常用方法學(xué)簡介ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-30 22:27 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 （ Feulgen reaction），組織切片或細胞涂片先經(jīng)稀鹽酸處理，使 DNA水解，醛基暴露，再用雪夫試劑處理，形成紫紅色反應(yīng)產(chǎn)物。 （四）免疫組織化學(xué)術(shù)（ immunohistochemistry） 利用免疫學(xué)抗原和抗體特異性結(jié)合的原理，檢測組織或細胞中的多肽和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的分布。為顯示抗原抗體復(fù)合物的存在，需進行抗體標(biāo)記；用熒光素如異硫氰酸熒光素標(biāo)記，可以在熒光顯微鏡下觀察，用膠體金標(biāo)記，可以在電鏡下觀察，用辣根過氧化酶標(biāo)記，則可在光鏡下或在電鏡下觀察。常用的方法有直接法、間接法和親和素 生物素復(fù)合物法（ ABC法）等。 熒光的觀察 （按標(biāo)本分類） 在熒光顯微鏡下觀察的標(biāo)本，當(dāng)然必須發(fā)出熒光，可是大多數(shù)標(biāo)本本身不能發(fā)出熒光，因而必須用熒光色素處理過才能發(fā)出熒光。 （ A）自發(fā)熒光 （ B）二次熒光 （ C）抗體熒光技術(shù) （ A）自發(fā)熒光 （不加染色） 有些物質(zhì)不加染色，也能發(fā)出熒光（自發(fā)熒光或原發(fā)熒光），但在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)（細胞學(xué)、生物組織、培養(yǎng)體等）領(lǐng)域中，只有很少物質(zhì)具有自發(fā)熒光，常采用后兩種方法。 測定物質(zhì)的熒光光譜或者激發(fā)光譜，可以判定物質(zhì)性質(zhì)（熒光光度法）。 應(yīng)用：生物學(xué)方面 —— 判定維生素，研究生物學(xué)上的生物源的胺。 （ B）二次熒光 （用化學(xué)染色） 非熒光性的物質(zhì)（蛋白質(zhì)、炭水化合物等）用熒光色素染色，由熒光色素產(chǎn)生熒光（二次熒光），以便進行觀察，對特定物體選擇合適的熒光色素，該物體就能和周圍的組織或細胞區(qū)別（分離）出來而可以觀察到。 應(yīng)用：吖啶橙 +核酸 金胺 +結(jié)核菌 介子奎二噁因 +染色體 （ C）抗體熒光技術(shù) （用免疫染色） 利用特定的抗原必然和特定的抗體相結(jié)合這一個事實，有意識地使帶熒光標(biāo)記的抗體和標(biāo)本中的抗原進行抗原 /抗體反應(yīng)，這樣兩者的結(jié)合體就能通過抗體的熒光觀察到。熒光顯微鏡最常用于抗體滎光技術(shù)進行觀察，并成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)很多領(lǐng)域中極為有用的工具。 Glial fibrillary acidic protein 熒光色素 +物質(zhì) 激發(fā)方法 吸收波長 輻射熒光 （自發(fā)熒光） 維生素 A 紫外（ UV） 325345nm 470490nm 維生素 B6 紫外（ UV） 356 432 兒茶酚胺 紫（ V） 410（ 405415） 480（ 475485） 血清素（ 5羥色胺） 紫（ V） 390（ 385400） 530（ 520540） 葉綠素 蘭（ B） 520 650660 熒光色素 +物質(zhì) 激發(fā)方法
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