免疫分型-基礎介紹(編輯修改稿)
2025-08-19 12:16 本頁面
【文章內容簡介】 CD4CD79a與CD5共表達，CD23表達使得CLL區(qū)別于帽細胞淋巴癌MU，即（CLL：CD23＋，MCL：CD23－），CD10－、CD23－、CD11c和CD2CD20常弱表達，盡管CLL起病慢，但CLL病人的生存率變化很大，有染色體異常的病預后不良，最常見的三聯(lián)體trisony114q、13q、11q，免疫表型上沒有特異的變化而免疫表型的變化并不是提示染色體異常。最近，有研究表明，三聯(lián)體trisony12與SIg、CD20表達量高度相關，與CD23－相關 與FMC7相關。B型前淋巴細胞白血?。˙－DLL）較CLL更為嚴重，流式細胞技術在區(qū)分B－DLL和CLL上發(fā)揮很大作用，B－DLL多為CD5－，CD22＋，表達更強的sig。MU病人平均生存率不超過5年，與CLL在形態(tài)上很難區(qū)分，與CLL相似有CD5＋B祖細胞，但Sig表達強于CLL，且CD22－。另一與CLL難于區(qū)分的是FCC，細胞為強Sig、CD5－、CD10＋、CD23＋，具B系表型：對于診斷為CLL，CDFMCCD22與SIg，CD20異常強表表達的病例我們要考慮是否為DLL、MCC或CLL的亞型（trisomy12）因為它們危險性更大。 四、流式細胞儀免疫分型實驗1．樣本采集、運輸、保存和操作⑴樣本類型：適用于多種臨床標本，如外周血、骨髓穿刺液、骨髓活檢物、淋巴樣組織活檢物、漿液、腦脊液、皮膚、黏膜（內窺鏡活檢物）、細針穿刺物等等。⑵抗凝劑的選擇：外周血標本可采用EDTA、ACD或肝素抗凝。如果用同一份血標本做白細胞計數(shù)和流式分析，則應用EDTA抗凝。骨髓穿刺可用肝素。其他體液用EDTA、ACD或肝素均可，但保存的樣本活性可能會降低，EDTA的優(yōu)點是成熟髓性細胞貼壁造成的損失及血小板聚集較小，但細胞散射光特征丟失較肝素標本快；由于相對大量的ACD會通過改變pH而影響骨髓細胞活性問題，通常不推薦用ACD做骨髓穿刺抗凝劑。⑶樣本的保存：樣本的完整性和細胞活性與抗凝劑的選擇、運輸、保存和溫度息息相關。①理想狀態(tài)下，樣本應在采集后立刻進行處理和染色。②短期保存（1小時或更短）應在室溫(1822℃)。 ③長時間保存血或骨髓標本室溫即可，有些樣本可能4℃為佳。④標本保存的時間上限取決于標本類型及其保存條件。⑤肝素抗凝的血和骨髓通?？杀４嬷?872小時；⑥EDTA抗凝的血和骨髓可保存至12－24小時。⑦ACD抗凝的血和骨髓可保存至72小時，但⑧對于只做胞內染色的樣本，可固定細胞以長期保存。但?quot。固定－染色的方法取決于要分析的抗原特性和染色方式，采用之前一定要進行新鮮標本的對照和驗證實驗。2．樣本制備⑴單細胞懸液的制備①血和骨髓：天然單細胞懸液。當有血凝塊時，應用50um尼龍網(wǎng)過濾，同時進行細胞計數(shù)和血涂片以判斷靶細胞群體是否仍然存在。②組織塊：機械分離和酶分離兩種方法。分離不僅是要獲得最大產(chǎn)量的單細胞懸液，還要盡量保證細胞結構的完整性和抗原性。大多數(shù)淋巴樣組織可用輕柔的機械方法快速分離，并保持收獲細胞的相對完整。某些組織由于細胞間連接緊密，需在機械分離的基礎上用蛋白水解酶如胰蛋白酶、胃蛋白酶。骨髓標本亦可能因骨細胞成分污染而需要酶消化。但使用酶法一定要確認酶的使用沒有改變、減弱靶抗原的表達，細胞活性沒有顯著降低。⑵分離靶細胞群體樣本的任何處理方式都可能導致靶細胞群體的丟失。所以應盡可能使用最接近原始標本狀態(tài)的處理過程。去除紅細胞是流式分析要求的至少步驟。兩種方法：① 紅細胞裂解：較佳。操作簡單、快、并最可能保持原始標本的白細胞分布。溶血劑的選擇應基于其選擇性去除成熟紅細胞而最小程度的影響其他細胞的特點。最好在染色后溶血。若在染色前溶血，需確認：抗原性不被溶血過程改變； 溶血劑被徹底洗去，細胞和抗體結合的動力反應未受影響；所用溶血劑不含固定劑，否則會影響細胞活性及表面標記結果 。② 度梯度離心：白血病細胞回收較好并可能得到富集，同時去除死細胞。但費時，白血病細胞的相對頻率較難分析，某些重要細胞群體可能選擇性丟失。根據(jù)密度梯度原理，若白血病細胞沒有與淋巴細胞相似的浮力密度即可能丟失。所以用此方法時應檢查各層細胞特性以防止靶細胞的丟失。⑶估細胞懸液①樣本外觀：有嚴重溶血和血凝塊的標本可能會有白細胞的損壞以及細胞亞群的丟失或改變，應棄用。②細胞丟失和分布：確認細胞形態(tài)和原始
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