5省科技攻關(guān)計劃項(xiàng)目可行性研究報告_(編輯修改稿)
2024-09-12 00:07 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 介素 24腺病毒注射液 ” ，治療一個療程，用藥 20支，其用量為 120 萬支，按每支 2024 元人民幣計算，國內(nèi)市場為 24億 元人民幣，國內(nèi)外市場的百分之一為 44億元人民幣。 該項(xiàng)目產(chǎn)業(yè)化后，可年產(chǎn) 100 萬支，實(shí)現(xiàn)產(chǎn)值 20 億元人民幣，年銷售收入可達(dá) 12 億元人民幣，年利稅 6 億元人民幣，年 第 9 頁 共 21 頁 創(chuàng)匯 2024萬美元。 所以，基因治療腫瘤是關(guān)系到廣大患者生命安全和生活質(zhì)量的高科技項(xiàng)目。同時，對包裝、印刷、玻璃制品等行業(yè)起到帶動作用。 五、研究內(nèi)容與預(yù)期目標(biāo) 研究內(nèi)容： 人白細(xì)胞介素 24基因的克隆 重組人白細(xì)胞介素 24腺病毒的建立 重組人白細(xì)胞介素 24 腺病毒注 射液的質(zhì)量控制和檢測方法的建立 重組人白細(xì)胞介素 24腺病毒注射液的抗腫瘤實(shí)驗(yàn) 總體目標(biāo) 本項(xiàng)目預(yù)計投入 800 萬元人民幣?？赏瓿苫A(chǔ)性研究，獲得重組人白細(xì)胞介素 24腺病毒注射液樣品，整理出科研文獻(xiàn)。 本單位現(xiàn)有資產(chǎn) 億元人民幣，員工 116人。 經(jīng)濟(jì)目標(biāo) 項(xiàng)目完成時，預(yù)計年新增產(chǎn)品銷售額 3000 萬元、年新增交稅總額 200 萬元、年新增凈利潤 1000 萬元、年新增創(chuàng)（節(jié)）匯200萬美元、年新增產(chǎn)值 4000萬元。 技術(shù)、質(zhì)量指標(biāo)： 參照國家 laquo。人基因治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo) 第 10 頁 共 21 頁 原則 raquo。、 laquo。中國生物制品規(guī)程 raquo。、 laquo。中國藥典 raquo。（ 2024 年版）等要求建立重組人白細(xì)胞介素 24 腺病毒注射液的質(zhì)量控制和檢測方法。著重對重組人白細(xì)胞介素 24腺病毒制品的病毒純度、病毒滴度的測定和復(fù)制型病毒（ rca）、腺相關(guān)病毒檢測的方法學(xué)進(jìn)行研究。 比活性。病毒比滴度 =病毒感染滴度 /病毒顆粒數(shù)測定， %。 復(fù)制型病毒（ rca）的檢測： a549 細(xì)胞檢測法，每101 0vp中應(yīng) 不高于 1rca（即 ≤1rca/1010vp ）。 腺相關(guān)病毒的檢測。采用 pcr 法，應(yīng)無腺相關(guān)病毒（ aav）的污染。 病毒純度檢測：采用高效液相色譜法或 a260/a280 法 純度大于 95%。 本項(xiàng)目屬科技攻關(guān)項(xiàng)目，主要是完成技術(shù)性研究，取得該技術(shù)領(lǐng)域的科研成果。產(chǎn)業(yè)化達(dá)產(chǎn)后，預(yù)計可實(shí)現(xiàn)產(chǎn)值 10 億元人民幣，年銷售收入 6 億元人民幣，年利稅 3億元人民幣，年創(chuàng)匯1000 萬美元。用腺病毒攜帶 il24 基因治療腫瘤的方法可形成專利。 六 、研究方案、技術(shù)路線、組織方式與課題分解 重組人白細(xì)胞介素 24腺病毒注射液的技術(shù)方案 第 11 頁 共 21 頁 24腺病毒的建立 （ 1）人白介素 24基因的克隆 從人外周血單個核細(xì)胞中提取 mrna，設(shè)計并合成特異引物，應(yīng)用 pcr 的方法擴(kuò)增得到人白細(xì)胞介素 24的基因片段。 （ 2）人白介素－ 24基因序列的確證 將用 pcr 擴(kuò)增出的人白介素 24 基因，進(jìn)行測序，并與genebank 報道的結(jié)果比較，以確定擴(kuò)增的白介素－ 24 基因序列的正確性。 （ 3）攜帶人白細(xì)胞介素－ 24基因腺病毒穿梭質(zhì)粒載體的構(gòu)建與鑒定 采用基因工程的方法，將人白細(xì)胞介素－ 24 基因克隆至腺病毒穿梭質(zhì)粒載體中，通過限制性內(nèi)切酶圖譜法鑒定人白細(xì)胞介素－ 24基因是否重組到腺病毒穿梭質(zhì)粒載體中。 （ 4）重組人白細(xì)胞介素－ 24腺病毒的構(gòu)建 通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)，將攜帶人白細(xì)胞介素－ 24 基因腺病毒穿梭質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染 293 細(xì)胞（人胚腎細(xì)胞），提取重組腺病毒dna進(jìn)行 pcr鑒定。 （ 5）擴(kuò)增前重組人白細(xì)胞介素－ 24腺病毒的空斑篩選 利用噬斑純化方法 ，將感染重組腺病毒的 293細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，挑選出單個重組腺病毒，以保證擴(kuò)增的純度和穩(wěn)定性。 （ 6）重組人白細(xì)胞介素－ 24腺病毒的擴(kuò)增、純化 第 12 頁 共 21 頁 將經(jīng)噬斑純化獲得重組腺病毒大量感染 293細(xì)胞，以大量生產(chǎn)重組腺病毒。待感染病毒的 293 細(xì)胞成熟后收獲細(xì)胞，經(jīng)反復(fù)凍融及離心等方法，除去細(xì)胞碎片，收集上清，獲得重組腺病毒。并通過超濾和離子交換的方法來純化和濃縮重組腺病毒，從而獲得大量、高滴度、高純度的重組人白細(xì)胞介素 24 腺病毒樣品。 、重組人白細(xì)胞介素 24 腺病毒注射液的質(zhì)量控制和檢測 方法的建立 參照國家 laquo。人基因治療研究和制劑質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則 raquo。、 laquo。中國生物制品規(guī)程 raquo。、 laquo。中國藥典 raquo。（ 2024 年版）等要求建立重組人白細(xì)胞介素 24 腺病毒注射液的質(zhì)量控制和檢測方法。著重對重組人白細(xì)胞介素 24腺病毒制品的病毒的純度、病毒滴度的測定和復(fù)制型病毒（ rca）、腺相關(guān)病毒檢測的方法學(xué)研究。 （ 1）比活性：病毒比滴度 =病毒感染滴度 /病毒顆粒數(shù)測定 （ 2）復(fù)制型病毒（ rca）的檢測： a549 細(xì)胞檢測法，每 1010vp中應(yīng)不高于 1rca（即 ≤1rca/1010vp ） （ 3）腺相關(guān)病毒的檢測 采用 pcr法，應(yīng)無腺
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