【文章內(nèi)容簡介】 SephadexG系列主要用于脫鹽分離提純高分子物質(zhì)。離子交換層析主要用于分離氨基酸多肽蛋白質(zhì)也可是核酸等。親和層析可用于純化生物大分子，稀釋液的濃縮不穩(wěn)定蛋白的貯藏分離核酸。聚焦層析常用凝膠是Monop多元緩沖交換劑是PBE。K值過高線性寬但重復(fù)性差，過低精密度好但線性差。酶偶聯(lián)法已是是廣泛最頻繁的酶測定法，主要用30和37，它有明顯的延滯期，最好條件是酶反應(yīng)為限速度，動力學(xué)上為零級反應(yīng)而指示酶是一級反應(yīng)。Q10值即溫度增加10度化學(xué)速度的變化率，—。 免疫學(xué)： 免疫防御（對外）免疫自穩(wěn)（防自身免疫病）免疫監(jiān)視（防腫瘤）。標(biāo)記免疫技術(shù)應(yīng)用最多，自動化是免疫學(xué)檢驗發(fā)展趨勢?？乖谋砦恢辽儆卸N方式：順序或線性表位，三維結(jié)構(gòu)的構(gòu)象表位。天然抗原絕大多數(shù)是胸腺依賴性抗原（TD—AG）。超抗原被T細(xì)胞識別時雖然要與MCHII類分子結(jié)合，但不受II類分子的限制，可以直接活化T細(xì)胞而且效率高?？贵w由漿細(xì)胞產(chǎn)生?？贵w分子上VH和VL是抗原結(jié)合部位，CL，CH1是遺傳標(biāo)記所在，CH2有補體結(jié)合點，CH5能固定組織細(xì)胞，CH3和CH4還參加I型變態(tài)反應(yīng)。免疫學(xué)中常用木瓜和胃蛋白酶。免疫球蛋白的血清型有：同種型（正常個體都有）同種異型（只存在同種的某些個體中）獨特型（某一個體獨有的。獨特性網(wǎng)絡(luò)在免疫應(yīng)答的調(diào)控中起重要作用）。天然IgG分子無活性。IgM（五聚體，天然凝集素和冷凝集素，是B細(xì)胞膜上主要表面膜Ig）激活補體能力最強，IgG（單體，電泳最慢，再次免疫應(yīng)答的主要抗體）至少要兩分子。,2巰基乙醇能破壞IgM但不破壞IgG,可以區(qū)分它們。母乳中的分泌型IGA提高了嬰兒出生后4—6個月內(nèi)的局部免疫屏障，常稱為局部抗體。人類重鏈基因位于14號染色體上，K基因位于第二號染色體上。參與補體激活經(jīng)典途徑的固有成份按先后為C1，C2。C9，C1由C1q,C1r,C1s,三種組成。滅活的補體在片在符號前加i，有酶活性的上加一橫。補體大多是糖蛋白多屬B球蛋白，C1q，C8是r蛋白。C1s，C9是a球蛋白。C3含量最多，C2含量最少。替代途經(jīng)的激活物主要是細(xì)胞壁成分。補體清除免疫復(fù)合物的方式：吞噬調(diào)理，免疫粘附，免疫復(fù)合物抑制。編碼人C4，C2，B因子的基因在第六染色體短臂上與MHC的基因相鄰，命名為III類組織相容性基因。產(chǎn)生補體主要是肝臟主要是巨噬細(xì)胞。已發(fā)現(xiàn)的歸巢受體有：CD44，LFA1，VLA4，MEL14/LAM1等。CD2表達(dá)于全部T細(xì)胞和NK細(xì)胞。CD3表達(dá)在全部T細(xì)胞，CD4（輔助性T細(xì)胞）/CD8（細(xì)胞毒性T細(xì)胞）相互關(guān)聯(lián)但意義不同是T細(xì)胞亞群的表面標(biāo)志。SIG的功能是作為B細(xì)胞表面的抗原受體可與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合并將抗原內(nèi)攝處理。MHCII是輔佐細(xì)胞（AC）遞呈抗原的必須物質(zhì)是輔佐細(xì)胞（有單核吞噬，樹突狀，B細(xì)胞）的標(biāo)志。明確的白介素有15個，IL2主要由T細(xì)胞（CD+4）受抗原或絲裂原刺激后產(chǎn)生，15KD，113糖蛋白。II型干擾素又稱免疫干擾素或IFNR，主要由T細(xì)胞產(chǎn)生。腫瘤壞死因子：TNEa：由細(xì)菌脂多糖活化的單核細(xì)胞產(chǎn)生引起出血壞死也稱惡病質(zhì)素，TNFb：由抗原或絲裂原刺激的淋巴細(xì)胞產(chǎn)生有腫瘤殺傷和免疫調(diào)節(jié)功能又稱淋巴毒素。