【文章內(nèi)容簡介】 端片段與整合素結(jié)合能力比完整OPN強。我們以此為依據(jù)，通過ELASA法觀察二者在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 材料與方法材料與方法1 材料①NSCLC組: 收集2008年11月2009年9月寧醫(yī)附屬醫(yī)院胸外科及呼吸科經(jīng)病理確診的非小細(xì)胞肺癌患者共46例，鱗癌21例，腺癌25例，年齡2076歲，男28例，女18例。②正常對照組: 來自寧醫(yī)附屬醫(yī)院體檢中心的健康查體者，共收集20例，其中男性5例，女性15例，平均年齡48士6(22一67)歲，且與NSCLC組在年齡及性別上差異無統(tǒng)計學(xué)意義。③良性肺部病變組22例良性肺部病變患者（4例結(jié)核球、4例支擴、4例錯構(gòu)瘤、3例肺囊腫、3例炎性假瘤、2例硬化性血管瘤、1例良性乳頭瘤、1例平滑肌瘤），與NSCLC組在年齡及性別上差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 肺癌分期標(biāo)準(zhǔn)：1997年國際抗癌聯(lián)盟TNM分期(1)臨床病理診斷明確的非小細(xì)胞癌患者(2)良性病變組為外科手術(shù)病理學(xué)檢查證實的患者(3)年齡在2080歲之間(1)有嚴(yán)重的心、肝、腎功能障礙或其他重要臟器功能衰竭者(2)血液系統(tǒng)疾病及血栓栓塞性疾病患者(3)腎結(jié)石患者(4)風(fēng)濕性疾病及免疫性疾病(5)孕婦(6)已接受手術(shù)及放化療和輸血的患者(7)不符合納入標(biāo)準(zhǔn)，資料不全的患者SYNYO低溫冰箱：日本SYNYO公司；L052A型離心機：北京產(chǎn)；WS226173電熱恒溫隔水式培養(yǎng)箱：上海產(chǎn)；EL800酶標(biāo)儀：PE公司；打印機：惠普公司；高精度加樣器及吸頭（1000，100，50）：若干；37℃恒溫箱。 可調(diào)多道移液器(50一200pL)。供可調(diào)多道移液器使用的試劑存放槽OPN ELASA試劑盒購于日本IBL公司，TAT ELASA試劑盒購于美國Assayproy公司。2實驗方法技術(shù)路線非小細(xì)胞肺癌組(46例)肺部良性病變組（22例）健康對照組(20例)抽取空腹靜脈血ELASA法檢測OPN,TAT探討與非小細(xì)胞肺癌侵襲、轉(zhuǎn)移及分期等病理特征的關(guān)系探討在非小細(xì)胞肺癌的診斷、治療及預(yù)后等的臨床意義所有標(biāo)本均于清晨空取空腹靜脈血,%枸椽酸鈉按9∶1比例混勻,1000 r/min離心15分鐘, 吸出上層血漿，置于密封管中，取血漿80度冰箱保存待測。所有標(biāo)本避免反復(fù)凍融。 OPN、TAT檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗雙抗體夾心ELASA進行檢測，嚴(yán)格按照試劑盒說明進行操作。 ：(1)取出血漿本及試劑盒，平衡至室溫。(2)將濃縮洗滌液與醫(yī)用蒸餾水按要求倍數(shù)稀釋為應(yīng)用洗滌液。(3)濃縮樣品稀釋液用樣品稀釋液按照要求倍數(shù)稀釋稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液。 OPN檢測：(1)取出酶標(biāo)板，設(shè)空白孔，依照次序?qū)?yīng)分別加入100ulOPN的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中(空白孔視為0號標(biāo)準(zhǔn)品，用稀釋液替代)，并標(biāo)記樣品編號，加入100 ul的稀釋樣品（1：6稀釋）于空白微孔中。(2)置于37℃溫育60分鐘。(3)將酶標(biāo)板板取出，甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌，并甩去水滴，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干，重復(fù)上述步驟7次。(4)在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入100 ul的示蹤抗體，4℃孵育30分鐘。(5)將酶標(biāo)板取出，甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌，并甩去水滴，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干，重復(fù)上述步驟9次。(6)每孔中加入100ul顯色劑，輕輕振蕩混勻。(7)置于室溫避光溫育反應(yīng)30分鐘。(8)每個微孔中加入100ul的終止液，輕輕振蕩混勻。(9)在酶標(biāo)儀上，450nm處測定OD。顯色后，15分鐘內(nèi)進行測定。(10) 計算機通過標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度及光密度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并通過樣本的OD450值自動讀出其濃度。 TAT檢測：(1)取出酶標(biāo)板，設(shè)空白孔，依照次序?qū)?yīng)分別加入50ul TAT的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中(空白孔視為0號標(biāo)準(zhǔn)品，用稀釋液替代)，并標(biāo)記樣品編號，加入50 ul的稀釋樣品（1：2稀釋）于空白微孔中。(2)置于37℃溫育120分鐘。