa?s）（ AR） 濰坊海之源有限公司 阿拉伯膠（ AR） 上海國藥集團化學(xué)試劑有限公司 BSA（ AR） 國藥集團化學(xué)試劑有限公司 鹽酸（ AR） 萊陽市康德化工有限公司 氫氧化鈉（ AR） 上海國藥試劑有限公司 大豆油 風(fēng)益貿(mào)易私人有限公司 實驗儀器 HHS2 數(shù)顯恒溫水浴鍋 金壇市醫(yī)療儀器廠 903 型雙向定時恒溫磁力攪拌器 上海滬分析儀器廠有限公司 UV—20xx 紫外分光光度計 上海尤尼柯儀器有限公司 電子天平 上海奧豪斯公司 低速大容量離心機 上海安亭科學(xué)儀器廠 DELTA 320 PH 計 上海梅特勒 —托利多公司 數(shù)顯高速分散均質(zhì)機 上海標本模型廠 試驗方法 BSA微膠囊的制備工藝 由于復(fù)凝聚反應(yīng)主要用于油溶性芯材的包埋，因此在包埋水溶性芯材 BSA 時，需要先將其轉(zhuǎn)化為油包水（ W/O）型乳狀液，然后再通過乳化反應(yīng)得到水包油包水（ W/O/W）型乳狀液，最后，經(jīng)過復(fù)凝聚反應(yīng)制備 BSA 微膠囊。本文選用大豆油來制備 W/O 型 BSA 乳狀液，然后再以 GA 為乳化劑，制備 W/O/W 型乳狀液，最后通過調(diào)節(jié)乳狀液的 pH 值，使 GA 與 Ch 發(fā)生復(fù)凝聚反應(yīng)，從而達到 BSA 包埋的目的。 BSA 的包埋流程如圖 1 所示。 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 殼聚糖 阿拉伯膠復(fù)凝聚法制備 BSA 微膠囊 5 B S A B S A 溶 液大 豆 油乳 化W / O 型 B S A 乳狀 液5 % G A乳 化W / O / W 型B S A 乳 狀 液1 % C h復(fù) 凝 聚 反 應(yīng)B S A 微 膠 囊 圖 1 GACh 復(fù)凝聚反應(yīng)制備 BSA 微膠囊的流程 Figure 1 Flow chart for BSA microcapsule preparation by GACh coacervation 乳狀液穩(wěn)定性測定方法 W/O 型 BSA 乳狀液穩(wěn)定性測定方法 在離心管中加入一定量的 W/O 乳狀液， 4000r/min 的轉(zhuǎn)速下，離心 15min，讀取頂部析出的油相的體積 [17]。 用以下方程式計算穩(wěn)定性 ： W/O/W 型 BSA 乳狀液穩(wěn)定性測定方法 W/O/W乳狀液 的乳層保留率的測定方法與上相同，在條件為 20xxr/min的轉(zhuǎn)速下離心 15min[17]。相應(yīng)的計算公式為： W/O 型 BSA乳狀液制備 以 1%BSA 為水相，大豆油為油相，將兩者以一定體積比混合，在一定水浴溫度條件下，高速分散乳化一段時間，形成均勻的乳狀液。 BSA 與大豆油比例對 W/O 型 BSA 乳狀液穩(wěn)定性影響 將 1%BSA 溶液與大豆油分別按照 1: 1:、 1: 1:、 1:3 比例混合，在 25186。C ， 10000r/min 條件下高速分散 20min，獲得均勻的 W/O 乳狀液，采用 方法測其穩(wěn)定性。 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 殼聚糖 阿拉伯膠復(fù)凝聚法制備 BSA 微膠囊 6 乳化轉(zhuǎn)速對 W/O 型 BSA 乳狀液穩(wěn)定性影響 將 1%BSA 溶液與大豆油按照 1: 比例混合，在 25186。C 條件下，分別以7000r/min、 8000r/min、 9000r/min、 10000r/min、 11000r/min、 120xxr/min、 13000r/min轉(zhuǎn)速高速分散 20min， 獲得均勻的 W/O 乳狀液，然后采用 方法測其穩(wěn)定性。 乳化時間對 W/O 型 BSA 乳狀液穩(wěn)定性影響 將 1%BSA 溶液與大豆油按照 1: 比例混合，在 25186。C ， 10000r/min 條件下分別高速分散 10min、 20min、 30min、 40min、 50min，獲得均勻的 W/O 乳狀液，然后采用 方法測其穩(wěn)定性。 乳化溫度對 W/O 型 BSA 乳狀液穩(wěn)定性影響 將 1%BSA 溶液與大豆油按照 1: 比例混合，分別在 25186。C 、 35186。C 、 45186。C 、55186。C 、 65186。C ， 10000r/min 條件下高速分散 20min，獲得均勻的 W/O 乳狀液，然后采用 方法測其穩(wěn)定性。 W/O/W型乳狀液制備 將制備的 W/O 乳狀液按一定體積比與 5%GA 溶液混合，乳化一段時間，形成均勻 W/O/W 型 BSA 乳狀液。 乳化溫度對 W/O/W 型 BSA 乳狀液穩(wěn)定性影響 將 W/O 乳狀液與 5%GA 溶液按照 1:4 比例混合，分別在 25186。C 、 35186。C 、 45186。C 、55186。C 、 65186。C ， 10000r/min 的 條件下，高速分散 20min，獲得均勻的 W/O/W 型 BSA乳狀液，然后采用 方法測其穩(wěn)定性。 乳化轉(zhuǎn)速對 W/O/W 型 BSA 乳狀液穩(wěn)定性影響 將 W/O 乳狀液與 5%GA 溶液按照 1:4 比例混合，在 25186。