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正文內(nèi)容

細(xì)胞化學(xué)染色ppt課件(2)(編輯修改稿)

2025-05-31 12:01 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 以增強(qiáng)染色效果 。KI的量對 MPO的反應(yīng)強(qiáng)度也有一定的調(diào)節(jié)作用 。 ? MPO染色陽性顆粒易溶于水,應(yīng)避免用水沖洗。 ? 正常分布: ? :中性粒細(xì)胞除早期原始粒細(xì)胞外 , 下階段細(xì)胞均為陽性反應(yīng);嗜酸性粒細(xì)胞反應(yīng)最快 , 著色最強(qiáng);嗜堿性粒細(xì)胞為陰性反應(yīng) 。 ? 2. 單核細(xì)胞系統(tǒng):部分細(xì)胞為弱陽性反應(yīng) , 顆粒細(xì)小疏松 , 彌散分布;部分細(xì)胞可呈陰性反應(yīng) 。 ? 3. 組織細(xì)胞及巨噬細(xì)胞可呈不同程度的陽性反應(yīng) 。 ? 4. 淋巴細(xì)胞 、 漿細(xì)胞 、 紅細(xì)胞 、 巨核細(xì)胞均為陰性反應(yīng) 。 ? 臨床意義: ? ⒈ 用于急性白血病的類型鑒別: ? ⑴ .急性粒細(xì)胞白血病較分化的原始粒細(xì)胞為陽性 , Auer小體為陽性 。 ? ⑵ .急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞為陰性或弱陽性 。 ? ⑶ .急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞為陰性 。 ? ⒉ 用于 ChediakHigashi綜合征等疾病的診斷及鑒別診斷 。 氯醋酸 ASD奈酚酯酶染色( CE) ? 原理 : ? 氯醋酸 ASD萘酯能被酯酶水解生成ASD萘酚,再與穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián),生成不溶性的藍(lán)色沉淀定位于細(xì)胞漿中。陽性反應(yīng)通常僅出現(xiàn)于粒細(xì)胞中,故又稱 特異性酯酶染色 。 ? 試劑 ? :緩沖甲醛丙酮溶液 ? ① ? ② ? ③ 丙酮 45ml ? ④ 40%甲醛 25ml, 混合 。 ? : ? M/15 Na2HPO4 85ml ? M/15 KH2PO4 15ml 混合 。 ? : ? ① PBS ? ② %氯醋酸 ASD萘酯 50ul ? ( N, N- 二甲基甲酰胺 ) ? ③ 堅固籃 BB 1mg, 混勻 。 ? 染色步驟: ? 干燥涂片 , 滴加固定劑布滿血膜固定 5秒鐘 , 流水沖洗 , 待干或?yàn)V紙吸干 。 ? 滴加工作液室溫下染色 15~ 20分鐘 ,流水沖洗 , 待干 。 ? 10g/L藏紅花紅或中性紅溶液復(fù)染 1分鐘 , 流水沖洗 , 干后鏡檢 。 ? 結(jié)果判斷 : ? 陽性反應(yīng)呈藍(lán)黑色顆粒狀,定位于細(xì)胞漿中。 ? 注意事項(xiàng) ? 1. 氯醋酸 ASD萘酯溶液應(yīng)避光 、 保存于 4℃ 冰箱 。 ? 2. 氯醋酸 ASD萘酯溶液變黃及混濁則失效 。 ? 3. 重氮鹽以堅固籃 BB最佳 , 也可用堅固籃 B、 堅固籃 RR鹽 。 ? 正常分布 : ? , 均為陽性反應(yīng); ? 。 ? 臨床意義 : 主要用于急性白血病的鑒別診斷 。 ? ⒈ 急性粒細(xì)胞白血病時 , 白血病細(xì)胞可呈不同程度的陽性反應(yīng) 。 ? 單核細(xì)胞白血病時 , 部分白血病細(xì)胞呈陽性反應(yīng) ( 粒細(xì)胞成分 ) 。 ? 3 .其它類型白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng) 。 ? ( 實(shí)體瘤 ) 腫瘤細(xì)胞可呈弱陽性反應(yīng) 。 酸性非特異性酯酶染色( ANAE) ? ㈠ 原理 ? 