【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 方法中節(jié)中加以敘述給出其詳細(xì)程序。v 5．結(jié)果報(bào)告v 填報(bào)采用本章第三節(jié)和第四節(jié)規(guī)定的程序，將活力測(cè)定結(jié)果，填報(bào)在檢驗(yàn)報(bào)告 “其他測(cè)定 ”欄內(nèi)。同時(shí)結(jié)果還須附有檢測(cè)方法的說(shuō)明，包括必要時(shí)測(cè)定方法及條件包括時(shí)間、溫度和種子水分等信息。56第三節(jié) 加速老化試驗(yàn)v 一、原理v 加速老化試驗(yàn) (accelerated ageing test，以下簡(jiǎn)稱 AA測(cè)定 )是根據(jù)高溫 (40～ 45℃ )和高濕(100％相對(duì)濕度 )能導(dǎo)致種子快速劣變這一原理進(jìn)行測(cè)定。v 高活力種子能忍受逆境條件處理，劣變較慢；而低活力種子劣變較快，長(zhǎng)成較多的不正常幼苗或者完全死亡。57v AA測(cè)定最早是由 Delouehe等 (1973)創(chuàng)造的用來(lái)預(yù)測(cè)許多種的種子壽命。經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展，目前 AA測(cè)定主要用于兩方面，v 一是預(yù)測(cè)田間出苗率v 二是預(yù)測(cè)耐藏性58第三節(jié) 加速老化試驗(yàn)v 二、適用范圍與局限性v 《 國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程 》 所規(guī)范的 AA測(cè)定法適用于大豆種子；v ISTA手冊(cè)指出該法也適用于許多其他種，詳見(jiàn)表 152所列的種。 AA測(cè)定結(jié)果也是可以控制的。 AOSA和 ISTA用大豆種子核準(zhǔn)試驗(yàn)表明在試驗(yàn)室間有很大的一致性，并證實(shí) AA發(fā)芽試驗(yàn)與田間出苗的關(guān)系?，F(xiàn)在也有足夠證據(jù)證實(shí)用該試驗(yàn)?zāi)苋〉弥匮菪越Y(jié)果。因此， AOSA現(xiàn)在認(rèn)為作為大豆試驗(yàn)的方法已經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化，可以推薦。但是必須按本節(jié)所規(guī)定的程序和儀器進(jìn)行操作，在溫度控制、樣品大小或老化時(shí)間的小量改動(dòng)會(huì)引起最后水分和 (或 )發(fā)芽率的變化。59第三節(jié) 加速老化試驗(yàn)v 三、儀器和藥品v １．老化外箱：推薦應(yīng)用水套培養(yǎng)箱，保持恒溫 (41土 )℃。如果沒(méi)有水套培養(yǎng)箱，其他有加水的加熱培養(yǎng)箱也可。使用這些培養(yǎng)箱，水應(yīng)在外箱內(nèi)，以防凝結(jié)。水掉在內(nèi)箱盒上，會(huì)在蓋內(nèi)產(chǎn)生凝結(jié)，提高種子水分，降低發(fā)芽率，增加發(fā)霉。因此，當(dāng)外箱有大量凝結(jié)水時(shí)，當(dāng)心保護(hù)內(nèi)箱在老化期間的小水點(diǎn)積累。外箱通常不需要很準(zhǔn)確的溫度控制，需要附加控制保持溫度均勻。v ２．老化內(nèi)箱： 老化內(nèi)箱 為帶蓋的塑料盒，大小為 ，內(nèi)有一個(gè)網(wǎng)架盤(pán)0． 3cm(網(wǎng)孔為 1418)。老化內(nèi)箱可以購(gòu)買(mǎi)，也可以自制（見(jiàn)圖 153）。注意蓋不應(yīng)密封（見(jiàn)圖 153）。6061第三節(jié) 加速老化試驗(yàn)v ３．天平：感量為 。v ４．水：去離子水或蒸餾水。v ５．