【文章內(nèi)容簡介】 英、德、法、意等為代表），較易發(fā)的癌癥類型依次為乳腺癌、肺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌和卵巢癌。流行病學(xué)研究提示，不僅我國腫瘤死亡率呈明顯上升趨勢，而且兼有發(fā)展中國家和發(fā)達(dá)國家高發(fā)譜并存的特點(diǎn)。據(jù)國家衛(wèi)生部信息中心的報(bào)道，近年來危害我國民眾的主要癌癥類型依次為胃癌(%)、肝癌(%)、肺癌(%)、食管癌(%)、結(jié)腸直腸癌(含肛門腫瘤，%)、白血病(%)、子宮頸癌(%)、鼻咽癌(%)和乳腺癌(%)。據(jù)我國衛(wèi)生部統(tǒng)計(jì)，20世紀(jì)90年代我國腫瘤發(fā)病率已上升為127例／10萬人。近年來我國每年新增腫瘤患者160170萬人，總數(shù)估計(jì)在450萬人左右。西方發(fā)達(dá)國家目前約有20%癌癥患者使用紫杉醇類藥品，由于價(jià)格昂貴，發(fā)展中國家患者使用還較少。近期研究表明紫杉醇對(duì)白血病等其他惡性疾病也有較好效果，在替代新藥出來之前，使用紫杉醇的患者會(huì)越來越多?？梢灶A(yù)料，今后醫(yī)藥工業(yè)對(duì)紫杉醇原料藥的需求量還將陸續(xù)上升。因此由紅豆杉枝葉加工提取的紫杉醇具有良好的市場前景。國內(nèi)外制劑需求帶動(dòng)了紫杉醇原料藥市場的火爆，近兩年，全球紫杉醇產(chǎn)量已在上升，外銷競爭激烈，2003年原料藥售價(jià)約在22萬美元左右，由于價(jià)格的合理性變化，臨床應(yīng)用的擴(kuò)人，仍然較大的利潤空間，但是同質(zhì)化、低水平的重復(fù)建設(shè)也是商戰(zhàn)中值得我們反思的課題。據(jù)國際醫(yī)藥市場分析員估計(jì)，各國對(duì)紫杉醇原料的需求量在今后5年中將迅速上升，增加幅度達(dá)100%。其理由是，紫杉醇治療晚期腫瘤療效顯著，其它化療藥無法取代；二是美國已開始批準(zhǔn)生產(chǎn)紫杉酵的通用名藥制劑產(chǎn)品，這意味著紫杉醇在美國不再是施貴寶獨(dú)家產(chǎn)品。此外，意大利、德國的制藥企業(yè)在年內(nèi)亦將推出各自的紫杉醇通用名藥制劑產(chǎn)品。隨著越來越多紫杉醇通用名藥產(chǎn)品陸續(xù)上市，各制劑廠對(duì)爭奪紫杉酵原料藥的競爭將日趨激烈。無容置疑，隨著制劑生產(chǎn)的擴(kuò)大對(duì)紫杉醇原料的需求也會(huì)不斷增長。第四章 場址選擇和建設(shè)條件一、場址選擇某市、樂業(yè)縣、西林縣、凌云縣，那坡縣、靖西縣、隆林縣、田林縣、德?？h二、建設(shè)條件某市地處某西部，某地區(qū)中部，全地區(qū)轄12個(gè)縣（市），183個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)，云貴高原與南嶺丘陵的過渡地帶，珠江流域西江水系的右江上游，位于東經(jīng) 106176。07′－106176。56′，北緯23176。33′－24176。18′之間。西部與云南相接，北部與貴州毗鄰，東與首府南寧緊連，南與越南接壤，邊境線長達(dá)365公里，是滇、黔、桂三省中心城市，是我國大西南通往太平洋地區(qū)出海通道的黃金走廊，由于地勢西高東低，因此某東西兩地溫差很大。某東部屬副熱帶濕潤氣候，氣候溫暖。冬暖而短，夏悶熱漫長。冬季干燥但陽光低；夏秋相當(dāng)晴朗。降雨集中在5月~8月。年均降水量 1115 毫米， ℃， ℃，7月均溫 ℃。而某西部由于是地處云貴高原東緣，地勢平均高于海拔500米，而隆林縣和西林縣一帶更高于海拔1000米。氣候情況與云南省中部大部份城市相若，全年溫差較少而氣溫偏低。