細(xì)胞化學(xué)染色ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-05-31 12:01 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 以增強(qiáng)染色效果 。KI的量對(duì) MPO的反應(yīng)強(qiáng)度也有一定的調(diào)節(jié)作用 。 ? MPO染色陽性顆粒易溶于水，應(yīng)避免用水沖洗。 ? 正常分布： ? ：中性粒細(xì)胞除早期原始粒細(xì)胞外 ， 下階段細(xì)胞均為陽性反應(yīng)；嗜酸性粒細(xì)胞反應(yīng)最快 ， 著色最強(qiáng)；嗜堿性粒細(xì)胞為陰性反應(yīng) 。 ? 2. 單核細(xì)胞系統(tǒng)：部分細(xì)胞為弱陽性反應(yīng) ， 顆粒細(xì)小疏松 ， 彌散分布；部分細(xì)胞可呈陰性反應(yīng) 。 ? 3. 組織細(xì)胞及巨噬細(xì)胞可呈不同程度的陽性反應(yīng) 。 ? 4. 淋巴細(xì)胞 、 漿細(xì)胞 、 紅細(xì)胞 、 巨核細(xì)胞均為陰性反應(yīng) 。 ? 臨床意義： ? ⒈ 用于急性白血病的類型鑒別： ? ⑴ .急性粒細(xì)胞白血病較分化的原始粒細(xì)胞為陽性 ， Auer小體為陽性 。 ? ⑵ .急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞為陰性或弱陽性 。 ? ⑶ .急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞為陰性 。 ? ⒉ 用于 ChediakHigashi綜合征等疾病的診斷及鑒別診斷 。 氯醋酸 ASD奈酚酯酶染色（ CE） ? 原理 ： ? 氯醋酸 ASD萘酯能被酯酶水解生成ASD萘酚，再與穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián)，生成不溶性的藍(lán)色沉淀定位于細(xì)胞漿中。陽性反應(yīng)通常僅出現(xiàn)于粒細(xì)胞中，故又稱 特異性酯酶染色 。 ? 試劑 ? ：緩沖甲醛丙酮溶液 ? ① ? ② ? ③ 丙酮 45ml ? ④ 40%甲醛 25ml， 混合 。 ? ： ? M/15 Na2HPO4 85ml ? M/15 KH2PO4 15ml 混合 。 ? ： ? ① PBS ? ② %氯醋酸 ASD萘酯 50ul ? （ N， N－ 二甲基甲酰胺 ） ? ③ 堅(jiān)固籃 BB 1mg， 混勻 。 ? 染色步驟： ? 干燥涂片 ， 滴加固定劑布滿血膜固定 5秒鐘 ， 流水沖洗 ， 待干或?yàn)V紙吸干 。 ? 滴加工作液室溫下染色 15～ 20分鐘 ，流水沖洗 ， 待干 。 ? 10g/L藏紅花紅或中性紅溶液復(fù)染 1分鐘 ， 流水沖洗 ， 干后鏡檢 。 ? 結(jié)果判斷 ： ? 陽性反應(yīng)呈藍(lán)黑色顆粒狀，定位于細(xì)胞漿中。 ? 注意事項(xiàng) ? 1. 氯醋酸 ASD萘酯溶液應(yīng)避光 、 保存于 4℃ 冰箱 。 ? 2. 氯醋酸 ASD萘酯溶液變黃及混濁則失效 。 ? 3. 重氮鹽以堅(jiān)固籃 BB最佳 ， 也可用堅(jiān)固籃 B、 堅(jiān)固籃 RR鹽 。 ? 正常分布 ： ? ， 均為陽性反應(yīng)； ? 。 ? 臨床意義 ： 主要用于急性白血病的鑒別診斷 。 ? ⒈ 急性粒細(xì)胞白血病時(shí) ， 白血病細(xì)胞可呈不同程度的陽性反應(yīng) 。 ? 單核細(xì)胞白血病時(shí) ， 部分白血病細(xì)胞呈陽性反應(yīng) （ 粒細(xì)胞成分 ） 。 ? 3 .其它類型白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng) 。 ? （ 實(shí)體瘤 ） 腫瘤細(xì)胞可呈弱陽性反應(yīng) 。 酸性非特異性酯酶染色（ ANAE） ? ㈠ 原理 ? 