【文章內(nèi)容簡介】 1）無菌水 泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落 （ 2）鑒別乳酸菌 中和產(chǎn)生的乳酸 具有透明圈 （ 3）甘油 （ 2）由題意可知，分離純化所用固體 培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣。由此可推測在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的乳酸和鑒別能產(chǎn)生乳酸的乳酸菌；根據(jù)產(chǎn)酸菌在含 CaCO3的培養(yǎng)基上產(chǎn)生透明的原理，分離純化時應挑選出具有透明圈的菌落作為候選菌，然后用平板劃線法進一步分離純化。 【考點定位】 微生物的分離和培養(yǎng) 【名師點睛】利用溶鈣圈法分離純合泡菜濾液中的乳酸菌 ：利用一些產(chǎn)酸類細菌在含 CaCO3的培養(yǎng)基上產(chǎn)生 CaCO3溶解圈，從而篩選出這 些產(chǎn)酸類細菌，可用于乳酸菌的篩 選。 其中培養(yǎng)基中加入 CaCO3的作用是：①鑒別能產(chǎn)生酸的細菌；②中和產(chǎn)生的酸，以維持培養(yǎng)基的 PH。 2．篩選過程：樣品預處理→梯度稀釋至 106→選擇合適的稀釋度涂布→ 37℃培養(yǎng) 48h→挑選產(chǎn)生溶鈣圈（透明圈）的菌落反復在 MRS培養(yǎng)基上劃線→挑起單菌落染色，經(jīng)鏡檢確認為純種→菌種保存。 因為課本里沒有這個實驗，所以本題考查考生的知識遷移能力。首先通過認真審題，從題干中獲取該實驗原理，然后再綜合運用課本所學相關實驗的方法、原理進行解題。 24.（ 2021江蘇卷 .29） （ 9分）為了探索海藻酸鈉固定化對綠球藻 生長的影響，以及固定化藻對含 Zn2+污水的凈化作用，科研人員用篩選到的一株綠球藻進行試驗，流程及結果如下。請回答下列問題： （ 1）實驗中的海藻酸鈉作用是 ， CaC l2的作用是 。 （ 2）為洗去凝膠球上殘余的 CaC l2和其他污染物，并保持綠球藻活性，宜采用 洗滌。 圖 1 中 1. 0%海藻酸鈉組培養(yǎng) 24 h 后 ,移去凝膠球 ,溶液呈綠色 ,原因是______________________。 （ 3）為探索固定化藻對含 Zn2+污水的凈化作用，應選用濃度為 海藻酸鈉制備凝膠球。 （ 4）圖 2中空白凝膠球組 Zn2+濃度下降的原因是 。結合圖 1和圖 2分析，固定化藻的實驗組 24~48h間 Zn2+濃度下降速度較快的主要原因是 ； 72~96h間 Zn2+濃度下降速度較慢的原因有 。 【答案】（ 1）包埋綠球藻（包埋劑） 與海藻酸鈉反應形成形成凝膠球（凝固劑） （ 2）培養(yǎng)液（生理鹽水） 海藻酸鈉濃度過低（凝膠球孔徑過大） （ 3） % （ 4）凝膠球吸附 Zn2+ 綠球藻生長（增殖）速度快 綠球藻生長（增殖）速度減慢，溶液中 Zn2+濃度較低 【考點定位】固定化細胞，海藻酸鈉， CaCl實驗分析 【名師點睛】此題是對固定化細胞的考查，解答本題的關鍵在于理解固定化細胞的過程，明確海藻酸鈉與 CaCl2的作用；關于 固定化藻對含 Zn2+污水的凈化作用，應結合曲線圖進行分析，兩幅曲線圖均有兩個自變量，分析時應控制一個自變量不變，分析另一個自變量對縱坐標的影響。 25.（ 2021海南卷 .30） 回答下列問題： （ 1）蛋白酶甲、乙、丙三者的活性隨 pH的變化如圖所示。通常，用清水洗滌衣服上的新鮮血跡 時 ，不 應該使用開水，原因是 _______________________。若要去除衣服上的血漬，應選擇含有 _____________________（填 “ 蛋白酶甲 ” 、 “ 蛋白酶乙 ” 或 “ 蛋白酶丙 ” ）的堿性洗衣粉，理由是 ___________________。 （ 2）某同學為了洗去衣服上的油漬，洗衣時在市售的蛋白酶洗衣液中添加脂肪酶，該同學的做法 ___________________（填 “ 合理 ” 或 “ 不合理 ” ），理由是_________________________。 （ 3）已知溶液的 pH 可以影響酶的活性，請推測 pH影響某種蛋白酶活性的原因可能是其影響了酶和底物分子中 _________________（填 “ 羧基和氨基 ” 、 “ 氨基和甲基 ” 、 “ 羧 基和甲基 ” 或 “ 甲基和甲基 ” ）等基團的解離狀態(tài)。 【答案】 （ 15分） （ 1）開水使血中的蛋白質變性而沉淀，難以清洗（ 3分） 蛋白酶丙（ 1分） 堿性條件下只有蛋白酶丙有活性（ 4分） （ 2）不合理（ 1分） 蛋白酶會降解脂肪酶（ 4分） （ 3）羧基和氨基（ 2分） 【考點定位】酶的研究 【名師點睛】“四步法”分析酶促反應曲線 （ 1）識標：“識標明變量”。