紅細(xì)胞生成素（EPO）是糖蛋白，30—39KD，主要由腎小管內(nèi)皮細(xì)胞合成也可由肝和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。人類MHC稱為HLA復(fù)合體，位于第六對染色體的短臂上。其多態(tài)性為復(fù)等位基因所致，當(dāng)群體中位于同一位點的等位基因多于兩種時為復(fù)等位基因，HLA的遺傳特點：單倍型，共顯性，連鎖不平衡。I和II類MHC分子是引起同種異體移植排斥反應(yīng)的主要抗原。當(dāng)抗原遞呈細(xì)胞向免疫活性細(xì)胞遞呈抗原時，免疫活性細(xì)胞在識別特異性抗原時，必須識別遞呈細(xì)胞的MHC抗原稱為MHC限定性。HLA是體內(nèi)最復(fù)雜的多態(tài)性基因系統(tǒng)?？乖狹HCII類分子復(fù)合物與T細(xì)胞受體的結(jié)合是使TH細(xì)胞活化的首要信號。細(xì)胞免疫的效應(yīng)方式有：細(xì)胞毒，遲發(fā)超敏。體液免疫以血清中有循環(huán)抗體為特征。炎癥細(xì)胞有：中性，肥大，嗜酸，嗜堿，血小板，內(nèi)皮。炎癥介質(zhì)：血管和平滑肌收縮介質(zhì)，趨化因子，酶類，蛋白多糖。免疫炎癥類型：IGE介導(dǎo)，免疫復(fù)合物，細(xì)胞，皮膚嗜堿細(xì)胞型?？乖贵w結(jié)合基于結(jié)構(gòu)互補與親和性。由一級結(jié)構(gòu)決定。結(jié)合力有：電荷吸引，范德華力，氫鍵，疏水性作用力。常用佐劑有：氫氧化鋁，明礬（弗氏）是目前動物免疫中最常用的，抗血清保存：4度，低溫，冰凍干燥?？贵w特異性純化有：親和層析，吸附法。特異性鑒定有：效價，特異性，純度，親和力。脾淋巴細(xì)胞特征是抗體分泌功能和能在選擇培養(yǎng)基中生長，骨髓瘤細(xì)胞則可無限分裂既永生性。細(xì)胞融合的選擇培養(yǎng)基有三成份：次黃嘌呤（H）氨甲蝶呤（A）胸腺嘧啶核苷（T）稱為HAT培養(yǎng)基。液體沉淀試驗有：抗原稀釋法和抗體稀釋法及方陣滴定法。免疫固定電流常用于M蛋白的鑒定。補體結(jié)合試驗中5種成份分三個系統(tǒng)（反應(yīng)，補體，指示）不溶血為陽性。常用的標(biāo)記酶有辣根過氧化物酶（底物為鄰苯二胺，四甲基聯(lián)苯胺）堿性磷酸酶（底物為磷酸酯）?？贵w制備常用二醛法及過碘酸鹽法。RIA（放免）核素標(biāo)記抗原，競爭抑制，23個數(shù)量級，標(biāo)記物限量。IRMA（免疫放射）核素標(biāo)記抗體，非競爭結(jié)合，3個數(shù)量級以上，標(biāo)記物過量。常用的熒光素有：異硫氰酸（FITC）四乙基羅丹明（RB200）四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC）。常用標(biāo)記蛋白的方法有：攪拌法和透析法。熒光抗體鑒定包括效價及熒光素與蛋白的結(jié)合率，大于1：16為理想，一般固定標(biāo)本的熒光抗體以F/P=1。5為宜用于活細(xì)胞染色的以2。4為宜。時間分辨熒光免疫測定以鑭系元素銪合物為熒光標(biāo)記物，偏振免疫測定的偏振波長是485（藍(lán)光）。發(fā)光免疫技術(shù)：生物發(fā)光有熒火蟲熒光素，化學(xué)發(fā)光底物有：氨基苯二酰肼類主要為魯米諾及異魯米諾衍生物，啞啶酯類，電化學(xué)發(fā)光底物為三聯(lián)吡釕另一類為三丙胺。膠體金顆粒由一個基礎(chǔ)金核及包圍在外的雙離子層構(gòu)成，其性質(zhì)有對電解質(zhì)敏感性，呈色性，光吸收性（510—550）。雙抗體夾心法的質(zhì)控點最好是相應(yīng)抗原。外周單個核細(xì)胞的分離的分層液常用：Ficoll（由上到下為血漿，單個核細(xì)胞，粒，紅）和Percoll（由上至下：死細(xì)胞，單個核細(xì)胞，淋，紅，粒）。純淋巴細(xì)胞群的采集有：黏附貼壁法，吸附柱過濾法，磁鐵吸引法。