鹽酸副品紅與亞硝酸鈉反應(yīng)生成六偶氮副品紅 ( 重氮鹽 ) , 底物 a醋酸萘酯在酯酶的作用下分解為 a萘酚 , a萘酚與六偶氮副品紅結(jié)合生成棕紅色沉淀 , 定位于胞漿中 。 ? 工作液配制 : ? 40g/L副品紅溶液 ( 2N HCL) 、 ? 40g/L 亞硝酸鈉溶液 , ? 混勻 , 靜置 1分鐘 , ? 磷酸鹽緩沖溶液 , ? α- 醋酸萘酯溶液 ? [ 乙二醇 ( 單 ) 甲醚 ] ? 混勻 , 置 2分鐘 備用 。 ? 染色步驟 : ? 干燥涂片 , 滴加固定劑布滿血膜固定1秒鐘 , 流水沖洗 , 待干或?yàn)V紙吸干 。 ? 滴加工作液布滿血膜室溫下 ( 或 37oC)30分鐘 , 流水沖洗 , 待干或?yàn)V紙吸干 。 ? 10g/L甲基綠溶液復(fù)染 15~ 30秒鐘或%孔雀綠溶液復(fù)染 2秒鐘 , 流水沖洗 ,待干后鏡檢 。 ? 結(jié)果判斷 : 陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色 , 定位于細(xì)胞漿中 。 ? ①點(diǎn)樣型:主要見于成熟 T淋巴細(xì)胞,陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色 1~ 4個圓形、團(tuán)塊、邊界清楚的大點(diǎn)狀顆粒定位于胞漿中。 ? ②彌散型:陽性反應(yīng)呈棕紅色塵粒狀,彌散分布,可位于細(xì)胞漿的某一局部,邊界不清。 ? ③單核細(xì)胞型:陽性反應(yīng)為均勻棕紅色彌漫性遍布整個細(xì)胞漿。 ? 注意事項(xiàng) ? 1. 工作液的 pH值為 , 小鼠為 , 可用冰醋酸調(diào) pH值 。 ? 2. 涂片可不固定而直接加工作液做 ANAE染色 , 陽性反應(yīng)強(qiáng)于固定者; 37℃ 時陽性反應(yīng)強(qiáng)于室溫 。 ? 3. 磷酸鹽緩沖液的 pH值約為 , 用其配制工作液時不必用冰醋酸調(diào) pH值 。 ? 4. Na2HPO KH2PO4的稱量應(yīng)準(zhǔn)確 , 特別是有些試劑含有結(jié)晶水 , 計算時要注意 。 ? 5. 做 NaF抑制試驗(yàn)時 , NaF的用量為每 ml工作液中加。 ? 正常分布 : ? :呈強(qiáng)陽性反應(yīng) , 其反應(yīng)可被氟化鈉抑制 。 ? :各期粒細(xì)胞多呈陰性反應(yīng) , 有時少數(shù)粒細(xì)胞可呈弱陽性反應(yīng) , 其反應(yīng)不被氟化鈉抑制 。 ? 。 ? T淋巴細(xì)胞呈點(diǎn)狀陽性 , B淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞為陰性反應(yīng) 。 ? 、 巨噬細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng) ,高雪氏細(xì)胞 、 海藍(lán)組織細(xì)胞為陽性 。 ? , 部分病例的有核紅細(xì)胞可呈弱至中等強(qiáng)度的陽性 , 陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制 。 ? 臨床意義 ? ⒈ 主要用于急性白血病的鑒別診斷: ? ⑴ .急性單核細(xì)胞白血病的原始單核細(xì)胞至成熟單核細(xì)胞大多呈陽性反應(yīng) , 其反應(yīng)能被 NaF抑制 。 ? ⑵ .急性粒細(xì)胞白血病時 , 其白血病細(xì)胞為陰性 ( M3除外 ) ;有時少數(shù)粒細(xì)胞可呈弱陽性 , 其反應(yīng)不被 NaF抑制 。 ? ⑶ .急性早幼粒細(xì)胞白血病 ( M3) 時 , 白血病細(xì)胞可呈中度至弱的陽性 。 ? ⑷ .急性粒 單核細(xì)胞白血病時 , 部分細(xì)胞 ( 單核細(xì)胞成分
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