【文章內容簡介】 SephadexG系列主要用于脫鹽分離提純高分子物質。離子交換層析主要用于分離氨基酸多肽蛋白質也可是核酸等。親和層析可用于純化生物大分子，稀釋液的濃縮不穩(wěn)定蛋白的貯藏分離核酸。聚焦層析常用凝膠是Monop多元緩沖交換劑是PBE。K值過高線性寬但重復性差，過低精密度好但線性差。酶偶聯法已是是廣泛最頻繁的酶測定法，主要用30和37，它有明顯的延滯期，最好條件是酶反應為限速度，動力學上為零級反應而指示酶是一級反應。Q10值即溫度增加10度化學速度的變化率，—。 免疫學： 免疫防御（對外）免疫自穩(wěn)（防自身免疫?。┟庖弑O(jiān)視（防腫瘤）。標記免疫技術應用最多，自動化是免疫學檢驗發(fā)展趨勢?？乖谋砦恢辽儆卸N方式：順序或線性表位，三維結構的構象表位。天然抗原絕大多數是胸腺依賴性抗原（TD—AG）。超抗原被T細胞識別時雖然要與MCHII類分子結合，但不受II類分子的限制，可以直接活化T細胞而且效率高。抗體由漿細胞產生?？贵w分子上VH和VL是抗原結合部位，CL，CH1是遺傳標記所在，CH2有補體結合點，CH5能固定組織細胞，CH3和CH4還參加I型變態(tài)反應。免疫學中常用木瓜和胃蛋白酶。免疫球蛋白的血清型有：同種型（正常個體都有）同種異型（只存在同種的某些個體中）獨特型（某一個體獨有的。獨特性網絡在免疫應答的調控中起重要作用）。天然IgG分子無活性。IgM（五聚體，天然凝集素和冷凝集素，是B細胞膜上主要表面膜Ig）激活補體能力最強，IgG（單體，電泳最慢，再次免疫應答的主要抗體）至少要兩分子。,2巰基乙醇能破壞IgM但不破壞IgG,可以區(qū)分它們。母乳中的分泌型IGA提高了嬰兒出生后4—6個月內的局部免疫屏障，常稱為局部抗體。人類重鏈基因位于14號染色體上，K基因位于第二號染色體上。參與補體激活經典途徑的固有成份按先后為C1，C2。C9，C1由C1q,C1r,C1s,三種組成。滅活的補體在片在符號前加i，有酶活性的上加一橫。補體大多是糖蛋白多屬B球蛋白，C1q，C8是r蛋白。C1s，C9是a球蛋白。C3含量最多，C2含量最少。替代途經的激活物主要是細胞壁成分。補體清除免疫復合物的方式：吞噬調理，免疫粘附，免疫復合物抑制。編碼人C4，C2，B因子的基因在第六染色體短臂上與MHC的基因相鄰，命名為III類組織相容性基因。產生補體主要是肝臟主要是巨噬細胞。已發(fā)現的歸巢受體有：CD44，LFA1，VLA4，MEL14/LAM1等。CD2表達于全部T細胞和NK細胞。CD3表達在全部T細胞，CD4（輔助性T細胞）/CD8（細胞毒性T細胞）相互關聯但意義不同是T細胞亞群的表面標志。SIG的功能是作為B細胞表面的抗原受體可與相應抗原特異性結合并將抗原內攝處理。MHCII是輔佐細胞（AC）遞呈抗原的必須物質是輔佐細胞（有單核吞噬，樹突狀，B細胞）的標志。明確的白介素有15個，IL2主要由T細胞（CD+4）受抗原或絲裂原刺激后產生，15KD，113糖蛋白。II型干擾素又稱免疫干擾素或IFNR，主要由T細胞產生。腫瘤壞死因子：TNEa：由細菌脂多糖活化的單核細胞產生引起出血壞死也稱惡病質素，TNFb：由抗原或絲裂原刺激的淋巴細胞產生有腫瘤殺傷和免疫調節(jié)功能又稱淋巴毒素。