(3)將酶標(biāo)板板取出，甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌，并甩去水滴，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干，重復(fù)上述步驟5次。(4)在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入50 ul的生物素化抗體，37℃孵育60分鐘。(5)將酶標(biāo)板取出，甩盡板內(nèi)液體，用洗滌液洗滌，并甩去水滴，在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干，重復(fù)上述步驟5次。(6) 在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入50 ul的SP結(jié)合物，37℃孵育30分鐘(7)重復(fù)洗板5次；(8)每孔中加入50ul顯色劑，輕輕振蕩混勻。(9)置于室溫避光溫育反應(yīng)15分鐘出現(xiàn)藍(lán)色。(10)每個微孔中加入50ul的終止液，輕輕振蕩混勻。(11)在酶標(biāo)儀上，450nm處測定OD。顯色后，15分鐘內(nèi)進行測定。(12) 計算機通過標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度及光密度值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并通過樣本的OD450值自動讀出其濃度。3 統(tǒng)計學(xué)處理,采用方差分析比較肺癌不同分期、對照組之間、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移各組數(shù)據(jù)之間關(guān)系；采用t檢驗比較良惡性組數(shù)據(jù)之間關(guān)系。兩變量間相關(guān)分析血漿OPN和TAT的相關(guān)性。選定p。寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 參考文獻結(jié)果1 肺癌組、肺部良性病變組及健康對照組外周血中OPN和TAT含量46例肺癌組OPN和TAT含量（，），明顯高于22例肺部良性病變組（177。，177。）和20例健康對照組（177。，177。），見圖圖2及表1。肺部良性病變組與健康對照組二者含量比較P，見表2.1表1肺癌組、肺部良性病變組及健康對照組外周血中OPN和TAT含量比較分組OPN(ng/ml)TAT(ng/ml)肺癌組（n=46）177。177。肺部良性病變組（n=22）177。▲177?！】祵φ战M（n=20）177?！睢?77。☆●▲肺癌組與肺部良性病變比較p=(p)●肺癌組與健康對照組比較p=(p)☆肺部良性病變與健康對照組比較p表2 肺部良性病變組及健康對照組外周血中OPN和TAT含量比較(177。s )分組TAT（ng/ml）OPN（ng/ml）健康體檢組（n=20）肺部良性病變組(n=22)▲●● OPN在肺部良性病變組與健康對照組之間比較P；▲TAT在肺部良性病變組與健康對照組之間比較P。2 外周血中OPN和TAT與肺癌臨床特征的關(guān)系NSCLC患者外周血中OPN和TAT的含量隨肺癌的臨床分期（TNM分期）升高而增加；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者血漿水平高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移著。見圖3表35。圖3 NSCLC組TAT血漿水平在TNM分期比較圖圖4 NSCLC組OPN血漿水平在TNM分期比較圖圖5 NSCLC組OPN血漿水平在有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移比較圖圖6NSCLC組TAT血漿水平在有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移比較圖表3OPN、TAT血漿水平在肺癌分期及有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組間比較 (177。s )臨床特征例數(shù)TAT（ng/ml）OPN（ng/ml）臨床分期I期7II期10III期14IV期15遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有15無31 注：OPN血漿水平在NSCLCI期與II期間無顯著差異P=；I/II期水平較III期低P=；III期與IV期間有顯著差異，III期較IV期水平低，P=。有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者水平高于無轉(zhuǎn)移者P=。TAT血漿水平在NSCLC I期與II期間無顯著差異P=，III期與IV期間無顯著差異P=，I/II期水平較III/IV期水平低P=；=，表4肺癌組OPN及TAT血漿水平在性別間比較(177。s )性別OPN(ng/ml)TAT(ng/ml)男（n=28）女(n=18)▲●▲ OPN血漿水平在性別之間比較P＞；●TAT血漿水平在性別之間比較P＞表5肺癌組OPN及TAT血漿水平在性別間比較(177。s )年齡段OPN(ng/ml)TAT(ng/ml)≥60歲＜60歲▲●▲OPN血漿水平在年齡之間比較P＞；●TAT血漿水平在年齡之間比較P＞表6肺癌組不同病理類型OPN及TAT血漿水平比較(177。s )肺癌類型OPN(ng/ml)TAT(ng/ml)鱗癌（n=21）腺癌 (n=25)▲●▲OPN血漿水平在不同病理類型之間比較P＞；●TAT血漿水平不同病理類型在之間比較P＞3 NSCLC組中外周血中OPN和TAT的關(guān)系肺癌