耐高溫、耐酸鹼乙醛脫氫酶的護肝解酒原理doc(編輯修改稿)
2025-08-14 18:20 本頁面
【文章內容簡介】 dhaS和aldA與人類的ALDH2有很高的相似性。項目內容 利用基因工程手段克隆人類及嗜酸嗜鹼耐高溫細菌的乙醇、乙醛脫氫酶基因，使其在大腸桿菌和酵母細胞中超量表達，經過純化之后，與輔劑、添加劑制成片、丸、散、膠囊、湯料等制劑，供消費者在飲酒的同時服用，加速消除體內乙醇、乙醛，達到保肝健體的作用。細菌乙醇、乙醛脫氫酶在大腸桿菌中的超量表達將嗜酸硫葉菌和嗜鹼枯草桿菌的乙醇、乙醛脫氫酶基因克隆到表達載體中，然后轉化大腸桿菌工程菌株。在沒有誘導目的基因表達的生長環(huán)境下(泳道13)，目的基因沒有表達。當加入誘導劑之后(泳道46)，目的基因超量表達，目的蛋白質(箭頭所指)可達細菌蛋白質總量的50%以上。泳道1，4：硫葉菌乙醛脫氫酶基因克隆泳道2，5：枯草桿菌乙醛脫氫酶基因克隆泳道3，6：硫葉菌乙醇脫氫酶基因克隆泳道M：蛋白質分子量標記 1 2 3 4 5 6 M 技術路線乙醇、乙醛脫氫酶基因的克隆與輔酶、緩沖劑、添加劑混合干燥在大腸桿菌中表達純化重組乙醛脫氫酶包裝，儲存，運輸，銷售干燥在啤酒酵母中表達發(fā)酵破碎細胞酶活性檢驗安全性考慮：從理論上分析，蛋白質在腸胃消化系統中很快就會被蛋白酶分解成氨基酸，所以，除了少數毒素蛋白質外，絕大多數蛋白質作為食品服用是安全的。而微生物蛋白供人使用的例子更是多得舉不勝舉。比如，金黃葡萄球菌產生的葡激酶可以用來治療心肌梗塞，病毒蛋白質制成的疫苗可以直接注射到人的體內。，也沒有發(fā)現有不良后果。目前已有大量的實驗數據證明Bt蛋白只對少數目標昆蟲有毒，對人畜絕對安全。我們選用的蛋白質分別來自人類和兩個細菌。人類蛋白質對人類的安全性自不待言，而這兩個細菌都不是動物或人類的病原菌，并且他們都需要在高溫和極端酸鹼度的環(huán)境下才能夠生長，所以他們本身并不能夠對人體造成危害。況且，我們只是從細菌基因組編碼的上千個蛋白質中選出一個，因此更沒有病原菌的問題。我們克隆的這幾個細菌蛋白質，與人的同類蛋白的相似性都接近或超過了50%，并且與毒素蛋白質沒有任何相關性。我們選擇的反應器是國際通用的生物反應器，其中啤酒酵母對人類不僅沒有任何毒害，而且是營養(yǎng)豐富的食品和食品添加劑。啤酒酵母是非常好的營養(yǎng)物質，含有大量優(yōu)質蛋白質，人體消化吸收率可達90%以上；；；無機鹽磷、鈣、鉀、鐵、鋅、鉻、鎂等適量。發(fā)達國家早已全部回收作為營養(yǎng)品食用。例如，日本就利用干燥的啤酒酵母制造減肥食品。我們使用的大腸桿菌生物反應器是生物工程菌，都不含有大腸桿菌毒素基因。它的表達效率可高達50%，目標蛋白質經一次純化即可達到95%以上的純度。并且，在純化目的蛋白的過程中，我們都使用6080oC高溫處理，大腸桿菌蛋白質在該條件下，100%被鈍化。經濟效益分析酒精中毒嚴重威脅人民的身心健康。中國有3億人飲酒，其中一半攜帶有缺陷型乙醛脫氫酶基因。即使以十分之一酒民每人每年購買5元的產品計，再加上作為保健預防用購買的消費者，市場前景極為可觀。而在達到批量生產后，生產成本約為銷售價格的510%。參考文獻沈漁邨。近年來國內有關酒依賴和慢性酒中毒的流行病學調查資料。《中國心理衛(wèi)生雜志》，1987；(6)：251沈漁邨。21世紀中國面臨的精神衛(wèi)生挑戰(zhàn)?！吨腥A精神科雜志》1996年第1期。蘇素花。7例急性乙醛中毒及其搶救治療報告《中國工業(yè)醫(yī)學雜志》2001年10月第14卷第5期。284頁。Brien JF, Loomis CW. 1983. Pharmacology of acetaldehyde. Can J Physiol Pharmacol. 61, 122.Charlebois RL, She Q, Sprott DP, Sensen CW, Garrett RA. 1998. Sulfolobus genome: from genomics to biology. Curr Opin Microbiol. 1, 5848.Chrysanthy Ikonomidou, Petra Bittigau, Masahiko J. Ishimaru, David F. Wozniak, Christian Koch, 1 Kerstin Genz. 2000. EthanolInduced Apoptotic Neurodegeneration and Fetal Alcohol Syndrome. Science 287, 10561060.Cunningham CC, Bailey SM. 2001. Ethanol consumption and liver mitochondria function. Biol Signals Recept. 10, 27182.Eriksson CJ. 2001. The role of acetaldehyde in the actions of alcohol (update 2000).Alcohol Clin Exp Res 25(5 Suppl ISBRA):15S32S.Farres J, Wang X, Takahashi K, Cunningham SJ, Wang TT, Weiner H. 1994.Effects of changing glutamate 487 to lysine in rat and human liver mitochondrial aldehyde dehydrogenase. A model to study
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