植物組織培養(yǎng)技術(shù)第七章植物脫毒快繁技術(shù)(編輯修改稿)
2025-02-03 04:58 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 愈傷組織培養(yǎng)脫毒 愈傷組織細胞帶病原菌不均一，部分細胞不帶病毒，由這些細胞再生的植株是無病毒的。多次繼代的愈傷組織中病毒含量下降，甚至檢測不出病毒。 愈傷組織的某些細胞不帶病毒原因： 病毒的復制速度趕不上細胞的增殖速度； 有些細胞通過突變獲得了抗病毒的抗性。 愈傷組織脫毒的缺陷是植株遺傳性不穩(wěn)定，可能會產(chǎn)生變異植株。 理由： ①病毒的復制速度趕不上細胞的增殖速度；② 有些細胞通過突變獲得了抗病毒的抗性。 缺點： 植株遺傳性不穩(wěn)定，可能會產(chǎn)生變異植株 （二）莖尖微體嫁接 1. 概念： 將無病毒莖尖（ ~ ）嫁接在培養(yǎng)基上培養(yǎng)的實生砧木上，以獲得脫毒苗木的技術(shù)。 2. 適宜 ：莖尖培養(yǎng)難以生根的植物，如桃、柑橘、蘋果等 3. 無病毒莖尖來源： 成年無病毒植物、溫室培養(yǎng)的植物、熱處理植物和脫毒試管苗。 （三）化學療法脫毒 ? 許多化學藥品 (包括嘌呤、嘧啶類似物、氨基酸、抗菌素等 )對離體組織和原生質(zhì)體的培養(yǎng)具有脫毒效果。 ? 常用的藥品有： 8氮鳥嘌呤、 2硫脲嘧啶、殺稻瘟抗菌素、放線菌素 D、慶大霉素等。 ? 例如，將 100ug2硫脲嘧啶加入培養(yǎng)基可除去煙草愈傷組織中的 PVY (馬鈴薯病毒 )。 三、脫毒快繁材料的選擇 應(yīng)注意以下幾點： 1）品種要可靠 2）要選擇經(jīng)當?shù)卦耘啻_認的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的品種來作 為脫毒材料 3）名貴的植物良種 4）植物生長旺盛期，再生率高，脫毒效果好 四、植物病毒的鑒定 外觀判斷法 指示植物法 抗血清鑒定法 電子顯微鏡檢查法 酶聯(lián)免疫鑒定法 (ELISA) 外觀判斷法： 帶病毒株往往葉片發(fā)黃，凹凸不平，畸形，可根據(jù)這些表現(xiàn)來判斷。但有些病毒表現(xiàn)不明顯，僅靠這一方法還不夠。 指示植物檢測法： 指示植物又稱鑒別寄主，指的是對某種或某些特定病毒非常敏感，而且癥狀表現(xiàn)十分明顯的植物。 通常不同病毒應(yīng)選用不同的植物。馬鈴薯病毒常用指示植物有千日紅、曼陀羅、豇豆、辣椒等。 分為 2種 ①汁液感染法 ②嫁接檢測法 千日紅 曼陀羅 豇豆 抗血清鑒定法（抗原－抗體反應(yīng)） 原理：由于病毒是由蛋白質(zhì)和核酸組成的，是一種較好的抗原。將病毒給動物注射后產(chǎn)生抗體。抗原和抗體結(jié)合產(chǎn)生血清反應(yīng)?？乖翰《??？贵w：是指生物體在外來抗原的刺激下產(chǎn)生的一種免疫球蛋白，主要存在于血清中，含抗體的血清稱為抗血清。 鑒定方法： 抗原的制備 →→ 抗血清的采收，分離 →→把稀釋的抗血清與未知的病毒植物的汁液在小試管內(nèi)混合 →→ 根據(jù)沉淀反應(yīng)來鑒定病毒種類。 植物無病毒苗的培育 3. 特點： 特異性高（這種抗血清是高度專一性的試劑），測定速度快，一般幾小時甚至幾分鐘就可以完成。所以抗血清法成為植物病毒鑒定中最有用的方法之一。 植物無病毒苗的培育 電子顯微鏡檢查法 ? 病毒有一定的形態(tài)（ 球狀、桿狀、線狀等）和大?。? ~ ）。 ? 采用電子顯微鏡（分辨率 ）可以直接觀察病毒，檢查出有無病毒存在，并鑒定病毒的種類。 ? 優(yōu)點：靈敏度高，能在植物粗提取液中定量測定病毒。 酶聯(lián)免疫吸附測定法 (ELISA) 把抗原 抗體的 免疫反應(yīng) 于 酶的催化反應(yīng) 相結(jié)合而發(fā)展起來的一種綜合性技術(shù)，靈敏度高，特異性強，發(fā)展最快應(yīng)用最廣的方法。 原理： 采用酶標記的特異抗體指示抗原 抗體的結(jié)合，從而檢測樣品中的抗原定量測定法。 操作程序： 將待檢植物汁液注入酶聯(lián)板（聚苯乙烯多孔微量反應(yīng)板）中，使抗原吸附在它的孔壁，加入酶(過氧化物 酶或堿性磷酸酶 )標記的特異抗體， 抗原 抗體充分反應(yīng)后，清洗，固相載體 酶聯(lián)板表面只留下以酶標記的 抗原 抗體復合物。加入酶嘚無色底物，復合物上的酶催化底物降解，生成有色物。結(jié)果可由肉眼識別，也可 用特殊分光光度計對底物的降解量進行測定。 五、快速繁殖 莖尖培養(yǎng)得到的脫毒苗不多，用于生產(chǎn)需擴大繁殖。 擴繁方
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