而某市下轄的樂業(yè)縣，夏天白天不熱，晚上較冷，不開空調(diào)，還須蓋被子呢，是旅游、避暑的好地方。樂業(yè)縣還是某唯一一個(gè)冬天會(huì)下雪的地方，平均每年雪期約3~6天左右，具有小東北之稱。立體多樣的農(nóng)業(yè)開發(fā)帶。在發(fā)展特色產(chǎn)業(yè)的同時(shí)，樂業(yè)縣非常重視打造特色品牌，2012年，該縣創(chuàng)建“全國有機(jī)農(nóng)業(yè)示范基地縣”，通過國家農(nóng)業(yè)部專家組驗(yàn)收，成為某惟一一個(gè)有機(jī)農(nóng)業(yè)示范縣。某為全國特有的農(nóng)業(yè)寶地，由于地形地貌復(fù)雜，形成某獨(dú)特的立體氣候，海拔從100米到近2000米都有農(nóng)業(yè)的耕作區(qū)，為某農(nóng)業(yè)的縮影，具有南方河谷平原、丘陵地帶、石山區(qū)、高寒山區(qū)等代表性農(nóng)業(yè)開發(fā)帶，同時(shí)生長著多種熱帶、亞熱帶以及溫帶作物，使某成為地方特色農(nóng)產(chǎn)品種類和品種繁多的生產(chǎn)區(qū)域。某獨(dú)特的地理位置和優(yōu)良的生態(tài)環(huán)境為以上項(xiàng)目的實(shí)施提供了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。第五章 建設(shè)目標(biāo)與任務(wù)一、總體方案設(shè)計(jì) 項(xiàng)目建設(shè)設(shè)計(jì)如下：年份建設(shè)性質(zhì)名稱規(guī)模2013年新建石斛種植園8000畝2013年新建石斛培育、加工基地1個(gè)2013年改造改造老茶園20000畝2013年新建茶園80000畝2013年新建有機(jī)茶加工廠3個(gè)2013年新建紅豆杉種植園1000000畝2014年新建石斛種植園11500畝2014年新建茶園100000畝2014年新建紅豆杉種植園1000000畝2014年新建紫杉醇提取加工廠1個(gè)2015年新建石斛種植園10500畝2015年新建茶園100000畝2015年新建紅豆杉種植園1000000畝二、建設(shè)內(nèi)容與規(guī)模項(xiàng)目建設(shè)內(nèi)容包括：石斛種植園（30000畝），石斛培育、加工基地一個(gè)，改造老茶園2萬畝，新建茶園28萬畝，新建有機(jī)茶加工廠三座，新建紅豆杉種植園300萬畝，新建紫杉醇提取加工廠一個(gè)項(xiàng)目滿產(chǎn)年產(chǎn)廣南種鐵皮石斛干品60萬公斤；有機(jī)綠茶產(chǎn)品15000噸；紫杉醇12000公斤（含量≥%）項(xiàng)目安排當(dāng)?shù)鼐蜆I(yè)10000人。第六章 技術(shù)方案鐵皮石斛一、石斛組織培養(yǎng)栽培現(xiàn)狀為了解決市場供求矛盾問題，我國從80年代起，許多科研單位、大專院校紛紛組織攻關(guān)石斛的組織培養(yǎng)工作，已在浙江、安徽、上海、廣州、四川、重慶、云南、江蘇、某等獲得了成功，但是在大田種植成功經(jīng)驗(yàn)甚微，在上海、浙江等地有小面積鐵皮石斛的栽培，但成本高、周期長，因此推廣的難度大。某作為石斛的主產(chǎn)區(qū)，發(fā)展石斛的野生馴化種植，有著極大的區(qū)位優(yōu)勢。首先某地理位置處在石斛生長緯度的范圍，生態(tài)環(huán)境適宜，從而減少了許多種植基本設(shè)施，降低了種植成本。某洋平石斛科技研究所在有關(guān)科研單位的支持指導(dǎo)下，經(jīng)過幾年的反復(fù)實(shí)驗(yàn)，攻克了難著并掌握了石斛所需的人工生長環(huán)境，解決了組織培養(yǎng)種苗，莖段繁殖高新種植的技術(shù)。