【文章內(nèi)容簡介】 方法中節(jié)中加以敘述給出其詳細程序。v 5．結(jié)果報告v 填報采用本章第三節(jié)和第四節(jié)規(guī)定的程序，將活力測定結(jié)果，填報在檢驗報告 “其他測定 ”欄內(nèi)。同時結(jié)果還須附有檢測方法的說明，包括必要時測定方法及條件包括時間、溫度和種子水分等信息。56第三節(jié) 加速老化試驗v 一、原理v 加速老化試驗 (accelerated ageing test，以下簡稱 AA測定 )是根據(jù)高溫 (40～ 45℃ )和高濕(100％相對濕度 )能導(dǎo)致種子快速劣變這一原理進行測定。v 高活力種子能忍受逆境條件處理，劣變較慢；而低活力種子劣變較快，長成較多的不正常幼苗或者完全死亡。57v AA測定最早是由 Delouehe等 (1973)創(chuàng)造的用來預(yù)測許多種的種子壽命。經(jīng)過多年的發(fā)展，目前 AA測定主要用于兩方面，v 一是預(yù)測田間出苗率v 二是預(yù)測耐藏性58第三節(jié) 加速老化試驗v 二、適用范圍與局限性v 《 國際種子檢驗規(guī)程 》 所規(guī)范的 AA測定法適用于大豆種子；v ISTA手冊指出該法也適用于許多其他種，詳見表 152所列的種。 AA測定結(jié)果也是可以控制的。 AOSA和 ISTA用大豆種子核準試驗表明在試驗室間有很大的一致性，并證實 AA發(fā)芽試驗與田間出苗的關(guān)系?，F(xiàn)在也有足夠證據(jù)證實用該試驗?zāi)苋〉弥匮菪越Y(jié)果。因此， AOSA現(xiàn)在認為作為大豆試驗的方法已經(jīng)標準化，可以推薦。但是必須按本節(jié)所規(guī)定的程序和儀器進行操作，在溫度控制、樣品大小或老化時間的小量改動會引起最后水分和 (或 )發(fā)芽率的變化。59第三節(jié) 加速老化試驗v 三、儀器和藥品v １．老化外箱：推薦應(yīng)用水套培養(yǎng)箱，保持恒溫 (41土 )℃。如果沒有水套培養(yǎng)箱，其他有加水的加熱培養(yǎng)箱也可。使用這些培養(yǎng)箱，水應(yīng)在外箱內(nèi)，以防凝結(jié)。水掉在內(nèi)箱盒上，會在蓋內(nèi)產(chǎn)生凝結(jié)，提高種子水分，降低發(fā)芽率，增加發(fā)霉。因此，當外箱有大量凝結(jié)水時，當心保護內(nèi)箱在老化期間的小水點積累。外箱通常不需要很準確的溫度控制，需要附加控制保持溫度均勻。v ２．老化內(nèi)箱： 老化內(nèi)箱 為帶蓋的塑料盒，大小為 ，內(nèi)有一個網(wǎng)架盤0． 3cm(網(wǎng)孔為 1418)。老化內(nèi)箱可以購買，也可以自制（見圖 153）。注意蓋不應(yīng)密封（見圖 153）。6061第三節(jié) 加速老化試驗v ３．天平：感量為 。v ４．水：去離子水或蒸餾水。v ５．帶刻度的容量杯：刻度從 0至 100mL，從標準的容量器或有 50mL刻度的容器準確量取40mL水。v ６．鋁盒 (供種子水分測定 )。v ７．發(fā)芽試驗設(shè)備。62第三節(jié) 加速老化試驗v 四、程序v 1．預(yù)備試驗．v （１）檢查老化外箱v 老化外箱的溫度必須經(jīng)過國家標準計量院的檢定或類似的溫度計。v （２）檢查溫度v 收集按規(guī)定的程序／系統(tǒng)進行操作的老化外箱的溫度和其均勻度的記錄數(shù)據(jù)，如果記錄顯示能達到表 152所規(guī)定的溫度（對于大豆種子，所有水平應(yīng)達到 4l177?！?)下才能進行 AA測定。v （３）保證老化內(nèi)箱的清潔度v 為了防止菌類污染，使用過的老化內(nèi)箱、蓋和網(wǎng)架需經(jīng)過熱消毒或用 15％次氯酸鈉溶液洗凈并烘干，才可進行 AA測定。63第三節(jié) 加速老化試驗v ２．