紅細胞生成素（EPO）是糖蛋白，30—39KD，主要由腎小管內皮細胞合成也可由肝和巨噬細胞產生。人類MHC稱為HLA復合體，位于第六對染色體的短臂上。其多態(tài)性為復等位基因所致，當群體中位于同一位點的等位基因多于兩種時為復等位基因，HLA的遺傳特點：單倍型，共顯性，連鎖不平衡。I和II類MHC分子是引起同種異體移植排斥反應的主要抗原。當抗原遞呈細胞向免疫活性細胞遞呈抗原時，免疫活性細胞在識別特異性抗原時，必須識別遞呈細胞的MHC抗原稱為MHC限定性。HLA是體內最復雜的多態(tài)性基因系統。抗原—MHCII類分子復合物與T細胞受體的結合是使TH細胞活化的首要信號。細胞免疫的效應方式有：細胞毒，遲發(fā)超敏。體液免疫以血清中有循環(huán)抗體為特征。炎癥細胞有：中性，肥大，嗜酸，嗜堿，血小板，內皮。炎癥介質：血管和平滑肌收縮介質，趨化因子，酶類，蛋白多糖。免疫炎癥類型：IGE介導，免疫復合物，細胞，皮膚嗜堿細胞型?？乖贵w結合基于結構互補與親和性。由一級結構決定。結合力有：電荷吸引，范德華力，氫鍵，疏水性作用力。常用佐劑有：氫氧化鋁，明礬（弗氏）是目前動物免疫中最常用的，抗血清保存：4度，低溫，冰凍干燥。抗體特異性純化有：親和層析，吸附法。特異性鑒定有：效價，特異性，純度，親和力。脾淋巴細胞特征是抗體分泌功能和能在選擇培養(yǎng)基中生長，骨髓瘤細胞則可無限分裂既永生性。細胞融合的選擇培養(yǎng)基有三成份：次黃嘌呤（H）氨甲蝶呤（A）胸腺嘧啶核苷（T）稱為HAT培養(yǎng)基。液體沉淀試驗有：抗原稀釋法和抗體稀釋法及方陣滴定法。免疫固定電流常用于M蛋白的鑒定。補體結合試驗中5種成份分三個系統（反應，補體，指示）不溶血為陽性。常用的標記酶有辣根過氧化物酶（底物為鄰苯二胺，四甲基聯苯胺）堿性磷酸酶（底物為磷酸酯）?？贵w制備常用二醛法及過碘酸鹽法。RIA（放免）核素標記抗原，競爭抑制，23個數量級，標記物限量。IRMA（免疫放射）核素標記抗體，非競爭結合，3個數量級以上，標記物過量。常用的熒光素有：異硫氰酸（FITC）四乙基羅丹明（RB200）四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC）。常用標記蛋白的方法有：攪拌法和透析法。熒光抗體鑒定包括效價及熒光素與蛋白的結合率，大于1：16為理想，一般固定標本的熒光抗體以F/P=1。5為宜用于活細胞染色的以2。4為宜。時間分辨熒光免疫測定以鑭系元素銪合物為熒光標記物，偏振免疫測定的偏振波長是485（藍光）。發(fā)光免疫技術：生物發(fā)光有熒火蟲熒光素，化學發(fā)光底物有：氨基苯二酰肼類主要為魯米諾及異魯米諾衍生物，啞啶酯類，電化學發(fā)光底物為三聯吡釕另一類為三丙胺。膠體金顆粒由一個基礎金核及包圍在外的雙離子層構成，其性質有對電解質敏感性，呈色性，光吸收性（510—550）。雙抗體夾心法的質控點最好是相應抗原。外周單個核細胞的分離的分層液常用：Ficoll（由上到下為血漿，單個核細胞，粒，紅）和Percoll（由上至下：死細胞，單個核細胞，淋，紅，粒）。純淋巴細胞群的采集有：黏附貼壁法，吸附柱過濾法，磁鐵吸引法。