帶刻度的容量杯：刻度從 0至 100mL，從標(biāo)準(zhǔn)的容量器或有 50mL刻度的容器準(zhǔn)確量取40mL水。v ６．鋁盒 (供種子水分測(cè)定 )。v ７．發(fā)芽試驗(yàn)設(shè)備。62第三節(jié) 加速老化試驗(yàn)v 四、程序v 1．預(yù)備試驗(yàn)．v （１）檢查老化外箱v 老化外箱的溫度必須經(jīng)過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量院的檢定或類似的溫度計(jì)。v （２）檢查溫度v 收集按規(guī)定的程序／系統(tǒng)進(jìn)行操作的老化外箱的溫度和其均勻度的記錄數(shù)據(jù)，如果記錄顯示能達(dá)到表 152所規(guī)定的溫度（對(duì)于大豆種子，所有水平應(yīng)達(dá)到 4l177?！?)下才能進(jìn)行 AA測(cè)定。v （３）保證老化內(nèi)箱的清潔度v 為了防止菌類污染，使用過(guò)的老化內(nèi)箱、蓋和網(wǎng)架需經(jīng)過(guò)熱消毒或用 15％次氯酸鈉溶液洗凈并烘干，才可進(jìn)行 AA測(cè)定。63第三節(jié) 加速老化試驗(yàn)v ２．測(cè)定每一種子批的程序v （１）檢查種子水分v 如果不知道測(cè)定種子批的水分，應(yīng)采用烘箱法測(cè)定種子批的水分。對(duì)于水分低于 10％或高于 14％的種子批，應(yīng)在 AA測(cè)定前將其 水分調(diào)節(jié)至 10％～ 14％ 。v 記錄種子水分，決定是否必須提高種子水分或降低種子水分至規(guī)定范圍。64第三節(jié) 加速老化試驗(yàn)v （２）準(zhǔn)備老化內(nèi)箱v 把 40mL去離子水或蒸餾水放入老化內(nèi)箱，然后放入網(wǎng)架，確信水不滲到網(wǎng)架和后加的種子上。v 從凈種子中稱取 42g(至少含有 200粒種子 )種子，稱重后放在網(wǎng)架上，攤成一層。v 老化的種子最好不要經(jīng)過(guò)處理，然而，該作物種子是以殺菌劑處理銷售的，可以使用處理種子。每次外箱用于 AA測(cè)定，應(yīng)包括一個(gè)對(duì)照樣品。保證每一內(nèi)箱有蓋 (不要封口 )。注意蓋不應(yīng)密封。65第三節(jié) 加速老化試驗(yàn)v （３）使用老化外箱v 內(nèi)箱排成一排放在架上，同時(shí)放入外箱內(nèi)。為了使溫度均勻一致，外箱內(nèi)的兩個(gè)內(nèi)箱之間間隔大約為。v 記錄內(nèi)箱放人外箱的時(shí)間。準(zhǔn)確監(jiān)控老化外箱的溫度在表 152的范圍和時(shí)間內(nèi)，如大豆種子在(41177。)℃ 溫度保持 72h。v 在老化規(guī)定期間，不能打開(kāi)外箱的門(mén)。如果這時(shí)已經(jīng)打開(kāi)門(mén)，應(yīng)從箱中取出種子重新進(jìn)行測(cè)定。 66表 152 不同作物種子 AA測(cè)定老化條件67第三節(jié) 加速老化試驗(yàn)v （ 4）發(fā)芽試驗(yàn) v 經(jīng) 72h老化時(shí)間后，從外箱取出內(nèi)箱，記錄這時(shí)的時(shí)間。取出一小時(shí)內(nèi)用 50粒四個(gè)重復(fù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)。v 在同一天內(nèi)如果有許多批種子進(jìn)行老化試驗(yàn)，樣品應(yīng)進(jìn)行分類，在兩個(gè)老化外箱的試驗(yàn)應(yīng)間隔 1h，以便有時(shí)間在老化后進(jìn)行置床發(fā)芽。大豆種子發(fā)芽的條件已在 GB／ T 。68第三節(jié) 加速老化試驗(yàn)v （ 5）檢查老化后對(duì)照樣品的水分v 在老化結(jié)束時(shí)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽前，從內(nèi)箱中取出對(duì)照樣品的一個(gè)小樣品 (10～ 20粒 )，馬上稱重，用烘箱法測(cè)定種子水分 (以鮮重為基礎(chǔ) )。