生化自動(dòng)化與標(biāo)準(zhǔn)化(編輯修改稿)
2025-03-02 20:40 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 助波長(zhǎng)。二、測(cè)定方法2023/2/28 星期日 24n 連續(xù)監(jiān)測(cè)法屬于動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)法，或叫速率法，適用酶活性和代謝產(chǎn)物檢測(cè)，測(cè)定產(chǎn)物生成或底物消耗速度，多有酶參與，此法測(cè)酶的活力而不是酶的濃度（質(zhì)量）。在零級(jí)反應(yīng)期單位時(shí)間內(nèi)的吸光度變化 (反應(yīng)速率 △ A/min)才與酶活力呈正比。二、測(cè)定方法2023/2/28 星期日 25n 測(cè)定時(shí)間的選擇：監(jiān)測(cè)時(shí)間應(yīng)根據(jù)所用儀器不影響檢測(cè)速度和結(jié)果的準(zhǔn)確性選在時(shí)間反應(yīng)進(jìn)程曲線的線性期。通常： 延遲時(shí)間： 3060秒 監(jiān)測(cè)時(shí)間： 120秒二、測(cè)定方法2023/2/28 星期日 26n 酶活力計(jì)算有兩種方法絕對(duì)法：酶活力 (U/L)=△ A(反應(yīng)液體積 /樣品體積 ) (1000/消光系數(shù) )相對(duì)法： (U/L或 mmol/L)=[△ A(測(cè)定 )/△ A(標(biāo)準(zhǔn) )］ 標(biāo)準(zhǔn)物的活力或濃度二、測(cè)定方法2023/2/28 星期日 27n 即零級(jí)反應(yīng)速率法 ,亦稱(chēng)斜率法在較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間區(qū)段內(nèi) (90180秒 )，每隔一定時(shí)間 (5~30秒 )讀取一次吸光度值，至少讀取4點(diǎn)，得到 3個(gè)以上 △ A，最后算出反應(yīng)速率△ A/min。二、測(cè)定方法2023/2/28 星期日 28n 主要用于其反應(yīng)過(guò)程不成線性，這樣只注意其反應(yīng)的起始點(diǎn)和終止點(diǎn)，而忽視其中間過(guò)程的線性變化。如：測(cè)定苦味酸法測(cè) Cr，反應(yīng)過(guò)程中 Vit C、丙酮酸、蛋白質(zhì)等均可與苦味酸生成紅色化合物而干擾反應(yīng)，通常選擇 1min內(nèi)的兩點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定。二、測(cè)定方法2023/2/28 星期日 29AlTAS+R1R2A2(吸光度）（時(shí)間）速率法A/min=[(A2A1 )(空白 )]/(t2t1)二、測(cè)定方法A2TAS+R1A1R2(吸光度）（時(shí)間）兩點(diǎn)速率 Ax= A2A1tt2023/2/28 星期日 31n 速率 B法測(cè)定／及樣品空白自動(dòng)補(bǔ)償：在第一反應(yīng) (干擾反應(yīng) )一直維持線性的前提下，可以從第二反應(yīng) (主反應(yīng) )速率中扣除第一反應(yīng)速率的延續(xù)影響。如用于消除膽紅素轉(zhuǎn)化為膽綠素吸光度下降、對(duì)肌酐苦味酸法測(cè)定的負(fù)干擾等二、測(cè)定方法2023/2/28 星期日 32n 雙項(xiàng)同測(cè)法：指在不同時(shí)間向同一個(gè)比色杯加入幾種試劑，(一個(gè)通道內(nèi)一次進(jìn)行兩項(xiàng)反應(yīng)相關(guān)的終點(diǎn)法) 。比如同測(cè)游離脂肪酸和甘油三酯。二、測(cè)定方法：=某點(diǎn)吸光度 比色杯水空白=(終點(diǎn)測(cè)定吸光度 終點(diǎn)空白吸光度)一 (始點(diǎn)測(cè)定吸光度 始點(diǎn)空白吸光度 ) (帶試劑空白 ) =
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