C 的條件下，分別以7000r/min、 8000r/min、 9000r/min、 10000r/min、 11000r/min、 120xxr/min、 13000r/min轉(zhuǎn)速，高速分散 20min，獲得均勻的 W/O/W 型 BSA 乳狀液，然后采用 方法測其穩(wěn)定性。 乳化時間對 W/O/W 型 BSA 乳狀液穩(wěn)定性影響 將 W/O 乳狀液與 5%GA 溶液按照 1:4 比例混合，在 25186。C 、 10000r/min 條件下，分別高速分散 10min、 20min、 30min、 40min、 50min、 60min，獲得均勻的W/O/W 型 BSA 乳狀液，然后采用 方法測其穩(wěn)定性。 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 殼聚糖 阿拉伯膠復(fù)凝聚法制備 BSA 微膠囊 7 W/O 乳狀液與 GA 比例對 W/O/W 型 BSA 乳狀液穩(wěn)定性影響 將 W/O 乳狀液與 5%GA 溶液分別按照 1: 1: 1: 1: 1: 1:6 比例混合，在 25186。C ， 10000r/min 條件下高速分散 20min， 獲得均勻的 W/O/W 型 BSA 乳狀液，然后采用 方法測其穩(wěn)定性。 BSA微膠囊的制備 pH 對 BSA 包埋效果的影響 將濃度為 1%的 Ch 溶液與 W/O/W 型 BSA 乳狀液等體積混合，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié) pH 分別至 、 、 、 、 、 和 ，在 25186。C、 10000r/min條件下高速分散 20min，然后采用 方法測其包埋率。 攪拌溫度對 BSA 包埋效果的影響 將濃度為 1%的 Ch 溶液與 W/O/W 型 BSA 乳狀液等體積混合，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié) pH 到 ，分別在 25186。C、 35186。C、 45186。C、 55186。C、 65186。C， 10000r/min 條件下高速分散 20min，然后采用 測其包埋率。 攪拌轉(zhuǎn)速對 BSA 包埋效果的影響 將濃度為 1%的 Ch 溶液與 W/O/W 型 BSA 乳狀液等體積混合，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié) pH 到 ， 25186。C 條件下，分別在 8000r/min、 9000r/min、 10000r/min、11000r/min、 120xxr/min、 13000r/min 轉(zhuǎn)速下高速分散 20min，然后采用 測其包埋率。 攪拌時間對 BSA 包埋效果的影響 將濃度為 1%的 Ch 溶液與 W/O/W 型 BSA 乳狀液等體積混合，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié) pH 到 ， 25186。C、 10000r/min 條件下，分別高速分散 10min、 20min、30min、 40min、 50min、 60min，然后采用 測其包埋率。 BSA測定方法 將 GA/Ch復(fù)凝聚反應(yīng)后的乳狀液在 4000r/min， 10min條件下離心。根據(jù)考馬斯亮藍法制出 BSA標準曲線，將離心后上清液的吸光度值帶入曲線公式，計算出相應(yīng) BSA濃度，進而計算出上清液中的 BSA質(zhì)量。 根據(jù)上清液中 BSA質(zhì)量和離心液 BSA總質(zhì)量，按照如下公式計算包埋率 [18]： 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 殼聚糖 阿拉伯膠復(fù)凝聚法制備 BSA 微膠囊 8 數(shù)據(jù)處理 每次單因素實驗都測定 3 次，結(jié)果用 ?x 表示，然后運用 SPSS 軟件進行顯著性分析，當顯著水平小于 時，則認為數(shù)據(jù)間有顯著性差異。 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 殼聚糖 阿拉伯膠復(fù)凝聚法制備 BSA 微膠囊 9 W/O 型 BSA乳狀液穩(wěn)定性研究 BSA與大豆油比例對 W/O 型 BSA乳狀液穩(wěn)定性影響 BSA 與大豆油比例對 W/O 型 BSA 乳狀液穩(wěn)定性影響如圖 2。 edcb a0204060801001 : 1 1 : 1 . 5 1 : 2 1 : 2 . 5 1 : 3B S A / 大豆油（ v / v ）穩(wěn)定性（%） 圖 2 BSA與大豆油比例對 W/O 型 BSA乳狀液穩(wěn)定性的影響 Effect of BSA to soybean oil ratio on the stability of W/O BSA emulsions 由圖 2可知， BSA與大豆油的比例對乳狀液穩(wěn)定性影響較大，隨著 BSA與大豆油比例值減小其乳狀液穩(wěn)定性逐漸增加。在比例為 1： 3時，穩(wěn)定性最好 ， 且與其它比例的乳狀液的穩(wěn)定性均具有顯著性差異（ P）。這是由于 當水的質(zhì)量分數(shù)減少時，乳狀液滴之間不易相互碰撞而聚集下沉 [19]。而且實驗發(fā)現(xiàn)， 當繼續(xù)增加大豆油體積時，會出現(xiàn)攪拌無法均勻的