香菇多糖的小腸吸收學(xué)士學(xué)位論文(編輯修改稿)
2024-07-22 03:18 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 %H202,保持pH 8～9，4h后終止反應(yīng)，冷卻至室溫，加入3倍體積的無(wú)水乙醇，4000rpmmin1，離心24min，沉淀進(jìn)行冷凍干燥。(二) 蒽酮硫酸法精確稱量在105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖50mg，置50mL容量瓶中定容搖勻，然后取5mL葡萄糖溶液置于50ml容量瓶中定容搖勻，mL1的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。%蒽酮試劑的配制，置50mL容量瓶中用80%硫酸定容，搖勻。小腸緩沖液組成：NaCl(L1)，KCl(L1)，CaCl2(L1)，NaHCO3(L1)，NaH PO3( gL1)，MgCl2(L1)。（注NaHCO3與CaCl2和MgCl2要分別事先配成溶液，以防生成沉淀?！”痉椒ǜ鶕?jù)香菇多糖與蒽酮在酸性條件下發(fā)生顯色反應(yīng)的原理進(jìn)行含量測(cè)定。考察蒽酮試劑濃度和沸水浴時(shí)間，反應(yīng)以沸水浴15min，放置10min為宜，為了防止加入蒽酮試劑時(shí)硫酸放熱提前發(fā)生顯色反應(yīng)，需在冰水浴中加入蒽酮試劑，最大吸收波長(zhǎng)為625nm。，，，分別置于干燥試管中，，搖勻。沸水浴15min，靜置10min，于625nm處測(cè)定吸收值。﹑﹑，﹑﹑，搖勻，沸水浴15min后冷卻至室溫，以空白管調(diào)零，連續(xù)測(cè)定五次吸光度，計(jì)算RSD。，按上述方法顯色后每間隔15min測(cè)定一次吸光度，在2小時(shí)內(nèi)測(cè)定吸光度值，計(jì)算RSD。精密稱取葡萄糖對(duì)照品適量，﹑﹑ mgmL1高中低三個(gè)不同濃度，沸水浴15min后靜置至室溫，每個(gè)樣品分別測(cè)定3次吸光度，計(jì)算回收率。(三) 小腸吸收實(shí)驗(yàn) 參照文獻(xiàn)方法[10]，選取健康大鼠，禁食24h（自由給水），用烏拉坦麻醉，立即打開(kāi)腹腔，分離出小腸，放入小腸緩沖液中，用緩沖液沖洗小腸表面，并仔細(xì)清除漿膜層外面的脂肪組織。剪取大約6～7cm的一段小腸，用圓頭細(xì)玻璃棒將腸段翻轉(zhuǎn)使粘膜層在外，漿膜層在內(nèi)，洗凈內(nèi)容物，用手術(shù)線結(jié)扎腸段一端，另一端用手術(shù)線結(jié)扎在玻璃管上。，放入含有不同濃度香菇多糖小腸緩沖液的小試管中，通入空氣，置于水浴鍋中37℃保溫。在吸收開(kāi)始后15 min, h,1 h, h,2 h,用取樣器取出小囊中的所有內(nèi)液,繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。樣品取出后放入離心管中4000轉(zhuǎn)min1離心5min，取上清液用蒽酮硫酸法進(jìn)行顯色反應(yīng)，測(cè)定樣品在625nm處的吸光度。根據(jù)吸光度計(jì)算香菇多糖含量，計(jì)算每個(gè)時(shí)間段香菇多糖的累積吸收量和吸收率。 分別取十二指腸﹑空腸和回腸，其中十二指腸（duodenum）：自幽門(mén)1 cm處開(kāi)始；空腸（jejunum）：離幽門(mén)15 cm處開(kāi)始；回腸（ileum）：離盲腸20 cm處開(kāi)始，mL1，mL1，mL1， mgmL1的香菇多糖小腸緩沖溶液中，在吸收開(kāi)始后15 min, h,1 h, h,2 h,用取樣器取出小囊中的所有內(nèi)液，繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。樣品取出后放入離心管中4000轉(zhuǎn)min1離心5min，取上清液用蒽酮硫酸法進(jìn)行顯色反應(yīng)，測(cè)定樣品在625nm處的吸光度，根據(jù)吸光度計(jì)算香菇多糖含量，計(jì)算每個(gè)時(shí)間段香菇多糖的累積吸收量和吸收率。，， mgmL1的香菇多糖溶液進(jìn)行吸收實(shí)驗(yàn)，分別在15 min, h,1h, h,2 h取樣，計(jì)算各個(gè)時(shí)間段的累積藥物吸收量和吸收率，考察吸收時(shí)間和給藥濃度對(duì)香菇多糖吸收的影響。結(jié)果與分析一、香菇多糖的純化(一) Sevage法去蛋白 圖1香菇多糖溶液 圖2 香菇多糖去蛋白效果 （二）雙氧水脫色 圖3 脫色后香菇多糖溶液 二、 蒽酮硫酸法（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備用吸收度(A )與濃度(C)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程如下: 圖4 蒽酮硫酸法標(biāo)準(zhǔn)曲線A=（r=），線性范圍：～mL1。（二）精密度測(cè)定結(jié)果表1蒽酮硫酸法的精密度測(cè)定結(jié)果(n=5) 次數(shù) 測(cè)得濃度（mgmL1）低 中 高 1 2 3 4 5 RSD(%) 可見(jiàn)高中低三個(gè)濃度的精密度良好。（三）穩(wěn)定性考察結(jié)果 在2小時(shí)內(nèi)吸光度值分別為：， ，，，RSD=%。兩個(gè)小時(shí)內(nèi)方法穩(wěn)定性很好。（四）回收率測(cè)定結(jié)果表2 回收率測(cè)定結(jié)果NO 對(duì)照品加入理論濃度 實(shí)測(cè)濃度 回收率（%） 平均回收率（%） （mgmL1） (mgmL1)1 2 3 4 5 6 7 8 9 %，RSD=%。三、小腸吸收實(shí)驗(yàn)（一）外翻腸囊的制作圖5 腸段翻轉(zhuǎn)后模型圖6 小腸吸收裝置示意圖（二）吸收部位對(duì)香菇多糖吸收的影響表3 香菇多糖在小腸不同部位的累積吸收量（n=3）給藥 吸收 各時(shí)間段的累積吸收量（mg）濃度 部位（mgmL1） 15 30 60 90
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