亞型的分離法有：E花環(huán)沉降法，尼龍分離法，親和板結合法，熒光激活細胞分離儀法。淋巴細胞活力測定常用臺盼藍染色法，死為藍色。保存時二甲亞硯為保護劑。植物血凝素（PHA）刀豆素（CONA）刺激T細胞增殖。增殖試驗有：形態(tài)法（分別計數淋母，過渡性淋母，核有絲分裂相及成熟小淋，前三者為轉化細胞，計200個，算轉化率）核素法。SMfg是鑒定B細胞可靠的指標。B細胞功能檢測方法：溶血空斑形成試驗（直接法只能檢測IgM生成細胞，其它用間接法，即在脾細胞和SRBC混合時加入抗Ig抗體。B細胞增殖能力試驗。測定人NK細胞活性多用以K562細胞株為靶細胞，測鼠NK細胞活性則用YAG細胞株。嗜酸粒細胞活化產物的測定：產物有：陽離子蛋白（ECP），主要堿基蛋白（MBP），X，EPD，EDN等，其中ECP毒性最強因而認為是嗜酸的特異性標志。特異性鼻粘膜激發(fā)試驗用變應原非特異性采用乙酰甲膽堿或組胺。新月體性腎小球腎炎的免疫病理類型有：免疫復合物，抗腎小球基底膜（GBM）抗體，抗中性白細胞質抗體。含有新月體的腎小球數目和比例是該病的關鍵。膜性增生性腎小球腎炎（MPGN）是原發(fā)性腎小球病中唯一具有獨特的血清補體異常的疾病測C3NeF。自身免疫?。ˋID）的特征：高滴度自身抗體，病理特點為免疫炎癥損傷與抗原分布一致，能建動物模型。不溶性DNP（抗核蛋白抗體）通常完全被DNA和組蛋白吸收，是形成狼瘡細胞的因子。抗dsDNA抗體對SLE有較高的特異性?？筍m抗體是SLE的特異性標志之一。ANA陽性的熒光現象分：周邊型表示抗DNA抗體存在（SLE），均質型表示有抗核蛋白抗原（DNP）抗體，斑點型多為抗ENA抗體（結締組織?。?，核仁型多為抗核小體抗體（硬皮?。?。抗乙酰膽堿受體抗體的檢測對重癥肌無力（MG）具有診斷意義。Hep—2細胞（人喉癌上皮細胞株）,Hela細胞（宮頸癌細胞株）,Farr法測定dsDNA抗體的特異性高為公認標準法，當抗dsDNA抗體結合率大于20%時對SLE有意義?？诟砂Y和干燥性角膜炎是干燥綜合癥（SS）的主要臨床表現。多發(fā)性骨髓瘤（最常見免疫增殖?。┮訧GG居多，重鏈病類別常見R，A，U三型。原發(fā)性B細胞缺陷?。喝獻G缺失（BROTON病，女帶，男患病，最先考慮測IG濃度，CD分子，SMIG），部分缺失，IG正常但無抗原反應。原發(fā)性T細胞缺陷?。阂装l(fā)生GVHR。原發(fā)性聯合免疫缺陷病，以重癥聯合免疫缺陷（SCID）的預后最差，屬性聯或常染色體隱性遺傳，T細胞表面存在特異性CD抗原，通過特異性單克隆抗體檢測是診斷細胞免疫最有價值的試驗。補體缺陷發(fā)病率最低。性聯慢性肉芽腫（CGD）是性聯遺傳，女帶男患病，特點是吞噬細胞不能產生超氧化物酶殺菌，白細胞低于1500時應考慮，可作四唑氮藍（NTB）還原試驗，REBUCK皮膚窗檢測。只有感染了乙肝才肢感染丁肝。艾滋病T淋巴細胞亞群檢查可發(fā)現T細胞絕對數下降，CD4+淋巴細胞也下降，CD4/CD8小于1?？贵w主要是P24，GP120。CEA大于60微克/升時可見于結腸，胃，肺癌。手術6周后CEA水平正常。血清CEA結合甲狀腺降鈣素測定有助于甲狀腺髓樣癌的診斷和估計。