測定每一種子批的程序v （１）檢查種子水分v 如果不知道測定種子批的水分，應(yīng)采用烘箱法測定種子批的水分。對于水分低于 10％或高于 14％的種子批，應(yīng)在 AA測定前將其 水分調(diào)節(jié)至 10％～ 14％ 。v 記錄種子水分，決定是否必須提高種子水分或降低種子水分至規(guī)定范圍。64第三節(jié) 加速老化試驗v （２）準備老化內(nèi)箱v 把 40mL去離子水或蒸餾水放入老化內(nèi)箱，然后放入網(wǎng)架，確信水不滲到網(wǎng)架和后加的種子上。v 從凈種子中稱取 42g(至少含有 200粒種子 )種子，稱重后放在網(wǎng)架上，攤成一層。v 老化的種子最好不要經(jīng)過處理，然而，該作物種子是以殺菌劑處理銷售的，可以使用處理種子。每次外箱用于 AA測定，應(yīng)包括一個對照樣品。保證每一內(nèi)箱有蓋 (不要封口 )。注意蓋不應(yīng)密封。65第三節(jié) 加速老化試驗v （３）使用老化外箱v 內(nèi)箱排成一排放在架上，同時放入外箱內(nèi)。為了使溫度均勻一致，外箱內(nèi)的兩個內(nèi)箱之間間隔大約為。v 記錄內(nèi)箱放人外箱的時間。準確監(jiān)控老化外箱的溫度在表 152的范圍和時間內(nèi)，如大豆種子在(41177。)℃ 溫度保持 72h。v 在老化規(guī)定期間，不能打開外箱的門。如果這時已經(jīng)打開門，應(yīng)從箱中取出種子重新進行測定。 66表 152 不同作物種子 AA測定老化條件67第三節(jié) 加速老化試驗v （ 4）發(fā)芽試驗 v 經(jīng) 72h老化時間后，從外箱取出內(nèi)箱，記錄這時的時間。取出一小時內(nèi)用 50粒四個重復(fù)進行標準發(fā)芽試驗。v 在同一天內(nèi)如果有許多批種子進行老化試驗，樣品應(yīng)進行分類，在兩個老化外箱的試驗應(yīng)間隔 1h，以便有時間在老化后進行置床發(fā)芽。大豆種子發(fā)芽的條件已在 GB／ T 。68第三節(jié) 加速老化試驗v （ 5）檢查老化后對照樣品的水分v 在老化結(jié)束時進行標準發(fā)芽前，從內(nèi)箱中取出對照樣品的一個小樣品 (10～ 20粒 )，馬上稱重，用烘箱法測定種子水分 (以鮮重為基礎(chǔ) )。v 記錄對照樣品種子水分，如果種子水分低于或高于表 152所規(guī)定的值 (對于大豆，種子水分應(yīng)在 27％～30％ )，則試驗結(jié)果不準確，應(yīng)重作試驗。69第三節(jié) 加速老化試驗v （ 6）結(jié)果計算與表示v 用四次 50粒重復(fù)的平均結(jié)果表示人工老化發(fā)芽結(jié)果，以百分率表示。v （ 7）結(jié)果說明解釋v AA測定并不提供一個絕對的活力范圍，只是通過一段時間的高溫高濕逆境后進行發(fā)芽試驗的結(jié)果。v 該結(jié)果與老化前同一種子批的發(fā)芽試驗結(jié)果比較，如果 AA結(jié)果類同于標準發(fā)芽試驗結(jié)果為高活力，低于標準發(fā)芽試驗結(jié)果為中至低活力。這樣，可用該結(jié)果來排列種子批活力，來判定貯藏潛力或每一種子批的播種潛力。70第四節(jié) 電導(dǎo)率測定v 高活力種子細胞膜完整性好，浸入水中后滲出的可溶性物質(zhì)或電解質(zhì)少，浸泡液的電導(dǎo)率低。電導(dǎo)率與田間出苗率成顯著的負相關(guān)，借此可用電導(dǎo)率的高低判別種子活力的高低。v 大粒豆類種子的電導(dǎo)率結(jié)果提供比標準發(fā)芽與田間出苗率更強的相關(guān)性。71第四節(jié) 電導(dǎo)率測定v 一、原理v 細胞膜在種子生理成熟前的種子發(fā)育中發(fā)生了結(jié)構(gòu)變化，種子劣變發(fā)生于成熟前和發(fā)芽前的吸脹。