【文章內(nèi)容簡介】 低溫、真空技術(shù)和避免高溫、高壓等劇烈反應(yīng)，以減少放射性沾污 。? 化學(xué)合成法? 化學(xué)合成法一般都應(yīng)用非標(biāo)記物進(jìn)行充分的預(yù)試驗 (常稱冷試驗 )，以選定最合適的制備路線及反應(yīng)條件。本法能獲得 高比活度 、 高純度 而又是 定位標(biāo)記 的標(biāo)記化合物，這是其他制備方法所不能同時達(dá)到的，因此它是制備標(biāo)記化合物的 最主要方法 。39四、放射性標(biāo)記化合物制備的基本方法生物合成法?是利用生物 (動植物或微生物 )的 生理代謝 或 酶 的生物活性，將簡單的放射性物質(zhì)在體內(nèi)或體外轉(zhuǎn)化成所需的放射性標(biāo)記物。?如 14CO2→ 加入藻類細(xì)胞中 → 產(chǎn)生的蛋白，含有 16種標(biāo)記的氨基酸 。?生物合成法又可分為 “ 全生物合成 ” 和 “ 酶促合成 ” 二類。前者常使用完整生物或某一器官的生理代謝進(jìn)行生物合成標(biāo)記，后者則利用生物組織中某種特定的酶，促進(jìn)合成反應(yīng)。以上二者，都是對某些放射性標(biāo)記物，特別是一些構(gòu)造復(fù)雜、化學(xué)合成難以制備或目前尚不可能制備的有機化合物進(jìn)行標(biāo)記的有用手段．40生物合成法優(yōu)點 ： 可完全保留標(biāo)記物原有的生物活性和旋光性 ，特別適合作生物示蹤應(yīng)用，可制備一些構(gòu)造復(fù)雜、化學(xué)合成難以完成或目前尚不可能制備的有機物，如某些蛋白質(zhì)、多糖、核酸、激素、生物堿及苷類等。缺點 ： 1）生成物復(fù)雜， 后續(xù)分離純化步驟比較繁雜 ，放射性原料的利用率往往較低； 2）除非所用原料的結(jié)構(gòu)已接近生成物，否則 很難標(biāo)記在某一特定位置上 ； 3）標(biāo)記率比較低酶促合成 是近年來很受注意的一種標(biāo)記技術(shù)，對制備一些生物活性物質(zhì)的定位標(biāo)記物有一定發(fā)展前途，產(chǎn)品比活度也可較高，前提是 必須有特異性高的酶制劑和高比活度的底物 。 41四、放射性標(biāo)記化合物制備的基本方法絡(luò)合物 /螯合物生成法216。將放射性金屬離子與特定的化合物進(jìn)行絡(luò)合和螯合反應(yīng)，標(biāo)記到化合物分子上的方法。216。優(yōu)點：快速、定量、操作簡易。臨床上最常用的方法。216。缺點：對標(biāo)記化合物的活性影響較大。 42第三節(jié) 幾種常用放射性標(biāo)記化合物的制備常用放射性標(biāo)記化合物的制備1. 14C標(biāo)記化合物的制備2. 氚標(biāo)記化合物的制備3. 放射性碘標(biāo)記物的制備4. 32P、 33P和 35S標(biāo)記化合物的制備5. 核酸和反義核苷酸的標(biāo)記 44同位素交換法、化學(xué)合成法、生物合成法(2) 制備：(1) 核素特點：＊一、 14C 標(biāo)記化合物的制備C處于化合物結(jié)構(gòu)的骨架地位14C標(biāo)記化合物的化學(xué)合成? 常以 Ba14CO3或 14CO2為起始原料，由這些原料經(jīng)一步或兩步反應(yīng)制備簡單的 14C標(biāo)記化合物，這些中間體經(jīng)常使用，有商品供應(yīng)。45如以 Ba14CO3為原料制備 14C丙氨酸：1. 全生物合成最常采用的生物是細(xì)菌、綠藻、酵母等，這些低等生物代謝活潑，繁殖迅速，容易迅速低將簡單的放射線原料 (例如 14CO2)摻入到細(xì)胞內(nèi)。如利用蛋白質(zhì)含量較高的小球藻在 14CO2的環(huán)境中進(jìn)行光合作用，使 14CO2摻入到細(xì)胞內(nèi)，生成含有 14C的蛋白質(zhì)、核酸及多糖4614C標(biāo)記化合物的生物合成2. 酶促合成利用某些特定的酶通過一步或幾步反應(yīng)，將標(biāo)記前身物轉(zhuǎn)化為所需要的標(biāo)記產(chǎn)物。