亞型的分離法有：E花環(huán)沉降法，尼龍分離法，親和板結(jié)合法，熒光激活細(xì)胞分離儀法。淋巴細(xì)胞活力測定常用臺盼藍(lán)染色法，死為藍(lán)色。保存時二甲亞硯為保護(hù)劑。植物血凝素（PHA）刀豆素（CONA）刺激T細(xì)胞增殖。增殖試驗有：形態(tài)法（分別計數(shù)淋母，過渡性淋母，核有絲分裂相及成熟小淋，前三者為轉(zhuǎn)化細(xì)胞，計200個，算轉(zhuǎn)化率）核素法。SMfg是鑒定B細(xì)胞可靠的指標(biāo)。B細(xì)胞功能檢測方法：溶血空斑形成試驗（直接法只能檢測IgM生成細(xì)胞，其它用間接法，即在脾細(xì)胞和SRBC混合時加入抗Ig抗體。B細(xì)胞增殖能力試驗。測定人NK細(xì)胞活性多用以K562細(xì)胞株為靶細(xì)胞，測鼠NK細(xì)胞活性則用YAG細(xì)胞株。嗜酸粒細(xì)胞活化產(chǎn)物的測定：產(chǎn)物有：陽離子蛋白（ECP），主要堿基蛋白（MBP），X，EPD，EDN等，其中ECP毒性最強因而認(rèn)為是嗜酸的特異性標(biāo)志。特異性鼻粘膜激發(fā)試驗用變應(yīng)原非特異性采用乙酰甲膽堿或組胺。新月體性腎小球腎炎的免疫病理類型有：免疫復(fù)合物，抗腎小球基底膜（GBM）抗體，抗中性白細(xì)胞質(zhì)抗體。含有新月體的腎小球數(shù)目和比例是該病的關(guān)鍵。膜性增生性腎小球腎炎（MPGN）是原發(fā)性腎小球病中唯一具有獨特的血清補體異常的疾病測C3NeF。自身免疫?。ˋID）的特征：高滴度自身抗體，病理特點為免疫炎癥損傷與抗原分布一致，能建動物模型。不溶性DNP（抗核蛋白抗體）通常完全被DNA和組蛋白吸收，是形成狼瘡細(xì)胞的因子。抗dsDNA抗體對SLE有較高的特異性。抗Sm抗體是SLE的特異性標(biāo)志之一。ANA陽性的熒光現(xiàn)象分：周邊型表示抗DNA抗體存在（SLE），均質(zhì)型表示有抗核蛋白抗原（DNP）抗體，斑點型多為抗ENA抗體（結(jié)締組織?。?，核仁型多為抗核小體抗體（硬皮病）?？挂阴Ｄ憠A受體抗體的檢測對重癥肌無力（MG）具有診斷意義。Hep—2細(xì)胞（人喉癌上皮細(xì)胞株）,Hela細(xì)胞（宮頸癌細(xì)胞株）,Farr法測定dsDNA抗體的特異性高為公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)法，當(dāng)抗dsDNA抗體結(jié)合率大于20%時對SLE有意義。口干癥和干燥性角膜炎是干燥綜合癥（SS）的主要臨床表現(xiàn)。多發(fā)性骨髓瘤（最常見免疫增殖病）以IGG居多，重鏈病類別常見R，A，U三型。原發(fā)性B細(xì)胞缺陷?。喝獻(xiàn)G缺失（BROTON病，女帶，男患病，最先考慮測IG濃度，CD分子，SMIG），部分缺失，IG正常但無抗原反應(yīng)。原發(fā)性T細(xì)胞缺陷?。阂装l(fā)生GVHR。原發(fā)性聯(lián)合免疫缺陷病，以重癥聯(lián)合免疫缺陷（SCID）的預(yù)后最差，屬性聯(lián)或常染色體隱性遺傳，T細(xì)胞表面存在特異性CD抗原，通過特異性單克隆抗體檢測是診斷細(xì)胞免疫最有價值的試驗。補體缺陷發(fā)病率最低。性聯(lián)慢性肉芽腫（CGD）是性聯(lián)遺傳，女帶男患病，特點是吞噬細(xì)胞不能產(chǎn)生超氧化物酶殺菌，白細(xì)胞低于1500時應(yīng)考慮，可作四唑氮藍(lán)（NTB）還原試驗，REBUCK皮膚窗檢測。只有感染了乙肝才肢感染丁肝。艾滋病T淋巴細(xì)胞亞群檢查可發(fā)現(xiàn)T細(xì)胞絕對數(shù)下降，CD4+淋巴細(xì)胞也下降，CD4/CD8小于1。抗體主要是P24，GP120。CEA大于60微克/升時可見于結(jié)腸，胃，肺癌。手術(shù)6周后CEA水平正常。血清CEA結(jié)合甲狀腺降鈣素測定有助于甲狀腺髓樣癌的診斷和估計。AFP是原發(fā)性肝癌的最靈敏最特異的標(biāo)志。