【文章內(nèi)容簡介】 小于 4%，抽真空，在 26℃冷藏條件下可保存一年以上。若充入氮氣則可保存得更久。母斜① 培養(yǎng)基培養(yǎng)基由淀粉、麩皮、碳酸鈣、瓊脂、磷酸氫鉀按一定比例配制而成。② 滅菌將裝有空茄子瓶在 121℃條件下干熱滅菌一小時；裝入培養(yǎng)基后，加熱至121℃濕熱滅菌 30 分鐘。③ 接種采用涂布接種法或者劃線法接種法。④ 培養(yǎng)培養(yǎng)溫度：37℃時間：910 天 6 ⑤ 保存保存溫度：46℃保存時間：3 個月子斜① 培養(yǎng)基培養(yǎng)基由淀粉、麩皮、碳酸鈣、瓊脂、磷酸氫鉀按一定比例配制而成。② 滅菌將裝有空茄子瓶在 121℃條件下干熱滅菌一小時；裝入培養(yǎng)基后，加熱至121℃濕熱滅菌 30 分鐘。③ 接種將母斜菌種制成孢懸液（孢懸液用無菌水） ，采用涂布接種法或者劃線法接種法。④ 培養(yǎng)培養(yǎng)溫度：37℃時間：910 天⑤ 保存保存溫度：46℃保存時間：3 個月接瓶① 培養(yǎng)基由淀粉、玉米粉、黃豆餅粉、蛋白胨、魚粉、硝酸鉀、碳酸鈣、硫酸銨等配制而成。② 滅菌帶培養(yǎng)基在 121℃條件下進行濕熱滅菌，時間為 30 分鐘。③ 接種將母斜菌種制成孢懸液（孢懸液用無菌水） ，采用涂布接種法或者劃線法接種法。④ 培養(yǎng)培養(yǎng)溫度：35℃培養(yǎng)時間：7 天⑤ 測效價 7 搖瓶測效價，大于生產(chǎn)要求的子斜留下來，否則舍棄。效價：抗生素的計量單位?抗生素依性質(zhì)不同，分別以重量單位或效價單位來計量。1）理論效價 理論效價是指抗生素純品的重量與效價單位的折算比率。一些合成、半合成的抗生素多以其有效部分的一定重量（多為 1μg）作為一個單位。 少數(shù)抗生素則以其某一特定的鹽的 1μg 或一定重量作為一個單位。2）原料含量的標(biāo)示 理論效價是指抗生素純品的效價單位與重量（一般是mg）的折算比率。3）處方計量單位 藥劑制品標(biāo)示的和處方上開寫的抗生素重量單位數(shù)均指該抗生素的純品量。如硫酸鏈霉素 1g，系指含有鏈霉素純品 1g（1 百萬單位） ，因此又稱為重量效價單位。發(fā)酵 一級種子接種：壓差法接種培養(yǎng)時間：4 天 培養(yǎng)溫度：3637℃罐壓：培養(yǎng)基：由葡萄糖、淀粉、玉米粉、魚粉、碳酸鈣、蛋白胨、氯化鈷、硫酸銨、泡敵、黃豆餅粉配制而成。菌絲形狀：網(wǎng)狀，周邊散開（移種前）菌量：＞90%滅菌：121℃濕熱滅菌；滅菌時間：30 分鐘空氣消毒：121℃蒸汽濕熱滅菌；滅菌時間：1 小時一級種子是微生物生長的潛伏期。 移種移種管道：采用分配站進行移種移種前先用 121℃蒸汽對分配站進行濕熱滅菌。 二級種子 培養(yǎng)時間：約 1 天培養(yǎng)溫度 34℃177。1℃罐壓：培養(yǎng)基：由氯化鈣、淀粉、玉米粉、魚粉、碳酸鈣、蛋白胨、氯化鈷、硫酸銨、泡敵、黃豆餅粉配制而成。菌絲形狀：網(wǎng)狀 8 二級種子是微生物生長處在對數(shù)期，菌體大量繁殖。 發(fā)酵發(fā)酵時間：4 天培養(yǎng)溫度 34℃177。1℃罐壓：常壓培養(yǎng)基：由氯化鈣、淀粉、玉米粉、魚粉、碳酸鈣、蛋白胨、氯化鈷、硫酸銨、泡敵、黃豆餅粉配制而成。菌絲形狀：膠狀菌體處在穩(wěn)定期生長，此階段微生物產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物。 9 。以上 3 圖分別是一級、二級、三級發(fā)酵罐的設(shè)備圖備圖因為發(fā)酵細菌為需氧菌，過程中需要不斷補充空氣，無菌空氣的制備流程如下：采氣口→預(yù)過濾→壓縮（空壓機）→冷卻→除油、水（絲網(wǎng)除沫器）→加熱（列管換熱器 45℃）→總空氣過濾器（濾過膜）→分空氣過濾器（預(yù)過濾→精過濾，中間用蒸氣過濾器保護）→進罐（無菌干燥空氣）。 10 滅菌一、二級罐的消毒有三種：1） 、空罐滅菌空罐滅菌（空消）即發(fā)酵罐罐體的滅菌。空消時一般維持罐壓~，罐溫 125~130℃，保持 30~45min；要求總蒸汽壓力不低于~，使用汽壓不低于 ~。2） 、悶消采用甲醛熏蒸消毒3） 、煮罐采用將 NaOH 水溶液加熱 100℃方法進行蒸煮滅菌4） 、發(fā)酵罐的滅菌在培養(yǎng)基滅菌之前，通常應(yīng)先將與罐相連的分空氣過濾器用蒸汽滅菌并用空氣吹干。