細胞化學染色ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-05-31 12:01 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 以增強染色效果 。KI的量對 MPO的反應強度也有一定的調(diào)節(jié)作用 。 ? MPO染色陽性顆粒易溶于水，應避免用水沖洗。 ? 正常分布： ? ：中性粒細胞除早期原始粒細胞外 ， 下階段細胞均為陽性反應；嗜酸性粒細胞反應最快 ， 著色最強；嗜堿性粒細胞為陰性反應 。 ? 2. 單核細胞系統(tǒng)：部分細胞為弱陽性反應 ， 顆粒細小疏松 ， 彌散分布；部分細胞可呈陰性反應 。 ? 3. 組織細胞及巨噬細胞可呈不同程度的陽性反應 。 ? 4. 淋巴細胞 、 漿細胞 、 紅細胞 、 巨核細胞均為陰性反應 。 ? 臨床意義： ? ⒈ 用于急性白血病的類型鑒別： ? ⑴ .急性粒細胞白血病較分化的原始粒細胞為陽性 ， Auer小體為陽性 。 ? ⑵ .急性單核細胞白血病細胞為陰性或弱陽性 。 ? ⑶ .急性淋巴細胞白血病細胞為陰性 。 ? ⒉ 用于 ChediakHigashi綜合征等疾病的診斷及鑒別診斷 。 氯醋酸 ASD奈酚酯酶染色（ CE） ? 原理 ： ? 氯醋酸 ASD萘酯能被酯酶水解生成ASD萘酚，再與穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián)，生成不溶性的藍色沉淀定位于細胞漿中。陽性反應通常僅出現(xiàn)于粒細胞中，故又稱 特異性酯酶染色 。 ? 試劑 ? ：緩沖甲醛丙酮溶液 ? ① ? ② ? ③ 丙酮 45ml ? ④ 40%甲醛 25ml， 混合 。 ? ： ? M/15 Na2HPO4 85ml ? M/15 KH2PO4 15ml 混合 。 ? ： ? ① PBS ? ② %氯醋酸 ASD萘酯 50ul ? （ N， N－ 二甲基甲酰胺 ） ? ③ 堅固籃 BB 1mg， 混勻 。 ? 染色步驟： ? 干燥涂片 ， 滴加固定劑布滿血膜固定 5秒鐘 ， 流水沖洗 ， 待干或濾紙吸干 。 ? 滴加工作液室溫下染色 15～ 20分鐘 ，流水沖洗 ， 待干 。 ? 10g/L藏紅花紅或中性紅溶液復染 1分鐘 ， 流水沖洗 ， 干后鏡檢 。 ? 結(jié)果判斷 ： ? 陽性反應呈藍黑色顆粒狀，定位于細胞漿中。 ? 注意事項 ? 1. 氯醋酸 ASD萘酯溶液應避光 、 保存于 4℃ 冰箱 。 ? 2. 氯醋酸 ASD萘酯溶液變黃及混濁則失效 。 ? 3. 重氮鹽以堅固籃 BB最佳 ， 也可用堅固籃 B、 堅固籃 RR鹽 。 ? 正常分布 ： ? ， 均為陽性反應； ? 。 ? 臨床意義 ： 主要用于急性白血病的鑒別診斷 。 ? ⒈ 急性粒細胞白血病時 ， 白血病細胞可呈不同程度的陽性反應 。 ? 單核細胞白血病時 ， 部分白血病細胞呈陽性反應 （ 粒細胞成分 ） 。 ? 3 .其它類型白血病細胞呈陰性反應 。 ? （ 實體瘤 ） 腫瘤細胞可呈弱陽性反應 。 酸性非特異性酯酶染色（ ANAE） ? ㈠ 原理 ? 鹽酸副品紅與亞硝酸鈉反應生成六偶氮副品紅 （ 重氮鹽 ） ， 底物 a醋酸萘酯在酯酶的作用下分解為 a萘酚 ， a萘酚與六偶氮副品紅結(jié)合生成棕紅色沉淀 ， 定位于胞漿中 。 ? 工作液配制 ： ? 40g/L副品紅溶液 （ 2N HCL） 、 ? 40g/L 亞硝酸鈉溶液 ， ? 混勻 ， 靜置 1分鐘 ， ? 磷酸鹽緩沖溶液 , ? α－ 醋酸萘酯溶液 ? ［ 乙二醇 （ 單 ） 甲醚 ］ ? 混勻 ， 置 2分鐘 備用 。 ? 染色步驟 ： ? 干燥涂片 ， 滴加固定劑布滿血膜固定1秒鐘 ， 流水沖洗 ， 待干或濾紙吸干 。 ? 滴加工作液布滿血膜室溫下 （ 或 37oC）30分鐘 ， 流水沖洗 ， 待干或濾紙吸干 。 ? 10g/L甲基綠溶液復染 15～ 30秒鐘或%孔雀綠溶液復染 2秒鐘 ， 流水沖洗 ，待干后鏡檢 。 ? 結(jié)果判斷 ： 陽性反應呈棕色或棕紅色 ， 定位于細胞漿中 。 ? ①點樣型：主要見于成熟 T淋巴細胞，陽性反應呈棕色或棕紅色 1～ 4個圓形、團塊、邊界清楚的大點狀顆粒定位于胞漿中。 ? ②彌散型：陽性反應呈棕紅色塵粒狀，彌散分布，可位于細胞漿的某一局部，邊界不清。 ? ③單核細胞型：陽性反應為均勻棕紅色彌漫性遍布整個細胞漿。 ? 注意事項 ? 1. 工作液的 pH值為 ， 小鼠為 ， 可用冰醋酸調(diào) pH值 。 ? 2. 涂片可不固定而直接加工作液做 ANAE染色 ， 陽性反應強于固定者； 37℃ 時陽性反應強于室溫 。 ? 3. 磷酸鹽緩沖液的 pH值約為 ， 用其配制工作液時不必用冰醋酸調(diào) pH值 。 ? 4. Na2HPO KH2PO4的稱量應準確 ， 特別是有些試劑含有結(jié)晶水 ， 計算時要注意 。 ? 5. 做 NaF抑制試驗時 ， NaF的用量為每 ml工作液中加。 ? 正常分布 ： ? ：呈強陽性反應 ， 其反應可被氟化鈉抑制 。 ? ：各期粒細胞多呈陰性反應 ， 有時少數(shù)粒細胞可呈弱陽性反應 ， 其反應不被氟化鈉抑制 。 ? 。 ? T淋巴細胞呈點狀陽性 ， B淋巴細胞及漿細胞為陰性反應 。 ? 、 巨噬細胞呈強陽性反應 ，高雪氏細胞 、 海藍組織細胞為陽性 。 ? ， 部分病例的有核紅細胞可呈弱至中等強度的陽性 ， 陽性反應能被氟化鈉抑制 。 ? 臨床意義 ? ⒈ 主要用于急性白血病的鑒別診斷： ? ⑴ .急性單核細胞白血病的原始單核細胞至成熟單核細胞大多呈陽性反應 ， 其反應能被 NaF抑制 。 ? ⑵ .急性粒細胞白血病時 ， 其白血病細胞為陰性 （ M3除外 ） ；有時少數(shù)粒細胞可呈弱陽性 ， 其反應不被 NaF抑制 。 ? ⑶ .急性早幼粒細胞白血病 （ M3） 時 ， 白血病細胞可呈中度至弱的陽性 。 ? ⑷ .急性粒 單核細胞白血病時 ， 部分細胞 （ 單核細胞成分
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