生物免疫分析技術(shù)ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-08 12:35 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 （六）應(yīng)用親和素和生物素的 ELISA （一）雙抗體夾心法 此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原 步驟： A 將已知抗體吸附于載體上，溫育后清洗； B 加入待檢標(biāo)本溶液，使溶液中的抗原與吸附的抗體結(jié)合，溫育后清洗； C 加入酶標(biāo)記特異性抗體，溫育后清洗； D 加入酶作用底物，產(chǎn)生顯色反應(yīng)，顏色的改變與所加的待檢標(biāo)本溶液中的抗原量成正比。 間接法是檢測(cè)抗體最常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體，故稱為間接法。 （二）間接法 步驟： A 將已知可溶性抗原吸附于載體（聚苯乙烯板或聚乙苯乙烯小珠），經(jīng)溫育后清洗； B 加入待檢稀釋血清，若血清中有相應(yīng)特異性抗體存在則與吸附的抗原結(jié)合，溫育后清洗； C 加入酶標(biāo)記的抗球蛋白抗體，此時(shí)酶標(biāo)記抗抗體與吸附的抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，溫育后清洗； D 加入酶作用底物（或稱基質(zhì)），酶分解底物并顯色，用光電比色計(jì)測(cè)定底物顯色深淺，即可推知抗體量。 （三）競(jìng)爭(zhēng)法 此法可用于檢測(cè)小分子抗原。 步驟： A 將已知抗體吸附于固相載體表面，溫育后清洗； B 將可能含抗原的待檢溶液和酶標(biāo)記的已知抗原溶液以適當(dāng)比例混合，加入已包被的載體孔中，溫育后清洗； C 加入酶作用的底物，產(chǎn)生顯色反應(yīng)。色深表示結(jié)合的酶標(biāo)記抗原多，而待檢溶液中未標(biāo)記的抗原量少；反之，色淺表示結(jié)合的酶標(biāo)記抗原少，而待檢溶液中抗原量多。 對(duì)照管由于只加酶標(biāo)抗原，與固相抗體充分結(jié)合，故分解底物顯色深；測(cè)定管的顯色程度則隨待測(cè)抗原和酶標(biāo)抗原與固相抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的結(jié)果而異。如待測(cè)抗原量多，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制酶標(biāo)抗原與固相抗體結(jié)合，使固相上結(jié)合的酶標(biāo)抗原量減少。因此，加入底物后顯色反應(yīng)較弱。 特點(diǎn) 特點(diǎn)一：靈敏性 該測(cè)定法的靈敏度來(lái)自酶。眾所周知 , 酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng) ，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。 ELISA實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納
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