明確酶促反應曲線坐標圖中橫坐標（ 自變量）和縱坐標（因變量）的含義。 （ 2）析線：“析線理關系”。分析酶促反應曲線走勢，明確因變量怎樣隨自變量的變化而變化?！吧仙薄跋陆怠薄跋壬蠼怠薄跋壬蠓€(wěn)”“水平”等。 （ 3）明點（特殊點）：“抓點求突破”。明確酶促反應曲線中起點、終點、頂點、拐點、交叉點、特殊條件下的交點等表示的生物學含義。 （ 4）判斷：“先分后合巧辨析”。對于多條酶促反應曲線圖，根據(jù)曲線上不同標示物識別曲線所代表的意義（有的曲線直接標出），首先對每一條曲線單獨分析，進行比較，判斷曲線間有無聯(lián)系或找出相互關系，然后綜合分析。 26.（ 2021上海卷 .四） 回答下列有關微生物和酶工程的問題。 枯草芽孢桿菌盛產(chǎn)蛋白酶，后者在生物醫(yī)藥和日用化工等生產(chǎn)領域具有重要的經(jīng)濟價值，且已大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化應用。 44. 在培養(yǎng)包括枯草芽孢桿菌在內(nèi)的異養(yǎng)型微生物時，培養(yǎng)基營養(yǎng)成分應包括水和_______________（用序號組合回答）。 ① 淀粉 ② 蛋白質 ③ 生長因子 ④ 葡萄糖 ⑤ 無機鹽 為篩選枯草芽孢桿菌的蛋白酶高產(chǎn)株，將分別浸過不同菌株 (a~e)的分泌物提取液及無菌水（ f）的無菌圓紙片置于含某種高濃度蛋白質的平板培養(yǎng)基表面；在 37℃恒溫箱中放置2~3天，結果如圖 17. 45. 大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化首選的菌株是 _______________； 菌株 b提取物周圍沒有形成明顯清晰區(qū)的原因是 _______________。 圖 18 顯示枯草芽孢桿菌的蛋白酶和其它酶的熱穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，即酶在不同溫度下保溫足夠長的時間，再在酶活性最高的溫度下測其酶活性。在該蛋白酶的工業(yè)化生產(chǎn)過程中，通常需對發(fā)酵液在 60~70℃保溫一定時間，再制備酶制劑。 60~70℃保溫一定時間的作用是 __。 發(fā)酵液中其他酶的活性 47. 枯草芽孢桿菌蛋白酶制備的合理工藝步驟應為 _____(選擇正確的序號并排序 )。 ① 過濾 ② 干燥 ③ 破碎 ④ 濃縮 【答案】 44.①②③⑤ /②③④⑤ ①不能合成蛋白酶或合成的蛋白酶量不足；②合成的蛋白酶不分泌或分泌量不足；③分泌的蛋白酶活性低 47.①④② 47. 枯草芽孢桿菌蛋白酶可以分泌到細胞外，因此不需破碎過程，經(jīng)過濾、濃縮、干燥程序即可。 【考點定位】本題考查微生物培養(yǎng)和酶工程的相關知識。 【名師點睛】本題考查枯草芽孢桿菌蛋白酶的制備。屬于容易題。解題關鍵是明確微生物培養(yǎng)的基本條件。本題易錯點是 45題第二空和 47題。 45題第二空錯因在于考慮不周，47題錯因在于未能注意枯草芽孢桿菌蛋白酶可以分泌到細胞外。 27.（ 2021 江蘇卷 .31） (8 分 )人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃 ,可用來發(fā)酵處理秸稈 ,提高秸稈的營養(yǎng)價值。 為了增強發(fā)酵效果 ,研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產(chǎn)菌株 ,并對其降解纖維素能力進行了研究。 請回答下列問題 : (1)在樣品稀釋和涂布平板步驟中 ,下列選項不需要的是 (填序號 )。 ①酒精燈 ②培養(yǎng)皿 ③顯微鏡 ④無菌水 (2)在涂布平板時 ,滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是 。 (3)向試管內(nèi)分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時 ,若試管口粘附有培養(yǎng)基 ,需要用酒精棉球擦凈的原因是 。 (4)剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物 ,但并不與纖維素降解產(chǎn)物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應。 研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上 ,篩到了幾株有透明降解圈的菌落 (見下圖 )。 圖中降解圈大小與纖維素酶的 有關。 圖中降解纖維素能力最強的菌株是 (填圖中序號 )。 (5)研究人員用篩選 到的纖維素酶高產(chǎn)菌株 J1 和 J4,在不同溫度和 pH 條件下進行發(fā)測得發(fā)酵液中酶活性的結果見下圖 ,推測菌株 更適合用于人工瘤胃發(fā)酵 ,理是 。 【答案】（ 1）③ （ 2）培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液，導致菌體堆積，影響分離效果 （ 3）避免培養(yǎng)基污染棉塞 （ 4）量與活性 ① （ 5） J4 發(fā)酵過程中會產(chǎn)熱和產(chǎn)酸， J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高 【考點定位】微生物的培養(yǎng)、發(fā)酵等知識 【名師點睛】本題結合實際綜合考查微生物的培養(yǎng)、微生物發(fā)酵的相關知 識，突出在微生物培養(yǎng)的基本操作和分析緣由等方面的知識，這提醒學生們掌握知識不僅要知其然，而且要知其所以然，這樣才能在解決實際有關的生物學問題時綜合分析，遷移運用。 28.（ 2021 海南卷 .30） 【生物－選修 1：生物技術實踐】（ 15分）生產(chǎn)果汁時，用果膠酶處理果泥可提高果汁的出汁率。回答下列相關問題： （ 1）某同學用三種不同的果膠酶進行三組實驗，各組實驗除酶的來源不同外，其他條件都相同，測定各組的出汁量，據(jù)此計算各組果膠的活性的平均值并進行比較。這一實驗的目的是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 （ 2）現(xiàn)有一種新分 離出來的果膠酶，為探究其最適溫度，某同學設計了如下實驗：取試管 16支，分別加入等量的果泥、果膠酶、緩沖液，混勻，平均分為 4組，分別置于 0℃、5℃、 10℃、 40℃下保溫相同時間，然后，測定各試管中的出汁量并計算各組出汁量平均值。該實驗溫度設置的不足之處有＿＿＿和＿＿＿＿。 （ 3）某同學取 5組試管（ A～ E）分別加入等量的同種果泥，在 A、 B、 C、 D4個實驗組的試管中分別加入等量的緩沖液和不同量的同種果膠酶，然后，補充蒸餾水使 4組試管內(nèi)液體體積相同； E組加入蒸餾水使試管中液體體積與實驗組相同。將 5組試管置于適宜溫度 下保溫一定時間后，測定各組的出汁量。通過 A～ D組實驗可比較不同實驗組出汁量的差異。本實驗中，若要檢測加入酶的量等于 0而其他條件均與實驗組相同時的出汁量， E組設計＿＿＿（填“能”或“不能”）達到目的，其原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 【答案】（ 1）探究不同來源果膠酶的活性 （ 2）溫度范圍設置不合適 溫度梯度設置不合理（或各組的酶促反應受兩個不同溫度影響） （ 3）不能 未加入緩沖液 【考點定位】酶活性及其影響因素的相關實驗設計與分析 【名師點睛】本題的第一小題較為直接、簡單。第二 、三兩小題有一定難度，對于實驗設計的考查，考生首先要明確實驗要探究的目的，其次是分清自變量、因變量和無關變量，對照實驗設計時要遵循單一變量原則，即同一對照實驗的各組別中只能有一個不同的變量，然后要弄清設置對照組主要是排除哪些因素（即無關變量）對實驗結果的干擾，最后才能準確作答。 29.（ 2021 天津卷 .7） DHA對腦神經(jīng)發(fā)育至關重要。以 A、 B兩種單細胞真核藻為親本，利用細胞融合技術選育高產(chǎn) DHA融合藻。兩種藻特性如下表。 親本藻 優(yōu)勢代謝類型 生長速率（ g/） 固體培養(yǎng)基上菌落直徑 DHA含量（‰） A藻 自養(yǎng) 小 B藻 異養(yǎng) 大 無 據(jù)表回答： （ 1）選育的融合藻應具有 A藻 與 B藻 的優(yōu)點。 （ 2）誘導融合前需用纖維素酶處理兩種藻，其目的是獲得 。 （ 3）通過以下三步篩選融合藻，步驟 可淘汰 B藻，步驟 可淘汰生長速成率較慢的藻落，再通過步驟 獲取生產(chǎn)所需的融合藻。 步驟 a：觀察藻落的大小 步驟 b:用不含有機碳源（碳源 —— 生物生長的碳素來源 ）的培養(yǎng)基進行光照培養(yǎng) 步驟 c：測定 DHA含量 （ 4） 以獲得的融合藻為材料進行甲、乙、丙三組試驗，結果如下圖。 ①甲組條件下，融合藻產(chǎn)生 [H]的細胞器是 ；丙組條件下產(chǎn)生 ATP的細胞器是 。 ②與甲、丙兩組相比，乙組融合藻生長速率較快，原因是在該培養(yǎng)條件下 。甲、乙兩組 DHA產(chǎn)量均較高，但實際生產(chǎn)中往往采用甲組的培養(yǎng)條件，其原因是 。 【答案】（ 1）產(chǎn)生 DHA、自養(yǎng)特性 快速生長 （ 2）原生質體 （ 3） b a c （ 4） ①線粒體、葉綠體 線粒體