并在大田小試、中試均獲成功，而有批量商品問世。在2004年12月現(xiàn)場觀模會(huì)上與會(huì)的藥用植物栽培專家、教授及某石斛專家一致認(rèn)為，該所石斛的種植、組織培養(yǎng)等技術(shù)均領(lǐng)先全國水平。因此，某發(fā)展大面積石斛種植條件已基本成熟。二、鐵皮石斛良種繁育技術(shù)方案二．1．實(shí)驗(yàn)室一般操作規(guī)程（一）洗滌室保持室內(nèi)有充分的光照，通風(fēng)。保持洗滌室內(nèi)的整潔衛(wèi)生。要經(jīng)常打掃衛(wèi)生，清理水池保證水池的清潔。主要用具的清洗（1）洗刷培養(yǎng)瓶。先將培養(yǎng)瓶培養(yǎng)瓶放在清水浸泡一段時(shí)間，用毛刷清洗內(nèi)部。再泡入洗衣粉水中，再用毛刷刷洗。然后用清水沖洗3～5遍。洗好的瓶子應(yīng)透亮，內(nèi)外水膜均一，不掛水珠。（2）把瓶子倒放在塑料筐內(nèi)，放在通風(fēng)處晾干。使用過的器皿要及時(shí)清洗干凈。然后分類放置。（二）配劑室保持室內(nèi)有充分的光照，配備冷暖空調(diào)。進(jìn)入配劑室必須穿好工作服，換上專用鞋。保持配劑室內(nèi)的整潔衛(wèi)生。要經(jīng)常打掃衛(wèi)生，整理臺(tái)面，嚴(yán)禁臺(tái)面混亂。并保證容器的干凈。 為了方便操作，大量元素母液配制100倍，微量元素、有機(jī)物、鐵鹽母液配制50～100倍，植物生長物質(zhì)配制濃度1mg/ml。配制母液時(shí)（包括大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成份、植物激素等），必須稱量準(zhǔn)確，依次稱量倒入燒杯內(nèi)。并經(jīng)過復(fù)核無誤并進(jìn)行記錄后，即行配制，不得中途停止。除大量元素外，保存在冰箱中的冷藏柜中。電子天平必須在規(guī)定的溫度下使用。每次稱量后要對(duì)天平內(nèi)外進(jìn)行清潔。配制母液后，各種藥品按原位置擺整齊，要及時(shí)清洗所用器皿，放回原處。對(duì)配劑室的藥品、母液。要設(shè)立流水帳，如實(shí)填寫，以便經(jīng)常核對(duì)。要經(jīng)常檢查藥品以及母液的量是否足夠，有無變質(zhì)，是否出現(xiàn)沉淀或懸浮物，冰箱內(nèi)存放物質(zhì)有無結(jié)晶沉淀等異常情況。并記錄當(dāng)天的工作情況。保證藥品的存放安全。嚴(yán)格按照要求存放（如避光、低溫保存等）。 （三）培養(yǎng)基配制按生產(chǎn)單準(zhǔn)確的稱取瓊脂和白糖，倒入燒杯內(nèi)備用。依次、分別、準(zhǔn)確量取各種母液倒入燒杯內(nèi)。根據(jù)取量的多少選取適當(dāng)?shù)囊埔汗埽勘?；并?jīng)過復(fù)核無誤并進(jìn)行記錄后，即行配制，不得中途停止。每一種母液必須用專用的移液管取量。如用同一支移液管必需用蒸餾水沖洗內(nèi)外壁后再取另一母液。取量必須經(jīng)過復(fù)核。配制培養(yǎng)基后，各種母液按原位置擺整齊，要及時(shí)清洗所用器皿，放回原處。向鍋內(nèi)加入三分之二所配培養(yǎng)基升數(shù)的水，加熱至80℃。 分別倒入瓊脂和白糖，不停攪拌使之完全溶化。依次加入大量元素母液、微量元素母液、鐵鹽、有機(jī)成份、激素。邊倒邊攪拌，并用水沖洗盛母液的容器兩遍，一起倒入鍋內(nèi)。 定容至所配升數(shù)的110%。并用HCl或NaOH調(diào)整PH值 。趁熱分裝。