鹽酸副品紅與亞硝酸鈉反應(yīng)生成六偶氮副品紅 （ 重氮鹽 ） ， 底物 a醋酸萘酯在酯酶的作用下分解為 a萘酚 ， a萘酚與六偶氮副品紅結(jié)合生成棕紅色沉淀 ， 定位于胞漿中 。 ? 工作液配制 ： ? 40g/L副品紅溶液 （ 2N HCL） 、 ? 40g/L 亞硝酸鈉溶液 ， ? 混勻 ， 靜置 1分鐘 ， ? 磷酸鹽緩沖溶液 , ? α－ 醋酸萘酯溶液 ? ［ 乙二醇 （ 單 ） 甲醚 ］ ? 混勻 ， 置 2分鐘 備用 。 ? 染色步驟 ： ? 干燥涂片 ， 滴加固定劑布滿血膜固定1秒鐘 ， 流水沖洗 ， 待干或?yàn)V紙吸干 。 ? 滴加工作液布滿血膜室溫下 （ 或 37oC）30分鐘 ， 流水沖洗 ， 待干或?yàn)V紙吸干 。 ? 10g/L甲基綠溶液復(fù)染 15～ 30秒鐘或%孔雀綠溶液復(fù)染 2秒鐘 ， 流水沖洗 ，待干后鏡檢 。 ? 結(jié)果判斷 ： 陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色 ， 定位于細(xì)胞漿中 。 ? ①點(diǎn)樣型：主要見于成熟 T淋巴細(xì)胞，陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色 1～ 4個(gè)圓形、團(tuán)塊、邊界清楚的大點(diǎn)狀顆粒定位于胞漿中。 ? ②彌散型：陽性反應(yīng)呈棕紅色塵粒狀，彌散分布，可位于細(xì)胞漿的某一局部，邊界不清。 ? ③單核細(xì)胞型：陽性反應(yīng)為均勻棕紅色彌漫性遍布整個(gè)細(xì)胞漿。 ? 注意事項(xiàng) ? 1. 工作液的 pH值為 ， 小鼠為 ， 可用冰醋酸調(diào) pH值 。 ? 2. 涂片可不固定而直接加工作液做 ANAE染色 ， 陽性反應(yīng)強(qiáng)于固定者； 37℃ 時(shí)陽性反應(yīng)強(qiáng)于室溫 。 ? 3. 磷酸鹽緩沖液的 pH值約為 ， 用其配制工作液時(shí)不必用冰醋酸調(diào) pH值 。 ? 4. Na2HPO KH2PO4的稱量應(yīng)準(zhǔn)確 ， 特別是有些試劑含有結(jié)晶水 ， 計(jì)算時(shí)要注意 。 ? 5. 做 NaF抑制試驗(yàn)時(shí) ， NaF的用量為每 ml工作液中加。 ? 正常分布 ： ? ：呈強(qiáng)陽性反應(yīng) ， 其反應(yīng)可被氟化鈉抑制 。 ? ：各期粒細(xì)胞多呈陰性反應(yīng) ， 有時(shí)少數(shù)粒細(xì)胞可呈弱陽性反應(yīng) ， 其反應(yīng)不被氟化鈉抑制 。 ? 。 ? T淋巴細(xì)胞呈點(diǎn)狀陽性 ， B淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞為陰性反應(yīng) 。 ? 、 巨噬細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng) ，高雪氏細(xì)胞 、 海藍(lán)組織細(xì)胞為陽性 。 ? ， 部分病例的有核紅細(xì)胞可呈弱至中等強(qiáng)度的陽性 ， 陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制 。 ? 臨床意義 ? ⒈ 主要用于急性白血病的鑒別診斷： ? ⑴ .急性單核細(xì)胞白血病的原始單核細(xì)胞至成熟單核細(xì)胞大多呈陽性反應(yīng) ， 其反應(yīng)能被 NaF抑制 。 ? ⑵ .急性粒細(xì)胞白血病時(shí) ， 其白血病細(xì)胞為陰性 （ M3除外 ） ；有時(shí)少數(shù)粒細(xì)胞可呈弱陽性 ， 其反應(yīng)不被 NaF抑制 。 ? ⑶ .急性早幼粒細(xì)胞白血病 （ M3） 時(shí) ， 白血病細(xì)胞可呈中度至弱的陽性 。 ? ⑷ .急性粒 單核細(xì)胞白血病時(shí) ， 部分細(xì)胞 （ 單核細(xì)胞成分
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