劣變生化變化和生理紊亂所引起的細胞膜完整性變化是造成種子活力的最主要差異。在早期吸脹時，細胞膜的恢復(fù)和修補可能影響種子的滲漏率。種子重組恢復(fù)細胞膜的速度越快，滲漏液越少。 高活力種子能迅速修復(fù)細胞膜能力，而低活力種子較差，所以，高活力種子所測得的電導(dǎo)率比低活力種子低。 低活力種子批的滲漏會造成二次感染，種子滲漏的營養(yǎng)液加速土壤微生物活動和二次感染。種子中滲出的碳水化合物的數(shù)量也與細菌生長呈正相關(guān)。72第四節(jié) 電導(dǎo)率測定v 二、適用范圍與局限性v 《 國際種子檢驗規(guī)程 》 所規(guī)范的電導(dǎo)率測定適用于豌豆種子；v ISTA活力手冊指出該法也適用于許多其他種，如大粒豆科種子（特別是大豆、綠豆等）、棉花、玉米、番茄、洋蔥等種子。 AOSA 和 ISTA 活力測定委員會認為，菜豆和大豆的電導(dǎo)率測定結(jié)果具有重演性，與田間出苗率有較大的相關(guān)性，該測定已被種子產(chǎn)業(yè)用來評定菜豆種子出售前的出苗率。v 已在歐洲、澳大利亞、新西蘭和北美已得到廣泛地使用。電導(dǎo)率測定作為一個快速、客觀的活力測定方法，特別易用于大多數(shù)種子檢驗室檢測，因為該項目的儀器投入較少、人員培訓(xùn)簡單。73v 有幾種因素影響電導(dǎo)率結(jié)果，v 第一種因素是大粒豆類種皮的 物理損傷 導(dǎo)致水分快速吸收，造成機械損傷和高水平的電解質(zhì)滲漏，因此，某些研究者建議除去物理損傷種子。然而機械損傷種子的肉眼觀察是主觀的、不準確的，這些種子結(jié)果的例外會導(dǎo)致種子活力的過高估計。只能按照 ISTA 規(guī)定從樣品中扦取凈種子，這樣才能提供不偏樣品供檢驗。v 第二種因素是 種子大小 ，這涉及到在測定前通過稱重而消失，并將結(jié)果表示為 181。S cm1 g1。v 第三種因素是 原始種子水分 ，在測定前測定種子水分，調(diào)節(jié)種子水分不在 10%～ 14%的種子批，可以消除這個問題。v 第四種是 處理種子 的影響，用大豆種子的研究表明，并不支持從處理后的種子去除殺菌劑，但是其他種子處理對電導(dǎo)率的影響并不知道，如果可能，應(yīng)測定未處理的種子。74v 三、儀器和藥品v v 可用直流電或交流電直接讀數(shù)的電導(dǎo)儀，電極常數(shù)必須達到（電極常數(shù)是指電極板之間的有效距離與極板的面積之比）。有關(guān)具體品牌、型號的電導(dǎo)儀可向 ISTA秘書處咨詢。v v 最好使用去離子水，也可使用蒸餾水。凡使用的水必須進行電導(dǎo)率測定。在 20℃ 下，去離子水電導(dǎo)率不超過 2μS cm－ 1；蒸餾水電導(dǎo)率不超過 5μS cm－ 1。使用前水應(yīng)保持在（20177。1） ℃ 。75第四節(jié) 電導(dǎo)率測定v v 為了保證有適宜的水浸沒種子和電極，燒杯和容器的容量為 500mL，基部寬 80mm177。5mm。容器使用前必須沖洗干凈，并用去離子水或蒸餾水沖洗兩次。v 、培養(yǎng)箱或發(fā)芽室v 滿足保持（ 20177。1） ℃ 的恒溫。v v 滿足溫度達到 130℃ 或者 103℃ 。v v 感量達到 。v （供種子水分測定用）。76第四節(jié) 電導(dǎo)率測定v 四、程序v v （ 1）校正電極v （ 2）核查對照種子批的電導(dǎo)率v （ 3）檢查儀器清潔度v （ 4）檢查溫度77第四節(jié) 電導(dǎo)率測定v v （ 1）檢查種子水分v 如果不知道測定種子批的水分，應(yīng)采用烘箱法測定種子批的水分。對于水分低于 10%或高于 14%的種子批，應(yīng)在浸種前將其水分調(diào)至 10%～ 14%。78第四節(jié) 電導(dǎo)率測定v （ 2）準備燒杯v 準確量取 250mL去離子水或蒸餾水，放入 500mL的燒杯中。