省人感染ah1n1流感病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指引doc(編輯修改稿)
2025-08-14 12:36 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 的網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室，可使用本指引推薦的國(guó)家下發(fā)的常規(guī)檢測(cè)方法，按同樣的步驟進(jìn)行排查檢測(cè)。鍬籟饗逕瑣筆襖鷗婭薔嗚訝。 廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局、中山大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物教研室實(shí)驗(yàn)室、以及有條件開(kāi)展流感病毒分子檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室可以使用本指引推薦的方法進(jìn)行檢測(cè)，也可以使用其它有效方法進(jìn)行檢測(cè)，但陽(yáng)性標(biāo)本必須送省疾病預(yù)防控制中心復(fù)核確認(rèn)。構(gòu)氽頑黌碩飩薺齦話騖門(mén)戲。附件流感病毒 核酸檢測(cè)方法一、樣本流感疑似病例、可能病例、臨床診斷病例以及其它需要進(jìn)行病毒實(shí)驗(yàn)室排查者鼻咽拭子或漱口液等。輒嶧陽(yáng)檉籪癤網(wǎng)儂號(hào)澩蠐鑭。二、試劑材料.病毒提取：公司的 （：）堯側(cè)閆繭絳闕絢勵(lì)蜆贅瀝紕。反應(yīng)： (, )識(shí)饒鎂錕縊灩筧嚌儼淒儂減。.引物探針：見(jiàn)下表引物和探針名稱(chēng)序列（′ ′）工作濃度 181。 181。 181。 181。 181。 “” 181。 181。 181。 “” 181。 181。 181。 181。注意：“”表示 探針′為標(biāo)記，在′末端標(biāo)記；“” 表示 探針′為標(biāo)記，在“”處標(biāo)記。三、 檢測(cè)．提?。孩湃芙庖海x心管分裝，每管μ，℃保存）。⑵ 在生物安全柜內(nèi)將采樣液（鼻拭子、咽拭子、胸水等）或病毒培養(yǎng)物（雞胚尿囊液或細(xì)胞培養(yǎng)液）取μ加入液管中，充分混勻，室溫靜置。凍鈹鋨勞臘鍇癇婦脛糴鈹賄。⑶ 每管分別加入μ的無(wú)水乙醇，充分混勻。⑷ 從中取出帶硅膠柱的收集管，打開(kāi)包裝將其做好標(biāo)記。取步驟（）中的混合液μ加入硅膠柱中，離心，棄收集管中的離心液。恥諤銪滅縈歡煬鞏鶩錦聰櫻。⑸ 硅膠柱仍放回收集管上，將步驟（）剩余的混合液全部吸入硅膠柱中，離心，棄離心液。鯊腎鑰詘褳鉀溈懼統(tǒng)庫(kù)搖飭。⑹ 于硅膠柱中加入μ 液，離心，棄離心液。⑺ 于硅膠柱中加入μ 液，離心，棄離心液。⑻ 更換新的收集管，再，離心。⑼ 將硅膠柱轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的 管上，向硅膠柱中加入μ的 ，室溫靜置。碩癘鄴頏謅攆檸攜驤蘞鷥膠。⑽ ，離心，收集離心液即為提取的病毒，立即做實(shí)驗(yàn)或℃以下保存。 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) ⑴ 每個(gè)樣品的提取物通過(guò)分別的引物和探針進(jìn)行檢測(cè)：, , () 和 ()。閿擻輳嬪諫遷擇楨秘騖輛塤。⑵引物和探針是以人的基因?yàn)榘谢虻?，因此?duì)于人的核酸可以作為內(nèi)部陽(yáng)性對(duì)照。⑶ 對(duì)于每一個(gè)過(guò)程中包括的所有引物和探針，均設(shè)立無(wú)模板對(duì)照（）和陽(yáng)性模板對(duì)照（）。⑷ 人類(lèi)樣本對(duì)照（）提供了次級(jí)陰性對(duì)照，以便確認(rèn)核酸提取過(guò)程和試劑的完整性。反應(yīng)體系配制（在體系配制區(qū)配反應(yīng)液）⑴ 請(qǐng)加入如下試劑（確定反應(yīng)數(shù)擬進(jìn)行的管數(shù)，包括陰性，陽(yáng)性對(duì)照） 組 分體 積（μ） . ()上游引物()下游引物()⑵ 將上述反應(yīng)液混勻，分裝到 小管中，每管μ，分別做好標(biāo)記。 ⑶ 加模板（在核酸提取區(qū)）將上述分裝好的小管分
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