westernblot精華ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-01 18:34 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 is 6ml TriHCl （ PH=） （ PH=） 10%SDS 150ul 50ul 10%APS 150ul 50ul TEMED 15ul 10ul 常用凝膠配置比例 凝膠濃度與蛋白分離范圍 凝膠濃度％ （ W/V） 分離范圍（ KD) 1002022 80500 60400 40200 25150 6100 6以下 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳注意事項(xiàng)： 做膠：防止漏膠、進(jìn)氣泡以及花膠 (水封、插梳子和拔梳子 )。 加樣：加樣量一樣，加樣時(shí)間要盡量短，以免樣品擴(kuò)散 電泳：將膠夾好放于電泳槽中，加電泳 buffer，將電壓調(diào)到 90V開始電泳，待樣品在積層膠里壓成一條直線之后，將電壓調(diào)到 120V，直到溴酚蘭前沿跑出膠后停止電泳。 轉(zhuǎn)膜 膜的選擇 聚偏二 氟乙烯膜 （ PVDF） 硝酸纖 維素膜 （ NC） 需要用甲醇浸泡 簡單快速封閉非特異性抗體結(jié)合 價(jià)格昂貴 價(jià)格便宜 膜的選擇 轉(zhuǎn)膜 半干法 （用 恒流 ） 將凝膠和固相基質(zhì)象三明治一樣加在用緩沖液濕 潤濾紙之間，電轉(zhuǎn) 10－ 30min。 濕法 將凝膠和固相基質(zhì)夾在濾紙中間，浸泡在轉(zhuǎn)移裝 置的緩沖液中，電轉(zhuǎn) 1h或過夜。 轉(zhuǎn)膜注意事項(xiàng)（一） 泡膜： 轉(zhuǎn)膜之前將海綿、膠、膜都用預(yù)冷的轉(zhuǎn)移 buffer浸泡 20min （ 若是沒在預(yù)冷的轉(zhuǎn)膜 buffer中浸泡，就會(huì)在轉(zhuǎn)膜過程中出現(xiàn) 凝膠皺縮 ，導(dǎo)致出現(xiàn) 轉(zhuǎn)移條帶變形 。 ，需用甲醇浸泡） 轉(zhuǎn)膜順序： 陰極碳板 (黑 )+海綿 +三濾 +膠 +膜 +三濾 +海綿 +陽極碳板（白） 轉(zhuǎn)膜條件： 250V 1h90min 冰浴 中進(jìn)行轉(zhuǎn)膜
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