每種子批測定 4個燒杯。含水的所有燒杯應(yīng)用鋁箔或薄膜蓋子蓋好，以防止污染。在盛放種子前，先在 20℃ 下平衡 24h。為了控制水的質(zhì)量，每次測定準備兩個只含去離子水或蒸餾水的對照杯。v （ 3）準備試樣v 隨機從種子批凈種子部分數(shù)取每個各為 50粒的四個次級樣品，稱重至 。79第四節(jié) 電導(dǎo)率測定v （ 4）浸種v 已稱重的試樣放入已盛有 250mL去離子水的 500mL、先粘有標鑒的容器中。輕輕搖晃容器，確保所有種子完全浸沒。所有容器用鋁箔或薄膜蓋蓋好，在（ 20177。1) ℃ 放置 24h。在同一時間內(nèi)測定的燒杯的數(shù)量不能太多，不能超過電導(dǎo)率評定的數(shù)目，通常為 10～ 12個容器，一批測定一般不超過 15min。v （ 5）準備電導(dǎo)儀v 試驗前先啟動電導(dǎo)儀至少 15min。每次測定同時用去離子水或蒸餾水填滿容器杯 400～ 600mL 沖洗電極，作為沖洗水，去離子水電導(dǎo)率不應(yīng)超過 2μScm－ 1或蒸餾水不超過 5μScm－ 1。80第四節(jié) 電導(dǎo)率測定v (6）測定溶液電導(dǎo)率v 24h（ 177。15min）的浸種結(jié)束后，應(yīng)馬上測定溶液的電導(dǎo)率。盛有種子的燒杯應(yīng)輕微搖晃 10～ 15s，移去鋁箱或薄膜蓋，電極插入不要過濾的溶液，注意不要把電極放在種子上。測定幾次直到獲得一個穩(wěn)定值。測定一個試樣重復(fù)后，用去離子水或蒸餾水沖洗電極兩次，用濾紙吸干，再測定下一個試樣重復(fù)。如果在測定期間觀察到硬實，測定電導(dǎo)率后應(yīng)將其除去，記數(shù)，干燥表面，稱量，并從 50 粒種子樣品重量中減去其重量。81第四節(jié) 電導(dǎo)率測定v （ 7）扣除試驗用水的電導(dǎo)率v 在（ 20177。1) ℃ 測定對照杯的去離子水或蒸餾水的電導(dǎo)率，比較該數(shù)與日常的水源記錄（如果讀數(shù)高于日常水源讀數(shù)，表明電極清潔度有問題，應(yīng)重新清洗電極，重新測定另一對照杯）。每一重復(fù)應(yīng)從上述容器的測定值中減去對照杯中的測定值（燒杯的背景值）。v 處理種子的送驗樣品可能已經(jīng)殺菌劑處理。 目前沒有證據(jù)表明種子殺菌劑處理會影響電導(dǎo)率結(jié)果，但是沒有對所有的商用種子處理評定過。 但是，不同純度的商用殺菌劑中的某些含有添加劑會嚴重改變電導(dǎo)結(jié)果。所以，對于經(jīng)過殺菌劑處理的種子應(yīng)特別小心，特別是使用新的殺菌劑。82v （ 8）結(jié)果計算與表示v 根據(jù)下列公式計算每一重復(fù)的種子重量的每克電導(dǎo)率：4次重復(fù)間平均值為種子批的結(jié)果。四次重復(fù)間容許差距為 5μS cm－ 1g－ 1（最低和最高的差），如超過，應(yīng)重做 4次重復(fù)。83第四節(jié) 電導(dǎo)率測定v （ 9）結(jié)果說明解釋v 根據(jù)電導(dǎo)率測定結(jié)果，即用活力水平對種子批進行排列。英國已在豌豆上應(yīng)用多年，總結(jié)出表 153的經(jīng)驗。84表 153 豌豆種子電導(dǎo)率值的解釋85第五節(jié) 種子活力的其他測定方法v 一、幼苗生長特性測定v 幼苗生長特性測定主要包括幼苗生長測定、幼苗評定測定、種子發(fā)芽速率、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)測定等方法。v 這類測定方法是根據(jù)高活力種子幼苗生長快、幼苗健壯、生長正常、幼苗株大和重量較重等生長特性，而低活力種子則相反，借此來評定種子活力水平的差異。86v v 幼苗生長測定方法適用于具有直立胚芽和胚根的禾谷