依據(jù)增殖和生根所需不同的量，向培養(yǎng)瓶內(nèi)倒入一定量的培養(yǎng)基。然后蓋上瓶蓋。 分裝后應(yīng)在8小時(shí)內(nèi)滅菌完畢，所以配培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)考慮滅菌能力。（四）滅菌檢查高壓鍋水量，加水要達(dá)到水位計(jì)上的標(biāo)志線。把培養(yǎng)基裝入高壓鍋。總體積不應(yīng)超過滅菌室容積的80%。關(guān)閉好室門，確認(rèn)放汽閥關(guān)緊，疏水閥打開。接通電源。打開放氣閥,排除冷空氣(此步很重要)反復(fù)兩次至完全把冷空氣排除。此時(shí)滅菌室壓力表上對(duì)應(yīng)溫度應(yīng)與溫度表的溫度相同或＜1℃。否則再次排氣。排除冷空氣后,關(guān)閉放氣閥，、溫度125℃～126℃時(shí)，開始計(jì)算滅菌時(shí)間（20分鐘），但要注意保持穩(wěn)定壓力和溫度。滅菌結(jié)束后，關(guān)閉進(jìn)氣閥，切斷電源。打開放氣閥(注意要逐漸放氣)待滅菌室的為零，溫度下降到90℃以下時(shí)。打開熱壓滅菌鍋蓋，把培養(yǎng)基取出，送到培養(yǎng)基儲(chǔ)藏間或接種室緩沖間。滅菌過程中如果出現(xiàn)斷電等原因?qū)е聹囟鹊陀跍缇鷾囟葧r(shí)，應(yīng)從溫度再次達(dá)到滅菌溫度時(shí)重新開始計(jì)時(shí)。每次滅菌必須看鐘，注意各個(gè)滅菌鍋通電后至加熱爐壓力上升到要求的壓力和溫度的時(shí)間，如有異常，關(guān)電并報(bào)告管理人員。遇任何異常，切斷電源并報(bào)告。（五）接種室開工前準(zhǔn)備：（1）進(jìn)入前，將手洗干凈至肘彎，在緩沖間穿上工作服，戴好帽子、口罩。 （2）開啟超凈工作臺(tái)（包括紫外線燈），15分鐘后關(guān)閉紫外線燈，用75%的酒精消毒整個(gè)超凈工作臺(tái)空間（臺(tái)面、隔板等），再用酒精紗布擦手至肘彎，然后擦接種工具、工具架和臺(tái)面。最后開啟消毒器（或酒精燈）。（3）打開接種盤放置臺(tái)面?zhèn)溆?，注意不要用手接觸到接種盤的邊緣和盤面。當(dāng)消毒器的溫度上升至285℃時(shí)，把接種工具插入消毒器，60秒后取出放置工具架上備用。（4）母苗準(zhǔn)備：在超凈工作臺(tái)外用酒精擦拭母苗瓶，尤其是瓶蓋接口部份（5）培養(yǎng)基準(zhǔn)備：檢查所用的培養(yǎng)基類型是否正確，然后放置一部分在工作臺(tái)上。接種（1）母苗的取出。用酒精火焰燎一圈瓶蓋接口部份，再打開瓶蓋，取出母苗。取母苗時(shí)，母苗、鑷子和手絕對(duì)不能接觸瓶口。（2）切割 按照各品種、階段的工藝要求進(jìn)行操作。（3）接種 擰開瓶蓋，瓶蓋向上放于玻璃瓶上，玻璃瓶要放在工作臺(tái)右前方。接好苗后，旋好瓶蓋，鑷子和手絕對(duì)不能接觸瓶口。（4）重復(fù)以上工作，直至完成當(dāng)班工作收尾工作（1）切斷工作臺(tái)、消毒器電源，清理臺(tái)面；用記號(hào)筆在已接種的組培瓶的瓶壁上記錄接種日期和批號(hào)、品種，然后送至培養(yǎng)室。所用空母苗瓶拿到洗滌室；其它雜物倒入垃圾桶，并馬上提離接種室，及時(shí)倒掉垃圾、清潔消毒備用。（2）每天進(jìn)行一次清潔衛(wèi)生檢查。室內(nèi)不得有灰塵、昆蟲以及昆蟲尸體等。如有發(fā)現(xiàn)，要隨時(shí)進(jìn)行清潔。接種室專用垃圾桶要在清潔干凈的狀態(tài)下，才能拿進(jìn)接種室。（3）在記錄部上記錄好當(dāng)班接種的品種和數(shù)量注意事項(xiàng)（1）。