口腔醫(yī)學(xué)技術(shù)專業(yè)論文口腔修復(fù)畢業(yè)論文口腔內(nèi)科論文綜述：口腔黏膜真菌鑒定方法的比較(編輯修改稿)
2024-12-10 07:30 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 作 ,取 10μ L 酶切產(chǎn)物 , 2%瓊脂糖凝膠電泳 , 110 V 30 min 電泳 ,紫外線凝膠掃描成像。不同的假絲酵母菌菌種被酶分離出不同的片段長度 ,產(chǎn)物鑒定標(biāo)準(zhǔn) [7]。 1. 2. 7 ITS 序列分析菌種鑒定 取 ITS1ITS4 的 30μ LPCR 擴(kuò)增產(chǎn)物 (總量 1~2μ gPCR 產(chǎn)物 ),送上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序。測序結(jié)果用 Blast 搜索程序提交 GenBank。 1. 2. 8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用 SPSS11. 5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 , 5種鑒定假絲酵母菌種的方法陽性率比較用χ 2檢驗(yàn) ,當(dāng) T5時用 Pearson ChiSquare分析 , 1T5時用 Continuity Correction 分析 ,P0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 結(jié) 果 微量培養(yǎng)法鑒定 37例真菌菌株樣本在玉米吐溫 80瓊脂上鏡檢可見類圓形厚壁孢子 ,部分有明顯假菌絲。 4 例熱帶假絲酵母菌鏡下見分枝菌絲 ,無厚壁孢子。 3 例近平滑假絲酵母菌鏡下觀察見小分生孢子 , 1例乙醇假絲酵母菌培養(yǎng)后見長棒狀孢子。 其他標(biāo)本鏡下觀察不典型。該法檢測正常人群口腔假絲酵母菌陽性檢出率占 20% (46/230)。 2. 2 CHROM agar 假絲酵母菌顯色培養(yǎng)基檢測 可鑒別出 9株白假絲酵母菌 (草綠色 ),4株熱帶假絲酵母菌 (藍(lán)灰色 ),10株近平滑假絲酵母菌 (淡粉色 ),其余 7個菌株分別呈粉色、白色、粉紫色 ,顏色接近難以鑒別 。 該法檢測正常人群口腔假絲酵母菌陽性 檢出率占 13% (30/230)。該法和基因測序法熱帶假絲酵母菌檢出一致率為 80% (4/5),2 種方法檢出近平滑假絲酵母菌完全相符 ,皆為 10 例。 2. 3 糖發(fā)酵生化法檢測 該法陽性標(biāo)本占被檢出真菌例數(shù)的 %(26/56)。 2. 4 ITS 基因的 PCRRFLP 鑒定 白假絲 酵母菌和熱帶假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌均被 Msp I 分離出 2個片段大小各不相同的條帶 ,季也蒙假絲酵母菌被酶切分離出 3個條帶 ,近平滑假絲酵母菌則在酶切前后保持相同的片段。該法鑒定正常人群口腔假絲酵母菌陽性結(jié)果和基因測序結(jié)果一致率為 91%。 2. 5 ITS 基因測序鑒定 測序結(jié)果陽性真菌 50 株 ,GenBank 已提供 45 個菌株的序列登錄號 ,每個菌種選取其中的 1 例 ,見表 2。各菌種陽性率分別為白色假絲酵母菌 51. 8% (29/50),近平滑假絲酵母菌 17. 9% (10/50),熱帶假絲酵母菌 8. 9% (5/50),克柔假絲酵母菌 1. 8% (1/50),乙醇假絲酵母菌 1. 8% (1/50), 季也蒙假絲酵母菌 3. 6% (2/50),Lodderomyces elongisporus% (1/50),Candida metapsilosis % (1/50)。 各種方法鑒定比較 5 種鑒定假絲酵母菌種的方法測得陽性例數(shù)有所不同 ,結(jié)果見表 3。 ITSRFLP 鑒定陽性例數(shù)、測序鑒定陽性例數(shù)各自分別同玉米吐溫 80 培養(yǎng)鑒定陽性例數(shù)、 CHROMagar 顯色培養(yǎng)基鑒定陽性例數(shù)、生化鑒定陽性例數(shù)進(jìn)行比較 ,差異皆有
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