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正文內(nèi)容

香菇多糖的小腸吸收學士學位論文(編輯修改稿)

2024-07-22 03:18 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 %H202,保持pH 8~9,4h后終止反應,冷卻至室溫,加入3倍體積的無水乙醇,4000rpmmin1,離心24min,沉淀進行冷凍干燥。(二) 蒽酮硫酸法精確稱量在105℃干燥至恒重的無水葡萄糖50mg,置50mL容量瓶中定容搖勻,然后取5mL葡萄糖溶液置于50ml容量瓶中定容搖勻,mL1的葡萄糖標準液。%蒽酮試劑的配制,置50mL容量瓶中用80%硫酸定容,搖勻。小腸緩沖液組成:NaCl(L1),KCl(L1),CaCl2(L1),NaHCO3(L1),NaH PO3( gL1),MgCl2(L1)。(注NaHCO3與CaCl2和MgCl2要分別事先配成溶液,以防生成沉淀?!”痉椒ǜ鶕?jù)香菇多糖與蒽酮在酸性條件下發(fā)生顯色反應的原理進行含量測定??疾燧焱噭舛群头兴r間,反應以沸水浴15min,放置10min為宜,為了防止加入蒽酮試劑時硫酸放熱提前發(fā)生顯色反應,需在冰水浴中加入蒽酮試劑,最大吸收波長為625nm。,,,分別置于干燥試管中,,搖勻。沸水浴15min,靜置10min,于625nm處測定吸收值。﹑﹑,﹑﹑,搖勻,沸水浴15min后冷卻至室溫,以空白管調(diào)零,連續(xù)測定五次吸光度,計算RSD。,按上述方法顯色后每間隔15min測定一次吸光度,在2小時內(nèi)測定吸光度值,計算RSD。精密稱取葡萄糖對照品適量,﹑﹑ mgmL1高中低三個不同濃度,沸水浴15min后靜置至室溫,每個樣品分別測定3次吸光度,計算回收率。(三) 小腸吸收實驗 參照文獻方法[10],選取健康大鼠,禁食24h(自由給水),用烏拉坦麻醉,立即打開腹腔,分離出小腸,放入小腸緩沖液中,用緩沖液沖洗小腸表面,并仔細清除漿膜層外面的脂肪組織。剪取大約6~7cm的一段小腸,用圓頭細玻璃棒將腸段翻轉(zhuǎn)使粘膜層在外,漿膜層在內(nèi),洗凈內(nèi)容物,用手術線結扎腸段一端,另一端用手術線結扎在玻璃管上。,放入含有不同濃度香菇多糖小腸緩沖液的小試管中,通入空氣,置于水浴鍋中37℃保溫。在吸收開始后15 min, h,1 h, h,2 h,用取樣器取出小囊中的所有內(nèi)液,繼續(xù)實驗。樣品取出后放入離心管中4000轉(zhuǎn)min1離心5min,取上清液用蒽酮硫酸法進行顯色反應,測定樣品在625nm處的吸光度。根據(jù)吸光度計算香菇多糖含量,計算每個時間段香菇多糖的累積吸收量和吸收率。 分別取十二指腸﹑空腸和回腸,其中十二指腸(duodenum):自幽門1 cm處開始;空腸(jejunum):離幽門15 cm處開始;回腸(ileum):離盲腸20 cm處開始,mL1,mL1,mL1, mgmL1的香菇多糖小腸緩沖溶液中,在吸收開始后15 min, h,1 h, h,2 h,用取樣器取出小囊中的所有內(nèi)液,繼續(xù)實驗。樣品取出后放入離心管中4000轉(zhuǎn)min1離心5min,取上清液用蒽酮硫酸法進行顯色反應,測定樣品在625nm處的吸光度,根據(jù)吸光度計算香菇多糖含量,計算每個時間段香菇多糖的累積吸收量和吸收率。,, mgmL1的香菇多糖溶液進行吸收實驗,分別在15 min, h,1h, h,2 h取樣,計算各個時間段的累積藥物吸收量和吸收率,考察吸收時間和給藥濃度對香菇多糖吸收的影響。結果與分析一、香菇多糖的純化(一) Sevage法去蛋白 圖1香菇多糖溶液 圖2 香菇多糖去蛋白效果 (二)雙氧水脫色 圖3 脫色后香菇多糖溶液 二、 蒽酮硫酸法(一)標準曲線的制備用吸收度(A )與濃度(C)進行線性回歸,得回歸方程如下: 圖4 蒽酮硫酸法標準曲線A=(r=),線性范圍:~mL1。(二)精密度測定結果表1蒽酮硫酸法的精密度測定結果(n=5) 次數(shù) 測得濃度(mgmL1)低 中 高 1 2 3 4 5 RSD(%) 可見高中低三個濃度的精密度良好。(三)穩(wěn)定性考察結果 在2小時內(nèi)吸光度值分別為:, ,,,RSD=%。兩個小時內(nèi)方法穩(wěn)定性很好。(四)回收率測定結果表2 回收率測定結果NO 對照品加入理論濃度 實測濃度 回收率(%) 平均回收率(%) (mgmL1) (mgmL1)1 2 3 4 5 6 7 8 9 %,RSD=%。三、小腸吸收實驗(一)外翻腸囊的制作圖5 腸段翻轉(zhuǎn)后模型圖6 小腸吸收裝置示意圖(二)吸收部位對香菇多糖吸收的影響表3 香菇多糖在小腸不同部位的累積吸收量(n=3)給藥 吸收 各時間段的累積吸收量(mg)濃度 部位(mgmL1) 15 30 60 90
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