v 記錄對(duì)照樣品種子水分，如果種子水分低于或高于表 152所規(guī)定的值 (對(duì)于大豆，種子水分應(yīng)在 27％～30％ )，則試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，應(yīng)重作試驗(yàn)。69第三節(jié) 加速老化試驗(yàn)v （ 6）結(jié)果計(jì)算與表示v 用四次 50粒重復(fù)的平均結(jié)果表示人工老化發(fā)芽結(jié)果，以百分率表示。v （ 7）結(jié)果說(shuō)明解釋v AA測(cè)定并不提供一個(gè)絕對(duì)的活力范圍，只是通過(guò)一段時(shí)間的高溫高濕逆境后進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)的結(jié)果。v 該結(jié)果與老化前同一種子批的發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果比較，如果 AA結(jié)果類同于標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果為高活力，低于標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果為中至低活力。這樣，可用該結(jié)果來(lái)排列種子批活力，來(lái)判定貯藏潛力或每一種子批的播種潛力。70第四節(jié) 電導(dǎo)率測(cè)定v 高活力種子細(xì)胞膜完整性好，浸入水中后滲出的可溶性物質(zhì)或電解質(zhì)少，浸泡液的電導(dǎo)率低。電導(dǎo)率與田間出苗率成顯著的負(fù)相關(guān)，借此可用電導(dǎo)率的高低判別種子活力的高低。v 大粒豆類種子的電導(dǎo)率結(jié)果提供比標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽與田間出苗率更強(qiáng)的相關(guān)性。71第四節(jié) 電導(dǎo)率測(cè)定v 一、原理v 細(xì)胞膜在種子生理成熟前的種子發(fā)育中發(fā)生了結(jié)構(gòu)變化，種子劣變發(fā)生于成熟前和發(fā)芽前的吸脹。劣變生化變化和生理紊亂所引起的細(xì)胞膜完整性變化是造成種子活力的最主要差異。在早期吸脹時(shí)，細(xì)胞膜的恢復(fù)和修補(bǔ)可能影響種子的滲漏率。種子重組恢復(fù)細(xì)胞膜的速度越快，滲漏液越少。 高活力種子能迅速修復(fù)細(xì)胞膜能力，而低活力種子較差，所以，高活力種子所測(cè)得的電導(dǎo)率比低活力種子低。 低活力種子批的滲漏會(huì)造成二次感染，種子滲漏的營(yíng)養(yǎng)液加速土壤微生物活動(dòng)和二次感染。種子中滲出的碳水化合物的數(shù)量也與細(xì)菌生長(zhǎng)呈正相關(guān)。72第四節(jié) 電導(dǎo)率測(cè)定v 二、適用范圍與局限性v 《 國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程 》 所規(guī)范的電導(dǎo)率測(cè)定適用于豌豆種子；v ISTA活力手冊(cè)指出該法也適用于許多其他種，如大粒豆科種子（特別是大豆、綠豆等）、棉花、玉米、番茄、洋蔥等種子。 AOSA 和 ISTA 活力測(cè)定委員會(huì)認(rèn)為，菜豆和大豆的電導(dǎo)率測(cè)定結(jié)果具有重演性，與田間出苗率有較大的相關(guān)性，該測(cè)定已被種子產(chǎn)業(yè)用來(lái)評(píng)定菜豆種子出售前的出苗率。v 已在歐洲、澳大利亞、新西蘭和北美已得到廣泛地使用。