westernblotting技術(shù)實驗室專用(編輯修改稿)
2024-09-17 13:23 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ml，輕輕混勻，避免氣泡產(chǎn)生。倒膠前加入10 μl的10% APS以及2 μl的TEMED，輕輕混勻，緩慢注入兩玻璃板之間分離膠的上方，加滿，插入梳子。室溫放置待其凝固。B. 蛋白樣本制備取20~100 μg的總蛋白，加入同樣體積的2蛋白上樣緩沖液，于沸水中煮5 min，然后6000 rmp、2 min，取上清待用。C. 電泳a) 把做好的濃縮分離膠板放入電泳裝置中，加入1蛋白電泳緩沖液，輕輕拔出梳子。b) 把蛋白樣本加入加樣孔。c) 電泳：濃縮膠70 V，分離膠140 V，直至溴酚藍遷移至底部，停止電泳。D. 電轉(zhuǎn)膜a) 準(zhǔn)備好與膠大小一致的硝酸纖維素膜一張、兩張相應(yīng)大小的濾紙，將其與纖維墊放入1蛋白轉(zhuǎn)膜緩沖液中浸泡15~60 min。b) 按照纖維墊、濾紙、膠、膜、濾紙、纖維墊的順序作好轉(zhuǎn)膜三明治，濾紙、膠、膜、濾紙各層中要用玻棒趕盡氣泡，然后放入轉(zhuǎn)膜裝置中。注意放置的次序：負極（黑孔板）—→纖維墊 —→濾紙 —→膠 —→膜—→濾紙 —→纖維墊 —→正極（紅孔板）。c) 于4℃、100 V轉(zhuǎn)膜1~2 h。d) 轉(zhuǎn)膜完畢后，取出膜，放入麗春紅染液中染色5 min，觀察轉(zhuǎn)膜效果。e) 將膜于清水中沖洗，洗去麗春紅，放入PBS，待用。E. 封閉將膜放入5%脫脂奶粉（PBS配制）中，于脫色搖床中室溫緩慢搖1 h。F. 雜交a) 用PBS
范文總結(jié)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1