胰胚胎抗原（POA），糖類抗原有：CA125（上皮性卵巢癌（基因有KRAS）和子宮內(nèi)膜癌）CA153（乳腺癌，基因有P53，CERB2））CA199(胰腺，結(jié)直腸癌)CA50（胰腺結(jié)直腸癌）AFU（A—L巖藻糖苷酶）是原發(fā)性肝癌的新指標(biāo)。神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）是神經(jīng)母細(xì)胞瘤和小細(xì)胞肺癌（基因有P53，RB）的標(biāo)志物。HLAA，B，C，DR，DQ位點的抗原可用血清學(xué)方法進(jìn)行檢測，所以稱為SD抗原，采用補體依賴的細(xì)胞毒（CDC）試驗，HLA—D，DP位點的抗原須用細(xì)胞分型進(jìn)行鑒定，稱為LD抗原，采用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（MLC）。排斥反應(yīng)有：宿主抗移植反應(yīng)（HVGR）和移植物抗宿主反應(yīng)（GVHR）。 微生物學(xué)： 生物學(xué)按界門綱目科屬種分類，種是最小單位。 結(jié)核菌可利用甘油為碳源，梭狀芽胞菌可以氨基酸為碳源，流行性感冒桿菌要Ⅴ，Ⅹ因子才能生長。致病性島：由基因編碼決定的一團(tuán)與致病性相關(guān)的基因組。細(xì)菌診斷流程有：雙岐索引法，表解法，數(shù)字編碼鑒定法。超凈工作臺應(yīng)選擇垂直氣流通風(fēng)方式。O/129抑菌試驗對弧菌有用而對氣單胞菌無用。桿菌肽用于A（敏感）與非A群鏈球菌的鑒定。奧普托欣試驗：肺炎鏈球菌敏感。雜交分：斑點，菌落原位，Southern(DNA)印跡，Northern(RNA,DNA)印跡。L型細(xì)菌（形態(tài)多樣，染色不定，可過濾，滲透壓敏感，生化減弱等）培養(yǎng)應(yīng)高滲（20%蔗糖），染色多為G染陰性，形態(tài)不一（巨球形是特征），固定要用10G/L鞣酸不能用火焰。一般菌落有：油煎蛋樣（L），顆粒型（G），絲狀菌落（F），鑒定要點：染色易變多形性，生長在增菌液中微渾，顆粒樣沉淀或沿試管壁生長，返祖現(xiàn)象。原生質(zhì)體與原生質(zhì)球都是細(xì)胞壁缺陷的細(xì)菌。肽聚糖的結(jié)構(gòu)由聚糖骨架，四肽側(cè)鏈和五肽交聯(lián)橋（G無交聯(lián)橋）。磷壁酸為G+特有，分壁和膜兩種。外膜層由脂多糖，脂質(zhì)雙層，脂蛋白組成。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有核蛋白體（蛋白合成地），核質(zhì)（主要遺傳物質(zhì)）質(zhì)粒，胞質(zhì)顆粒，是細(xì)菌蛋白質(zhì)和酶類合成的重要場所。鞭毛是由細(xì)胞質(zhì)伸出的蛋白性絲狀物。性菌毛僅有1—10根，毒力和耐藥質(zhì)粒都能通過它轉(zhuǎn)移，有致病性。RNA主要存在于細(xì)胞質(zhì)中占細(xì)菌干重的10%，DNA存在于染色體和質(zhì)粒中。G+等電點2—3，G等電點4—5。細(xì)菌營養(yǎng)轉(zhuǎn)運的方式有：離子，透性酶，磷酸酶。營養(yǎng)攝取的機(jī)制：被動擴(kuò)散，主動吸收，基團(tuán)轉(zhuǎn)位。嗜冷菌最適溫為10—20，嗜溫菌為20—40，嗜熱菌為50—60。細(xì)菌代謝所需能量主要以生物氧化作用而來。G菌的菌體脂多糖能引起發(fā)熱故稱熱原質(zhì)。土中的厭氧芽胞桿菌是創(chuàng)傷感染病原菌的主要來源。飲用水中每毫升總數(shù)不過100個，1000毫升水中大腸桿菌群不過3個。有芽胞破傷風(fēng)菌需沸水煮三小時才殺死。水中加入2%碳酸鈉能將沸點提到105度又能防止金屬生銹。紫外線波長265—266時殺菌力最強。無芽胞菌一般的致死為1800—6500微瓦/CM，殺死芽胞要十倍。，另外以石棉板為濾板的金屬濾器稱SEITZ濾器（蔡氏濾器）按濾孔大小分K：最大，澄清用，EK—S最小，可阻止大病毒通過EK：居中，除去一般細(xì)菌。玻璃濾菌器分G1—G6，G5