【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 暗視野顯微鏡、鈍刀 (刮勺 )、載玻片、注射器、注射針頭、無(wú)菌等滲鹽水。 A． 3取材 A． 3． 1 皮膚黏膜損害取材：首先在載玻片 (厚度為 1． Omm～ 1． 2mm)上滴加 50ttI，～ 100ttI。鹽水備用。 然后用棉拭子取無(wú)菌鹽水輕輕擦去皮損上的污物。如皮損上有痂皮，可用鈍刀小心除去。再用鈍刀輕 輕地刮數(shù)次 (避免出血 )，取組織滲液與載玻片上的鹽水混勻，加蓋玻片置暗視野顯微鏡下檢查。 A． 3． 2淋巴結(jié)取材：消毒淋巴結(jié)表面皮膚，用無(wú)菌干棉球擦干。用 lml，無(wú)菌注射器配 12號(hào)針頭，吸 取無(wú)菌等滲鹽水 0． 25mL～ 0． 5mI。，以無(wú)菌操作穿 刺淋巴結(jié)并注入鹽水，再吸人注射器內(nèi)，反復(fù) 2～ 3次 后，取少量淋巴液于載玻片上，加蓋玻片，置暗視野是微鏡下檢查。 A． 4方法 A． 4． 1在暗視野聚光器 (此法用濕系暗視野聚光器 )上加一滴甘油緩沖液 (甘油和 0． 1mol／ L PBS， pH 7． 0按 7： 3配制 )。 A． 4． 2載玻片置載物臺(tái)上，上升聚光器使甘油緩沖液接觸載玻片，先用 10倍物鏡，使物像清晰，再用 40倍物鏡觀察，尋找有特征形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式的梅毒螺旋體。 A． 5結(jié)果及解釋 A． 5． 1暗視野顯微鏡下，典型的梅毒螺旋體呈白色發(fā)光，其螺旋較密而均勻。運(yùn)動(dòng)規(guī) 律，運(yùn)動(dòng)性較強(qiáng)， 其運(yùn)動(dòng)方式包括： ① 旋轉(zhuǎn)式，圍繞其長(zhǎng)軸旋轉(zhuǎn)； ② 蛇行式，全身彎曲如蛇行； ③ 伸縮其螺旋間距離而移動(dòng)。 觀察其運(yùn)動(dòng)形式有助于與其他螺旋體相鑒別。 A． 5． 2未檢出螺旋體不能排除梅毒的診斷，陰性結(jié)果可能說(shuō)明： ① 螺旋體數(shù)量不足 (單次暗視野顯微 鏡檢查陽(yáng)性率小于 50％ )； ② 患者已接受抗生素或殺滅梅毒螺旋體的藥物治療； ③ 損害接近自然消退； ④ 損害不是梅毒。 ～ WS 273—2020 附錄 B (規(guī)范性附錄】 梅毒血清學(xué)檢查 當(dāng)人體感染梅毒螺旋體后 4周～ 10周左右，血清中可產(chǎn)生一定數(shù)量的抗類(lèi)脂質(zhì)抗原的非特異性反 應(yīng)素 (主要是 lgM、 IgG)和抗梅毒螺旋體抗原的特異性抗體 (主要是 IgM、 IgG)。這些抗體均可用免疫 學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)。血清學(xué)檢查是輔助診斷梅毒的重要手段。 根據(jù)檢測(cè)所用抗原不同，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)分為兩大類(lèi)：一類(lèi)為非梅毒 螺旋體抗原血清試驗(yàn)，包括 VDRI。玻片試驗(yàn)、 USR玻片試驗(yàn)、 RPR試驗(yàn)、 TRUST試驗(yàn)，這些試驗(yàn)主要應(yīng)用于梅毒的篩查和療效觀 察。另一類(lèi)為梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)，包括 TPHA試驗(yàn)、 TPPA試驗(yàn)、 FTAABS試驗(yàn)、E1． ISA試驗(yàn) 等。這些試驗(yàn)主要用于確證試驗(yàn)，不用于療效觀察。 B． 1 非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn) B． 1． 1原理 梅毒螺旋體一旦感染人體，人體迅速對(duì)被損害的宿主細(xì)胞以及梅毒螺旋體細(xì)胞表面所釋放的類(lèi)脂 物質(zhì)作出免疫應(yīng)答，在 3周～ 4周產(chǎn)生抗類(lèi)脂抗原的抗體 (反應(yīng)素 )。這些抗體主要是 IgG和 IgM型 混 合抗體。非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)是使用心磷脂、卵磷脂及膽固醇作為抗原的絮狀凝集試驗(yàn)。反應(yīng)素與 心磷脂形成抗原抗體反應(yīng)，卵磷脂可加強(qiáng)心磷脂的抗原性，膽固醇可增強(qiáng)抗原的敏感性。心磷脂、卵磷 脂遇水形成膠體溶液，膽固醇遇水形成結(jié)晶。