實罐滅菌時，先將輸料管路內(nèi)的污水放掉沖凈，然后將配制好的培養(yǎng)基泵送至發(fā)酵罐（種子罐或料罐）內(nèi)，同時開動攪拌器進行滅菌。滅菌前先將各排氣閥打開，將蒸汽引入夾套或蛇管進行預(yù)熱，待罐溫升至 80~90℃，將排氣閥逐漸關(guān)小。接著將蒸汽從進氣口、排料口、取樣口直接通入罐中（如有沖視罐也同時進汽） ，使罐溫上升到 118~120℃，罐壓維持在 ~（表壓） ，并保持 30min 左右。各路進氣要暢通，防止短路逆流，罐內(nèi)液體翻動要激烈；各路排汽也要暢通，但排汽量不宜過大，以節(jié)約用氣量。在保溫階段，凡進口在培養(yǎng)基液面以下的各管道及沖視鏡管都應(yīng)進汽；凡開口在液面之上者均應(yīng)排汽。無論與罐連通的管路如何配制，在實消時均應(yīng)遵循“不進則出 ”的原則。這樣才能保證滅菌徹底，不留死角。保溫結(jié)束后，依次關(guān)閉各排汽、進汽閥門，待罐內(nèi)壓力低于空氣壓力后，向罐內(nèi)通入無菌空氣，在夾套或蛇管中通冷卻水降溫，使培養(yǎng)基的溫度降到所需的溫度，進行下一步的發(fā)酵和培養(yǎng)。在引入無菌空氣前，應(yīng)注意罐壓必須低于過濾器壓力，否則物料將倒流入過濾器內(nèi)，后果嚴重！滅菌時，總蒸汽管道壓力要求不低于 ~，使用壓力不低于 。 ? 11 培養(yǎng)基中的化學(xué)檢測為保證菌種的正常生長繁殖及代謝產(chǎn)物的產(chǎn)出，發(fā)酵罐中的發(fā)酵液需定時取樣進行化學(xué)檢測，以及時能給發(fā)酵罐中補料。發(fā)酵液需進行測定的參數(shù)主要有 PH 值，糖的含量，氮的含量，粘度1. 測 pH 主要用 PH 計或 PH 試紙，應(yīng)保證 PH 在 ～ 之間。2. 測總糖糖的測定用的是碘量法，其原理是用具有還原性的醛基在堿性溶液中能將Cu2+還原成 Cu+，過量的在酸性溶液中與 KI 反應(yīng)析出 I2，用標(biāo)準的 NaS2O3 滴定， 即可測出糖的含量。所用的試劑主要是斐林試劑（3mol/NAOH 和 2mol/L H2SO4） 、6mol/L HCl 溶液、。3. 測氨氮氮的測定用的是甲醛法，其原理是在氨基酸溶液中加入甲醛水溶液，是氨基酸與甲醛結(jié)合，從而使氨基酸的堿性小時，即可用堿來滴定羧基，計算出氨基酸的含量。所用的試劑主要有甲醛水溶液、。管碟法：用培養(yǎng)皿和牛津杯標(biāo)準品：慶大霉素檢測菌：短小芽孢桿菌4. 測黏度發(fā)酵液在進入三級發(fā)酵罐發(fā)酵后要不定期的對其粘度進行測定，以確定其中的溶氧量，從而可控制空氣的通氣量，保證微生物的正常生長。測定儀器為粘度計，15002022Pas 為正常。5. 生物效價的測定 12 。121。()2 所謂生物效價，就是抗生素對微生物殺滅或抑菌作用強弱程度，其測量方法就是測量其抗生素（慶大霉素、小諾霉素）濃度的測量。測量方法：管蝶閥，觀察抑菌圈的大小。抑菌圈越大，效價越大。檢測溫度：37℃ 時間：16～18h標(biāo)準品：慶大霉素 檢測菌：短小芽孢桿菌標(biāo)準品：小諾霉素 檢測菌：枯草芽孢桿菌發(fā)酵過程中的菌種的轉(zhuǎn)移：一級罐→分配站→二級罐→分配站→發(fā)酵罐發(fā)酵中一級,二級和發(fā)酵罐的一些參數(shù)如下:種類參數(shù) 一級 二級 發(fā)酵罐個數(shù) 6 10 12重量(噸) 3 12 15功率(瓦) 4000 15000 115轉(zhuǎn)速 (轉(zhuǎn)/分) 960 730 590有無夾套 有夾套 4 個列管 6 個列管發(fā)酵染菌處理一級罐染菌處理：將發(fā)酵罐加熱至 100℃滅菌，放罐，排掉培養(yǎng)基料液，重新接種。二級罐染菌處理：染菌較少則將發(fā)酵罐加熱至 100℃滅菌后將料液作為培養(yǎng)基繼續(xù)使用，若染菌較多則加熱滅菌后放罐，排掉培養(yǎng)基。發(fā)酵罐染菌處理：前期染菌，降低溫度一段時間，待雜菌形成芽孢后再升 13 溫繼續(xù)發(fā)酵。若后期染菌不甚嚴重則無需處理，若嚴重則需消毒滅菌后放罐。發(fā)酵工段儀器設(shè)備匯總名稱 型號 規(guī)格 數(shù)量（個）旋轉(zhuǎn)式粘度計 ND