例如：47關(guān)鍵：有相應(yīng)的前體和合適的酶14C標(biāo)記化合物的生物合成優(yōu)點：，可在反應(yīng)堆大量生產(chǎn)； β ,射程短 (~6mm),無需外輻射防護(hù)；，可觀察亞細(xì)胞形態(tài)標(biāo)記簡單，得率高、比活度高；（ ）、易運輸、貯存和安排實驗。不足： 不如 CC 牢固 ，易脫落；；，注意標(biāo)記位置遠(yuǎn)離反應(yīng)部位。 48二、氚 (3H) 標(biāo)記化合物的制備(1) 核素特點：49二、氚 (3H) 標(biāo)記化合物的制備(2) 制備：同位素交換法、化學(xué)合成法、生物合成法氚氣暴射交換溶液中的催化交換催化加氚法催化鹵素置換法氚化金屬還原法? 3H同位素交換法：直接將 3H氣體引入待標(biāo)記分子中進(jìn)行同位素交換反應(yīng)。503H同位素交換法氚氣暴射交換溶液中的催化交換故不常用！優(yōu)點優(yōu)點 ：簡單、方便。缺點缺點 ：易標(biāo)記在不穩(wěn)定位置上、化學(xué)鍵易斷、反應(yīng)時間較長、比活度低、純化困難。? 化學(xué)合成法是目前制備高比活度的氚定位標(biāo)記的最成熟、最重要的方法。? 需要： 1）合適前體 ： 常用烯烴、炔烴、有機鹵化物、腈及羧基化合物等； 2）還原劑：氚氣以及氚化金屬，如 NaBT LiBT KBT LiAlT4等。51化學(xué)合成法催化加氚法催化鹵素置換法氚化金屬還原法52化學(xué)合成法 之 催化加氚法將含有不飽和鍵的前體（烯烴、炔烴、有機鹵化物、腈及羧基化合物）溶解后在催化劑作用下和氚氣反應(yīng)數(shù)小時53化學(xué)合成法 之 催化鹵素置換法在催化條件下，氚很容易與溴、碘原子發(fā)生置換反應(yīng)（常加入少量有機胺類，中和反應(yīng)產(chǎn)物鹵化氚，有利于反應(yīng)進(jìn)行）54化學(xué)合成法 之 催化鹵素置換法用氚化金屬還原劑，如 NaBT LiBTKBT LiAlT4等，它們可以選擇性地將羧酸、酯、酮、醛和腈類化合物還原成相應(yīng)的醇類或胺類而實現(xiàn)定位標(biāo)記? 主要根據(jù) “ 酶促反應(yīng) ” 的原理，以氚的標(biāo)記物為底物，利用專一性很強的酶作為催化劑，將該標(biāo)記物轉(zhuǎn)化成所需的另一種標(biāo)記物55生物合成法能定位標(biāo)記，而且保留生物活性56√√√三、放射性碘標(biāo)記化合物的制備57125I T1/2＝ 60d標(biāo)記物儲存應(yīng)用一段時間、商品化低能 γ 射線 ，無 β 粒子輻射分解少，標(biāo)記物穩(wěn)定性好三、放射性碘標(biāo)記化合物的制備58CONHCH2COOHICONHCH2COOH131I+Na131I KIO3H+131I－鄰碘馬尿酸(一 )同位素交換法HOIHO131I Na131I150℃ 1h131I－ 6 －膽固醇59(二 ) 蛋白質(zhì)、多肽的碘標(biāo)記技術(shù)前提：1）待標(biāo)記物要有易被碘原子結(jié)合或取代的基團(tuán)，對蛋白質(zhì)和多肽而言，最主要是酪氨酸，它易被碘化的部位是苯環(huán)上羥基的兩個鄰位。組氨酸和色氨酸殘基也有一定活性。（箭頭）2）必須先把 125I氧化成 125I260Na125IHO CH2CHCOOH CH2CHCOOHHO125I+125I2NH2 NH2125I－碘代酪氨酸氧化劑 ChT， H2O2標(biāo)記原理：(二 ) 蛋白質(zhì)、多肽的碘標(biāo)記技術(shù)61蛋白質(zhì)、多肽的碘標(biāo)記常用方法直接標(biāo)記法(1)氯胺 T法(2)乳過氧化物酶法(3)固相氧化法間接標(biāo)記法62631. 氯胺 T 法SO2NCH3 NaCl + 2Na125I + 2H2OSO2NHCH3 + 125I2 + +NaCl 2NaOH溫和氧化劑64⑴ 反應(yīng)液組成： Na1