當(dāng)抗原與抗體 (反應(yīng)素 )混合發(fā)生反應(yīng)時(shí)，后者即粘附膠體 微粒的周?chē)?，形成疏水性薄膜。由于搖動(dòng)、碰撞，使顆粒與顆?；ハ嗾掣蕉纬扇庋劭梢?jiàn)的顆粒凝集和 沉淀，即為陽(yáng)性反應(yīng)。如遇到非梅毒血清，因體液中的白蛋白多于球蛋白，而白蛋白對(duì)膠體顆粒有保護(hù) 作用，形成親水性薄膜，即使同樣搖動(dòng)、碰撞，由于抗 原顆粒周?chē)鷽](méi)有粘附免疫球蛋白的作用，不能形成 較大顆粒，無(wú)肉眼可見(jiàn)的凝集和沉淀，因此為陰性反應(yīng)。 VDRL、 USR、 RPR和 TR UST等試驗(yàn)均為此 類(lèi)試驗(yàn)，它們所采用的抗原成分相同，敏感性和特異性基本相似。 B． 1． 2 VDRL玻片試驗(yàn) B． 1． 2． 1材料 a． VDRL試劑盒：含 VDRL抗原 (o． 5ml， )； VDRI。緩沖液， pH 6． 0177。0． 1，其配方為中性福爾馬林 0． 5m I。， Na： HP O。 0 ． 0379， KH2P(X 0 ． 179， NaCl 10． 09，蒸餾水 l 000mI．；標(biāo)準(zhǔn)針頭 (60q1滴／ml， )，直 徑 14mm漆圈玻片； VDRI。試驗(yàn)結(jié)果圖片。 b．其他： 0． 85％ NaCl溶液 (等滲鹽水 )；可調(diào)水平旋轉(zhuǎn)器。 B． 1． 2． 2 VDRI。抗原配制方法： a．吸取 0． 3mI． VDRL緩沖液置 30mL小瓶； b．吸取 0． 3mI，VDRI．抗原迅速滴入小瓶?jī)?nèi) VDRL緩沖液中 (約 4s)，隨后搖動(dòng) 10s，使之混勻； C．立即加 2． 4mL VDRL緩沖液，蓋上瓶蓋，來(lái)回顛倒搖動(dòng)小瓶 10s約 30次，即為 VDRI．抗原，此 抗原只能用 1d。 B． 1． 2． 3定性試驗(yàn) a．血清標(biāo)本需 56℃ 滅活 30min備用； b．吸取 0． 05mL血清放人玻片圈內(nèi)，將血清涂開(kāi)至整個(gè)圈內(nèi)； c．用標(biāo)準(zhǔn)針頭加入 1滴抗原； d．將玻片置旋轉(zhuǎn)器上搖動(dòng) 4min， (180177。5)次／ min，立即置 10顯微鏡下觀察。 B． 1． 2． 4定量試驗(yàn) 經(jīng) VDRL定性試驗(yàn)為陽(yáng)性、弱陽(yáng)性，可疑反應(yīng)或陰性但臨床懷疑為梅毒者，需做定量試驗(yàn)，前者需 WS 273—2020 明確抗體滴度，后者為排除 “前帶現(xiàn)象 ”。 a．在反應(yīng)板 18孔各加等滲鹽水 0． 05mI．； b．吸取 0． 05mL血清標(biāo)本 (血清已滅活 )置第 1孔與等滲鹽水混勻，吸取 0． 05mI。稀釋液至第 2孔 混勻，再吸取 0． 05mL至第 3孔，如此連續(xù)稀釋至第 8孔，棄 0． 05mL稀釋液。稀釋度為原倍、 1： 1： 1： 1： 1 1： 3 1： 6 1： 128，必要時(shí)可 稀釋至更高倍數(shù)。 C．每個(gè)稀釋度加入抗原 l滴； d．旋轉(zhuǎn)速度和時(shí)間同定性試驗(yàn)。 B． 1． 2． 5結(jié)果 大或中等大小的絮狀物，液體清亮： 3+～ 4+強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng)； 絮狀物較小，液體較清亮： 2+陽(yáng)性反應(yīng)； 絮狀物較小，均勻分布，液體混濁： 1+弱陽(yáng)性反應(yīng)； 抗原顆粒稍粗，無(wú)凝集： 177?？梢桑? 抗原顆粒均勻，針狀細(xì)?。阂魂幮苑磻?yīng)。 B． 1． 3 RPR環(huán)狀卡片試驗(yàn) B． 1． 3． 1原理 RPR試驗(yàn)是 VDR L試驗(yàn)的一種改良方法。該法是在抗原中加入活性炭顆粒作為指示物，加入了 氯化膽堿，因此血清不需滅活。特制的白色紙卡替代 了玻片。試驗(yàn)結(jié)果易于判斷，肉眼即可觀察。也可 用血漿進(jìn)行檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)果可保存?？乖?4℃ 冰箱可保存 1年。 B． 1． 3． 2材料 a． RPR試劑盒：含 RPR抗原；直徑為 18ram圓圈的特制白色反應(yīng)卡片；標(biāo)準(zhǔn)針頭 [(60177。1滴／ mI． )]； RPR試驗(yàn)結(jié)果圖片。 b．其他：可調(diào)水平旋轉(zhuǎn)器。 B． 1． 3． 3定性試驗(yàn) a．吸取 0． 05mL血