天然dna的制備ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-08 07:46 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 裂解不夠， DNA得率低；裂解過猛， DNA斷裂。細(xì)菌可用溶菌酶、 NaOH + SDS、煮沸、冰凍或超聲波等方法處理。動(dòng)植物組織，先粉碎材料，再裂解細(xì)胞。 3） DNA的分離和抽提 根據(jù)待提 DNA的性質(zhì)，將其與其他組分分離，進(jìn)一步抽提 DNA。一般先按 1:1（ V:V）用酚、酚 +氯仿、氯仿對(duì)裂解液分別進(jìn)行抽提，以除去蛋白質(zhì)，然后按 2:1用乙醇（ V:V）或 1:1用異丙醇（ V:V）在酸性條件下（加 1/10 體積的 3M NaAc ）沉淀 DNA。 注意： 提取細(xì)胞器、病毒或噬菌體 DNA時(shí)，必須先從裂解液中分離出完整的細(xì)胞器、病毒或噬菌體，并用 DNase處理附著在其表面的其他 DNA。 提取質(zhì)粒 DNA時(shí)，先調(diào)節(jié)裂解液的 pH值到 ，使所有 DNA沉淀，再調(diào)節(jié) pH值到中性，使質(zhì)粒 DNA復(fù)性從沉淀中釋放出來。用 RNase水解除去 RNA。 實(shí)例 1）質(zhì)粒 DNA （實(shí)驗(yàn)） 2） λ噬菌體 DNA （自學(xué)） 3）植物基因組 DNA （實(shí)驗(yàn)） 4）動(dòng)物基因組 DNA（自查資料學(xué)習(xí)） DNA的純化 1）氯化銫－溴化乙錠連續(xù)梯度離心法 純化劑量大、純度高的 DNA，須有超速離心機(jī)、氯化銫（昂貴），時(shí)間長(zhǎng)。操作步驟如下： ① DNA 樣品預(yù)處理： DNA溶液置離心管，每毫升加 1g固體氯化銫， 30℃ 下緩慢溶解，再加溴化乙錠（ EtBr或 EB）溶液（ 10 mg／ ml）至終濃度 mg／ ml。溶液中氯化銫終濃度為 g／ ml，折射率為 。 ②超離心： 室溫下 8000 r／ min離心 5 min，吸取液面浮渣下的清液置于一塑料離心管中，用液體石蠟蓋在液面上， 20℃ 下以 45000 r/min 離心 36－ 40 h。 ③收集 DNA： 紫外燈下觀察 DNA帶。在 DNA帶下方用
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