單細胞測序技術(shù)-(編輯修改稿)
2025-10-03 21:58 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 頁。 MALBAC技術(shù)，首先 需要進行 5輪 MDA預(yù)擴增，然后就可以使新獲得的擴增產(chǎn)物形成閉合的環(huán)狀 分子。 由于這些環(huán)狀分子不能夠被進一步擴增，所以整個擴增過程就變成了線性擴增。然后再進行常規(guī)的 PCR擴增，由于此時采用的模板更加均一，所以在進行 PCR擴增時就不易造成較大的差異。 兩種擴增技術(shù)： MALBAC方法和 MDA方法 MDA方法是使用 隨機引物，讓這些引物與基因組廣泛結(jié)合，同時使用一種特定的聚合酶，這種聚合酶能夠置換與它自身附著在同一模板上的 DNA鏈片段，形成一種反復(fù)分支結(jié)構(gòu)，擴增出大段的 DNA。 第五頁，共十八頁。 基因組模板 DNA 擴增引物 Phi 29 DNA聚合酶 MALBAC法擴增 第六頁，共十八頁。 5’ 端有通用擴增序列的 DNA片段 第一個循環(huán)下來，得到的是一批 5’端有通用擴增序列的 DNA片段 第七頁，共十八頁。 5’ 端有通用序列， 3’ 端 有與通用序列互補的序列的 DNA片段 在第二個循環(huán)完成后，所產(chǎn)生的擴增產(chǎn)物中大局部是 5’端有通用序列，而 3’端有與通用序列互補的序列的這些片段 共循環(huán)5次 第八頁，共十八頁。 58℃ 退火 MALBAC的巧妙之處，就是在每個循環(huán)的最后，加了一步 58度退火，這一退火過程，他讓完整擴增的產(chǎn)物的兩端發(fā)生 鏈內(nèi) 雜交 第九頁
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