電導(dǎo)率測(cè)定作為一個(gè)快速、客觀的活力測(cè)定方法，特別易用于大多數(shù)種子檢驗(yàn)室檢測(cè)，因?yàn)樵擁?xiàng)目的儀器投入較少、人員培訓(xùn)簡(jiǎn)單。73v 有幾種因素影響電導(dǎo)率結(jié)果，v 第一種因素是大粒豆類種皮的 物理?yè)p傷 導(dǎo)致水分快速吸收，造成機(jī)械損傷和高水平的電解質(zhì)滲漏，因此，某些研究者建議除去物理?yè)p傷種子。然而機(jī)械損傷種子的肉眼觀察是主觀的、不準(zhǔn)確的，這些種子結(jié)果的例外會(huì)導(dǎo)致種子活力的過(guò)高估計(jì)。只能按照 ISTA 規(guī)定從樣品中扦取凈種子，這樣才能提供不偏樣品供檢驗(yàn)。v 第二種因素是 種子大小 ，這涉及到在測(cè)定前通過(guò)稱重而消失，并將結(jié)果表示為 181。S cm1 g1。v 第三種因素是 原始種子水分 ，在測(cè)定前測(cè)定種子水分，調(diào)節(jié)種子水分不在 10%～ 14%的種子批，可以消除這個(gè)問(wèn)題。v 第四種是 處理種子 的影響，用大豆種子的研究表明，并不支持從處理后的種子去除殺菌劑，但是其他種子處理對(duì)電導(dǎo)率的影響并不知道，如果可能，應(yīng)測(cè)定未處理的種子。74v 三、儀器和藥品v v 可用直流電或交流電直接讀數(shù)的電導(dǎo)儀，電極常數(shù)必須達(dá)到（電極常數(shù)是指電極板之間的有效距離與極板的面積之比）。有關(guān)具體品牌、型號(hào)的電導(dǎo)儀可向 ISTA秘書(shū)處咨詢。v v 最好使用去離子水，也可使用蒸餾水。凡使用的水必須進(jìn)行電導(dǎo)率測(cè)定。在 20℃ 下，去離子水電導(dǎo)率不超過(guò) 2μS cm－ 1；蒸餾水電導(dǎo)率不超過(guò) 5μS cm－ 1。使用前水應(yīng)保持在（20177。1） ℃ 。75第四節(jié) 電導(dǎo)率測(cè)定v v 為了保證有適宜的水浸沒(méi)種子和電極，燒杯和容器的容量為 500mL，基部寬 80mm177。5mm。容器使用前必須沖洗干凈，并用去離子水或蒸餾水沖洗兩次。v 、培養(yǎng)箱或發(fā)芽室v 滿足保持（ 20177。1） ℃ 的恒溫。v v 滿足溫度達(dá)到 130℃ 或者 103℃ 。v v 感量達(dá)到 。v （供種子水分測(cè)定用）。76第四節(jié) 電導(dǎo)率測(cè)定v 四、程序v v （ 1）校正電極v （ 2）核查對(duì)照種子批的電導(dǎo)率v （ 3）檢查儀器清潔度v （ 4）檢查溫度77第四節(jié) 電導(dǎo)率測(cè)定v v （ 1）檢查種子水分v 如果不知道測(cè)定種子批的水分，應(yīng)采用烘箱法測(cè)定種子批的水分。對(duì)于水分低于 10%或高于 14%的種子批，應(yīng)在浸種前將其水分調(diào)至 10%～ 14%。78第四節(jié) 電導(dǎo)率測(cè)定v （ 2）準(zhǔn)備燒杯v 準(zhǔn)確量取 250mL去離子水或蒸餾水，放入 500mL的燒杯中。每種子批測(cè)定 4個(gè)燒杯。含水的所有燒杯應(yīng)用鋁箔或薄膜蓋子蓋好，以防止污染。在盛放種子前，先在 20℃ 下平衡 24h。為了控制水的質(zhì)量，每次測(cè)定準(zhǔn)備兩個(gè)只含去離子水或蒸餾水的對(duì)照杯。v （ 3）準(zhǔn)備試樣v 隨機(jī)從種子批凈種子部分?jǐn)?shù)取每個(gè)各為 50粒的四個(gè)次級(jí)樣品，稱重至 。79第四節(jié) 電導(dǎo)率測(cè)定v （ 4）浸種v 已稱重的試樣放入已盛有 250mL去離子水的 500mL、先粘有標(biāo)鑒的容器中。輕輕搖晃容器，確保所有種子完全浸沒(méi)。所有容器用鋁箔或薄膜蓋蓋好，在（ 20177。1) ℃ 放置 24h。