畢業(yè)論文樣式參考2(主要針對(duì)理工科類)(編輯修改稿)
2024-08-31 17:31 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 無菌條件下繁殖，得到無菌松材線蟲。1. 2 黑松愈傷組織的誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)將黑松種子流水沖洗2h，去殼，于75%乙醇溶液中表面消毒3次，每次40 s，用無菌水沖洗3次，%升汞溶液中浸泡4 min，再用無菌水沖洗5次，在無菌操作臺(tái)上剝?nèi)ヅ呷榈玫匠墒炫?，將其移入滅過菌的裝有MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基的錐形瓶中，封口，于28 C恒溫箱中暗培養(yǎng)。兩周后誘導(dǎo)出黑松愈傷組織，將生長良好(為乳白色)的愈傷組織移至繼代培養(yǎng)基上。在無菌操作臺(tái)上，把愈傷組織切成黃豆大小，移至裝有1/2MS繼代培養(yǎng)基的錐形瓶中，每個(gè)錐形瓶接入3～4塊，于28C恒溫箱中暗培養(yǎng)，每隔1個(gè)月左右繼代1次。1. 3 松材線蟲攜帶細(xì)菌菌株的獲得與鑒定選擇我國松材線蟲病發(fā)生代表性的疫區(qū)，在2001年春秋兩次采樣。采集了感染松材線蟲病的黑松、馬尾松病木，采用木塊組織分離法，分離松材線蟲所攜帶的細(xì)菌株。利用傳統(tǒng)的細(xì)菌鑒定方法和自動(dòng)化細(xì)菌鑒定系統(tǒng)相結(jié)合的手段，對(duì)這些細(xì)菌進(jìn)行了鑒定。選取熒光假單胞細(xì)菌M51A菌株，將該細(xì)菌菌株于NA培養(yǎng)基上斜面培養(yǎng)，冰箱低溫保存?zhèn)溆?。另于NB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)該菌株，條件為28C，搖床震動(dòng)培養(yǎng)6d，并將培養(yǎng)液于高速離心機(jī)15 000 r/min離心30 min，再用0. 22 um濾膜抽濾，得到該菌株的無細(xì)胞濾液。1. 4 接種無菌線蟲、細(xì)菌的再分離及鑒定接種試驗(yàn)于2006年7～8月份進(jìn)行。選擇3年生黑松直徑為2～3 mm的側(cè)枝接種，接種前先用75%乙醇擦拭表面，剪去上部枝條，裝上自制的冷閘裝置，然后套上塑料離心管(3 mL)。離心管預(yù)先截去底部并經(jīng)消毒，離心管與松枝間用封口臘膜包扎，在離心管中接入線蟲2 000條，將離心管上端的蓋子蓋緊以防水分蒸發(fā)。接種處理共有野生松材線蟲(編號(hào)為A)、無菌松材線蟲(編號(hào)為B)、熒光假單胞細(xì)菌菌株(編號(hào)為C)、無菌松材線蟲+熒光假單胞細(xì)菌GcM51A菌株(編號(hào)為D),熒光假單胞細(xì)菌GcM5lA菌株培養(yǎng)液的無細(xì)胞濾液3 mL(編號(hào)為E)。每個(gè)處理為5棵試樹，接種后立即在“冷閘”裝置中循環(huán)5℃的冷水，將接種后的松材線蟲和細(xì)菌阻隔在接種枝內(nèi)。接種后試樹保持在28℃和光照環(huán)境為L(光照):D(黑暗)為16:8的條件下，每天觀察和記錄試樹的病狀。試樹的病狀按照文獻(xiàn)[11]的病狀分級(jí)簡(jiǎn)化為5個(gè)階段:第1階段，接種枝上的針葉沒有癥狀，仍表現(xiàn)為亮綠色；第2階段，接種枝上的針葉失去了光澤；第3階段，接種枝上的針葉變?yōu)辄S綠色；第4階段，接種枝，接種枝鄰近的樹枝和頂枝上的針葉變?yōu)榛尹S色或棕色并開始萎蔫；第5階段，整棵樹的針葉均變?yōu)辄S棕色，并萎蔫。接種試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，中斷冷水循環(huán)之前將接種枝的“冷閘”裝置近樹主干的一端取一段樹枝，用于檢查樹枝內(nèi)是否含有松材線蟲和細(xì)菌。然后從接種枝上冷閘的另一端樹枝取樣檢查(先將接種的離心管端除去1 cm樹枝)，分離和鑒定線蟲和細(xì)菌，其方法見文獻(xiàn)。用木塊組織分離法分離松材線蟲所攜帶的菌株。利用傳統(tǒng)細(xì)菌鑒定方法和自動(dòng)化細(xì)菌鑒定系統(tǒng)相結(jié)合，對(duì)這些細(xì)菌進(jìn)行鑒定。2 結(jié)果與分析2. 1 不同接種處理后松樹的病狀各個(gè)不同處理(各處
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