基因轉(zhuǎn)染技術(shù)及其應(yīng)用簡(jiǎn)介(編輯修改稿)
2024-09-01 04:28 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 脂質(zhì)體還可以介導(dǎo) DNA和 RNA轉(zhuǎn)動(dòng)物和人的體內(nèi) ， 用于基因治療 。 人工合成的陽(yáng)離子脂質(zhì)體與帶負(fù)電荷的核酸結(jié)合后形成合物 ， 當(dāng)復(fù)合物接近細(xì)胞膜時(shí)被內(nèi)吞成為內(nèi)體進(jìn)入細(xì)胞質(zhì) ，隨后 DNA復(fù)合物被釋放進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi) 。 包括電穿孔 、 顯微注射及基因槍等方法 。 （ 1） 電穿孔法 利用高壓電脈沖對(duì)細(xì)胞膜的干擾，使其形成利于核酸進(jìn)人的微孔。電穿孔技術(shù)可用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，可方便地用于懸浮細(xì)胞，重現(xiàn)性好，但需要較多的細(xì)胞。影響轉(zhuǎn)染效率的主要因素是脈沖強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間。必須找到能夠使核酸有效釋放而又不殺死細(xì)胞的最佳平衡點(diǎn)。 （ 2） 顯微注射法 該法雖然費(fèi)力 ， 但卻是非常有效的將核酸導(dǎo)人細(xì)胞或細(xì)胞核的方法 。 這種方法常用來(lái)制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 ， 但不適用于需要大量轉(zhuǎn)染細(xì)胞的研究 。 （ 3） 基因槍法 該法依靠攜帶了核酸的高速粒子而將核酸導(dǎo)人細(xì)胞內(nèi) ，這種方法適用于培養(yǎng)的細(xì)胞和在體的細(xì)胞 。 病毒顆粒是一類十分有效的基因釋放系統(tǒng) ，因此 ， 它是將外源基因?qū)舜罅考?xì)胞最有效的方法 。 病毒感染具有高效率 、 可穩(wěn)定遺傳 、 適用于各種不同來(lái)源的細(xì)胞及操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn) 。 但多數(shù)病毒有其潛在的危險(xiǎn)性 ， 操作者需要有一定的病毒操作經(jīng)驗(yàn)和良好的設(shè)施 。 （ 1） 逆轉(zhuǎn)錄病毒 （ 2） 腺病毒 三、基因轉(zhuǎn)染技術(shù)的應(yīng)用 （一）轉(zhuǎn)基因植物 （二）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 （三）生物制藥 （四）基因治療 （五） RNAi技術(shù) （一）轉(zhuǎn)基因植物 （ 1） 1983年，世界第一例轉(zhuǎn)基因植物 —— 煙草問(wèn)世 （ 2） 1996~2022年，全世界轉(zhuǎn)基因植物在 21個(gè)國(guó)家種植，面積從 1996年的 170萬(wàn)公頃 增加到2022年的 9 000萬(wàn)公頃 （ 3）全世界轉(zhuǎn)基因作物僅種子銷售額到 2022年已達(dá) ，是 1995年的 63倍 （ 1）抗除草劑基因 （ 2）抗蟲(chóng)基因 （ 3）抗病基因 （ 4）抗逆境基因 （ 5）改良品質(zhì)基因 （二）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物疾病模型 LDL受體轉(zhuǎn)基因動(dòng)物可增強(qiáng) LDL的清除； b. apoE3基因轉(zhuǎn)基因鼠可增強(qiáng) LDL的清除，而突變的 apoE則誘發(fā)高脂血癥， apoE4與 apoE7轉(zhuǎn)基因鼠還出現(xiàn)學(xué)習(xí)與記憶能力降低、誘發(fā)腫瘤以及脾臟、腎臟腫大等。 與血壓調(diào)控有關(guān)的如 renin— angiotensinogen轉(zhuǎn)基因鼠模型出現(xiàn)高血壓，用于研究 RAS (renin— angiotensinogen system) 中各成分致高血壓的作用以及相互關(guān)系 乙型肝炎是目前流行廣泛、危害嚴(yán)重的病毒性傳染病。由于一般實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì) HBV不易感，目前發(fā)現(xiàn)能夠感染 HBV的動(dòng)物只有靈長(zhǎng)類，因此使得對(duì) HBV致病機(jī)理的研究很難用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法來(lái)進(jìn)行。 HBV轉(zhuǎn)基因小鼠的建立，為探討 HBV的致病機(jī)理
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