動(dòng)植物細(xì)胞器離心法分離(編輯修改稿)
2024-10-02 06:48 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 鼠肝勻漿 700 g離心 10 min 沉淀 (細(xì)胞核及質(zhì)膜碎片 ) 上清液 (1) 洗滌 ( mol／ L預(yù)冷蔗糖溶液 5 mL洗滌 2次，每次 1000 g離心 15 min。 沉淀 (細(xì)胞核及質(zhì)膜碎片 ) 上清液 (2)→ 與上清(1)合并 第十二頁(yè)，共二十六頁(yè)。 別離線粒體： 混合上清液 10000 g離心 10 min 沉淀 (線粒體 ) 上清液 (棄去 ) 洗滌 加預(yù)冷的 mol／ L蔗糖溶液 10 mL， 10000 g離心 10 min 沉淀 (純化的線粒體 ) 上清液 (棄去 ) 第十三頁(yè)，共二十六頁(yè)。 3．活性鑒定： (1) 細(xì)胞核：取核沉淀 1滴涂于載玻片，參加 Carnoy固定液 15 min，晾干。 Giemsa染液染 10 min，蒸餾水漂洗數(shù)秒，用濾紙吸干水、用顯微鏡 (40 )檢查，細(xì)胞核呈紫紅色，混雜的胞質(zhì)為淺藍(lán)色碎片。 (2) 線粒體： 取線粒體沉淀滴在載玻片上，勿太密。滴加 1％詹鈉斯綠溶液染液， 10 min后用光學(xué)顯微鏡觀察，線粒體藍(lán)綠色，呈小棒狀或啞鈴狀。 第十四頁(yè)，共二十六頁(yè)。 玉米線粒體的別離 ? 從植物細(xì)胞別離線粒體，除了作線粒體功能測(cè)定外，在植物細(xì)胞遺傳工程中，常用于別離核外基因 —線粒體 DNA等目的。 ? 別離線粒體的方法仍采用均勻介質(zhì)中的差速離心。介質(zhì)中 。EDTA整合二價(jià)陽(yáng)離子， Ca2＋除去后細(xì)胞間粘著解體，促使組織分散成單個(gè)細(xì)胞。牛血清白蛋白 (BSA)能包在細(xì)胞外面，并作為競(jìng)爭(zhēng)性底物削弱蛋白酶的作用。 第十五頁(yè)，共二十六頁(yè)。 【材料】 玉米黃化幼苗 (水稻、高粱等幼苗均可 )。 【實(shí)驗(yàn)用品】 1．試劑： 〔 1〕別離介質(zhì)： ， 50mmol/L的 Tris鹽酸緩沖液 ()， 3mmol/LEDTA， (BSA)。 50mmol/L的 TrisHcl緩沖液 ()配法： 三羥甲基氨基甲烷 (Tris)溶液與 42mL 后，加水稀釋至 100mL。 第十六頁(yè)，共二十六頁(yè)。 〔 2〕保存液： () 〔 3〕 20％次氯酸鈉 (NaClO)溶液。 〔 4〕 1
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