在同一時(shí)間內(nèi)測(cè)定的燒杯的數(shù)量不能太多，不能超過(guò)電導(dǎo)率評(píng)定的數(shù)目，通常為 10～ 12個(gè)容器，一批測(cè)定一般不超過(guò) 15min。v （ 5）準(zhǔn)備電導(dǎo)儀v 試驗(yàn)前先啟動(dòng)電導(dǎo)儀至少 15min。每次測(cè)定同時(shí)用去離子水或蒸餾水填滿容器杯 400～ 600mL 沖洗電極，作為沖洗水，去離子水電導(dǎo)率不應(yīng)超過(guò) 2μScm－ 1或蒸餾水不超過(guò) 5μScm－ 1。80第四節(jié) 電導(dǎo)率測(cè)定v (6）測(cè)定溶液電導(dǎo)率v 24h（ 177。15min）的浸種結(jié)束后，應(yīng)馬上測(cè)定溶液的電導(dǎo)率。盛有種子的燒杯應(yīng)輕微搖晃 10～ 15s，移去鋁箱或薄膜蓋，電極插入不要過(guò)濾的溶液，注意不要把電極放在種子上。測(cè)定幾次直到獲得一個(gè)穩(wěn)定值。測(cè)定一個(gè)試樣重復(fù)后，用去離子水或蒸餾水沖洗電極兩次，用濾紙吸干，再測(cè)定下一個(gè)試樣重復(fù)。如果在測(cè)定期間觀察到硬實(shí)，測(cè)定電導(dǎo)率后應(yīng)將其除去，記數(shù)，干燥表面，稱量，并從 50 粒種子樣品重量中減去其重量。81第四節(jié) 電導(dǎo)率測(cè)定v （ 7）扣除試驗(yàn)用水的電導(dǎo)率v 在（ 20177。1) ℃ 測(cè)定對(duì)照杯的去離子水或蒸餾水的電導(dǎo)率，比較該數(shù)與日常的水源記錄（如果讀數(shù)高于日常水源讀數(shù)，表明電極清潔度有問(wèn)題，應(yīng)重新清洗電極，重新測(cè)定另一對(duì)照杯）。每一重復(fù)應(yīng)從上述容器的測(cè)定值中減去對(duì)照杯中的測(cè)定值（燒杯的背景值）。v 處理種子的送驗(yàn)樣品可能已經(jīng)殺菌劑處理。 目前沒(méi)有證據(jù)表明種子殺菌劑處理會(huì)影響電導(dǎo)率結(jié)果，但是沒(méi)有對(duì)所有的商用種子處理評(píng)定過(guò)。 但是，不同純度的商用殺菌劑中的某些含有添加劑會(huì)嚴(yán)重改變電導(dǎo)結(jié)果。所以，對(duì)于經(jīng)過(guò)殺菌劑處理的種子應(yīng)特別小心，特別是使用新的殺菌劑。82v （ 8）結(jié)果計(jì)算與表示v 根據(jù)下列公式計(jì)算每一重復(fù)的種子重量的每克電導(dǎo)率：4次重復(fù)間平均值為種子批的結(jié)果。四次重復(fù)間容許差距為 5μS cm－ 1g－ 1（最低和最高的差），如超過(guò)，應(yīng)重做 4次重復(fù)。83第四節(jié) 電導(dǎo)率測(cè)定v （ 9）結(jié)果說(shuō)明解釋v 根據(jù)電導(dǎo)率測(cè)定結(jié)果，即用活力水平對(duì)種子批進(jìn)行排列。英國(guó)已在豌豆上應(yīng)用多年，總結(jié)出表 153的經(jīng)驗(yàn)。84表 153 豌豆種子電導(dǎo)率值的解釋85第五節(jié) 種子活力的其他測(cè)定方法v 一、幼苗生長(zhǎng)特性測(cè)定v 幼苗生長(zhǎng)特性測(cè)定主要包括幼苗生長(zhǎng)測(cè)定、幼苗評(píng)定測(cè)定、種子發(fā)芽速率、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)測(cè)定等方法。v 這類測(cè)定方法是根據(jù)高活力種子幼苗生長(zhǎng)快、幼苗健壯、生長(zhǎng)正常、幼苗株大和重量較重等生長(zhǎng)特性，而低活力種子則相反，借此來(lái)評(píng)定種子活力水平的差異。86v v 幼苗生長(zhǎng)測(cè)定方法適用于具有直立胚芽和胚根的禾谷