（2）每15天對(duì)空調(diào)濾網(wǎng)進(jìn)行一次清洗，對(duì)墻體、以及室內(nèi)的物品進(jìn)行擦拭；并熏蒸消毒。60天對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行一次徹底清潔。（3）接種室內(nèi)除了接種室需要使用的東西，其他任何物品都不允許在接種室內(nèi)出現(xiàn)。臨時(shí)使用物品在使用結(jié)束時(shí)，馬上拿出接種室。（六）培養(yǎng)室進(jìn)入培養(yǎng)室必須洗手、穿好工作服，換上專用鞋。除工作人員外，其他任何人員進(jìn)入培養(yǎng)室必須經(jīng)過負(fù)責(zé)人同意。每天上、下午各觀察兩次培養(yǎng)室內(nèi)溫濕度計(jì)的溫度、濕度，并作好記錄。使溫度、相對(duì)濕度達(dá)到規(guī)定要求。如溫度、濕度按照要求有偏差，要利用空調(diào)機(jī)進(jìn)行調(diào)整。注意觀察培養(yǎng)室的燈光、空調(diào)等電器設(shè)備使用情況。如發(fā)現(xiàn)異常，要及時(shí)做好記錄，并通知有關(guān)人員進(jìn)行修理。每10天檢查清理污染苗一次，把污染苗拿出培養(yǎng)室，并記錄品種、批號(hào)、數(shù)量。每3天進(jìn)行一次清潔衛(wèi)生檢查。室內(nèi)不得有灰塵、動(dòng)物以及昆蟲尸體等。如有發(fā)現(xiàn)，要隨時(shí)進(jìn)行清潔。每7～10天進(jìn)行一次熏蒸消毒。每14天清洗一次空調(diào)濾網(wǎng)。每28天對(duì)室內(nèi)的鐵架、地面等進(jìn)行一次擦拭。每天對(duì)進(jìn)出培養(yǎng)室的瓶苗進(jìn)行登記，并綜合成旬報(bào)。培養(yǎng)室內(nèi)除了培養(yǎng)室需要使用的東西，其他任何物品都不允許在培養(yǎng)室內(nèi)出現(xiàn)。臨時(shí)使用物品在使用結(jié)束時(shí)，馬上拿出培養(yǎng)室。二．2．育苗操作規(guī)程流程：外植體集采 外植體接種 繼代培養(yǎng) 分化培養(yǎng) 生根培養(yǎng) 出瓶 大田移栽 循環(huán)繼代（一）外植體（種源）采集：選用飽滿的果實(shí)，忌用畸形或開裂的果實(shí)。必須是品種來源確切的野生或人工栽培的石斛種子。在每年的10～12月，將接近成熟的蒴果連莖一起剪下。種子可以馬上使用，也可以將種子用柔軟、吸水的紙包好放在塑料袋內(nèi)密封。放置5～10℃環(huán)境中保存。種子保存時(shí)間不宜超過6個(gè)月，否則容易引起開裂。如有蒴果開裂現(xiàn)象不可使用。（二）外植體接種種子（蒴果）消毒取果實(shí)用洗衣粉洗干凈，用自來水沖洗15分鐘→%氯化汞溶液浸泡10分鐘→無菌水沖洗4～5次→75%酒精漂洗15秒→放置在酒精燈火焰上迅速轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼約30秒→冷卻后取出蒴果內(nèi)種子進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)光照光周期用11～12小時(shí)，光照強(qiáng)度600～800LX 溫度培養(yǎng)室內(nèi)保持溫度25177。2℃。3．濕度要求室內(nèi)保持60%～70%的相對(duì)濕度。誘導(dǎo)培養(yǎng)基：用MS1作為培養(yǎng)基。每升加蔗糖30 g， g（強(qiáng)度1000g/cm2）?！＃ㄈ├^代培養(yǎng)在無菌條件下，用無菌的鑷子從培養(yǎng)瓶中取出原球莖，將它們放在無菌的器皿中。用鑷子把成團(tuán)的原球莖組織分