AFP是原發(fā)性肝癌的最靈敏最特異的標志。胰胚胎抗原（POA），糖類抗原有：CA125（上皮性卵巢癌（基因有KRAS）和子宮內膜癌）CA153（乳腺癌，基因有P53，CERB2））CA199(胰腺，結直腸癌)CA50（胰腺結直腸癌）AFU（A—L巖藻糖苷酶）是原發(fā)性肝癌的新指標。神經元特異性烯醇化酶（NSE）是神經母細胞瘤和小細胞肺癌（基因有P53，RB）的標志物。HLAA，B，C，DR，DQ位點的抗原可用血清學方法進行檢測，所以稱為SD抗原，采用補體依賴的細胞毒（CDC）試驗，HLA—D，DP位點的抗原須用細胞分型進行鑒定，稱為LD抗原，采用混合淋巴細胞培養(yǎng)（MLC）。排斥反應有：宿主抗移植反應（HVGR）和移植物抗宿主反應（GVHR）。 微生物學： 生物學按界門綱目科屬種分類，種是最小單位。 結核菌可利用甘油為碳源，梭狀芽胞菌可以氨基酸為碳源，流行性感冒桿菌要Ⅴ，Ⅹ因子才能生長。致病性島：由基因編碼決定的一團與致病性相關的基因組。細菌診斷流程有：雙岐索引法，表解法，數字編碼鑒定法。超凈工作臺應選擇垂直氣流通風方式。O/129抑菌試驗對弧菌有用而對氣單胞菌無用。桿菌肽用于A（敏感）與非A群鏈球菌的鑒定。奧普托欣試驗：肺炎鏈球菌敏感。雜交分：斑點，菌落原位，Southern(DNA)印跡，Northern(RNA,DNA)印跡。L型細菌（形態(tài)多樣，染色不定，可過濾，滲透壓敏感，生化減弱等）培養(yǎng)應高滲（20%蔗糖），染色多為G染陰性，形態(tài)不一（巨球形是特征），固定要用10G/L鞣酸不能用火焰。一般菌落有：油煎蛋樣（L），顆粒型（G），絲狀菌落（F），鑒定要點：染色易變多形性，生長在增菌液中微渾，顆粒樣沉淀或沿試管壁生長，返祖現象。原生質體與原生質球都是細胞壁缺陷的細菌。肽聚糖的結構由聚糖骨架，四肽側鏈和五肽交聯橋（G無交聯橋）。磷壁酸為G+特有，分壁和膜兩種。外膜層由脂多糖，脂質雙層，脂蛋白組成。細胞質內有核蛋白體（蛋白合成地），核質（主要遺傳物質）質粒，胞質顆粒，是細菌蛋白質和酶類合成的重要場所。鞭毛是由細胞質伸出的蛋白性絲狀物。性菌毛僅有1—10根，毒力和耐藥質粒都能通過它轉移，有致病性。RNA主要存在于細胞質中占細菌干重的10%，DNA存在于染色體和質粒中。G+等電點2—3，G等電點4—5。細菌營養(yǎng)轉運的方式有：離子，透性酶，磷酸酶。營養(yǎng)攝取的機制：被動擴散，主動吸收，基團轉位。嗜冷菌最適溫為10—20，嗜溫菌為20—40，嗜熱菌為50—60。細菌代謝所需能量主要以生物氧化作用而來。G菌的菌體脂多糖能引起發(fā)熱故稱熱原質。土中的厭氧芽胞桿菌是創(chuàng)傷感染病原菌的主要來源。飲用水中每毫升總數不過100個，1000毫升水中大腸桿菌群不過3個。有芽胞破傷風菌需沸水煮三小時才殺死。水中加入2%碳酸鈉能將沸點提到105度又能防止金屬生銹。紫外線波長265—266時殺菌力最強。無芽胞菌一般的致死為1800—6500微瓦/CM，殺死芽胞要十倍。，另外以石棉板為濾板的金屬濾器稱SEITZ濾器（蔡氏濾器）按濾孔大小分K：最大，澄清用，EK—S最小，可阻止大病毒通過EK：居中，除去一般細菌。玻璃濾菌器分G1—G6，G5