【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 當(dāng)糖基與苷元上的羥基數(shù)目相同時(shí)，苷元上的羥基 不能形成分子內(nèi)氫鍵的比能形成分子內(nèi)氫鍵的水溶性大。 如毛花洋地黃苷乙和毛花洋地黃苷丙，都是 四糖苷 ，整個(gè)分子中有 8個(gè)羥基，四個(gè)糖的種類也相同，苷元上羥基的數(shù)目也相同，僅位置不同，前者是 C14, C16二羥基，其中 C16羥基能和 C17內(nèi)酯環(huán)的羰基形成分子內(nèi)氫鍵，后者是C12,C14 –二羥基，不能形成分子內(nèi)氫鍵，所以毛花洋地黃苷丙在水中的溶解度 （ 1:18500） 比毛花洋地黃苷乙大。在氯仿中的溶解度，毛花洋地黃苷丙 （ 1:1750） 小于毛花洋地黃苷乙（ 1:550） 。 但糖基和苷元上羥基數(shù)目的多少對(duì)溶解性也有一定的影響。如 烏本苷 是一個(gè)單糖苷，卻有 8個(gè)羥基，水溶性很大（ 1:75），難溶于氯仿。 烏本苷 OOC H3O HH OH OH OO HO鼠 李 糖3． 脫水反應(yīng) 強(qiáng)心苷混合強(qiáng)酸（ 3%5%HCl）加熱水解時(shí)，苷元往往發(fā)生脫水反應(yīng)。 （ 1） C14OH最易發(fā)生脫水反應(yīng)生成縮水苷元。 （ 2） 同時(shí)存在 C14OH和 C16OH，也易脫水，得到二縮水苷元。 （ 3）如將 C3OH氧化為酮基，則更使 C5叔羥基活化，在溫?zé)釛l件下即可脫水而形成烯酮。同樣， C16被氧化為酮基，也能促使C14叔羥基脫水而形成烯酮。 （ 4） 若 C4位有雙鍵，可促使 C3OH與 C4H脫水，生成共軛雙鍵。 4．水解反應(yīng) 水解反應(yīng)是研究強(qiáng)心苷組成的常用方法，分化學(xué)方法和生物方法兩大類，化學(xué)方法主要有酸水解、堿水解和乙酰解；生物方法主要有酶水解。糖部分不同，其水解產(chǎn)物難易及產(chǎn)物均不同。 （二）苷鍵的水解 A. 溫和酸水解： 用稀酸（ ) 的鹽酸 或硫酸在含水醇中經(jīng)短時(shí)間（半小時(shí)至 數(shù)小時(shí)）加熱回流，可使 Ⅰ 型強(qiáng)心苷水 解成苷元和糖。 ?主要水解 苷元和 α 去氧糖之間的苷鍵或 α 去氧糖與 α 去氧糖之間的糖鍵。 ?而 α 去氧糖與葡萄糖之間的糖鍵不易切斷。 ?對(duì)苷元影響較小，不會(huì)引起脫水反應(yīng)。 ?但不適于 16位有甲酰基的洋地黃強(qiáng)心苷類， 在此種條件下， 16位甲酰基水解為羥基， 得不到原生苷元。 B. 強(qiáng)烈酸水解 用較濃酸（ 3%5%）長(zhǎng)時(shí)間加熱回流或同時(shí)加壓，可水解 Ⅱ 型和 Ⅲ 型強(qiáng)心苷，得到定量的葡萄糖。 可水解 α 羥基糖 。 因?yàn)?α 位的羥基阻礙了苷原子的質(zhì)子化，使水解較困難。 但此法常引起苷元失去 1分子或數(shù)分子水 ,形成脫水苷元，即次生苷。 （ Mannichhe 和 Siewert法） Mannich 和 Siewert將烏本苷置于含 1%氯化氫的丙酮中， 20℃ 放置兩周并時(shí)時(shí)振搖，得到原生的烏本苷元單丙酮化合物和氯代 L鼠李糖丙酮化合物 ,再用稀酸水解烏本苷元單丙酮化合物而得到烏本苷元。 此法適于對(duì) 鈴藍(lán)毒苷 及 多數(shù) Ⅱ 型苷 進(jìn)行水解，可得到 原生苷元 。多用于 單糖苷 。某些 Ⅱ 型苷如黃甲次苷乙用此法得不到原生苷而是縮水苷元。 含強(qiáng)心苷的植物中， 有水解葡萄糖的酶，無(wú)水解 α 去氧糖的酶 ，所以能水解除去分子中的葡萄糖而保留 α 去氧糖。 蝸牛酶 （一種混合酶，蝸牛腸管消化液經(jīng)處理而得）幾乎能水解所有的苷鍵，能將強(qiáng)心苷分子的糖逐步水解，直至獲得苷元，常用來(lái)研究強(qiáng)心苷的結(jié)構(gòu)。 紫花洋地黃苷 A 紫花苷酶 洋地黃毒苷 +D葡萄糖 紫花洋地黃苷 B 紫花苷酶 羥基洋地黃毒苷 +D葡萄糖 3. 堿水解法 強(qiáng)心苷的苷鍵為縮醛結(jié)構(gòu)，可被酸或酶水解，而不被堿水解。堿試劑主要 使分子中的酰基水解、內(nèi)酯環(huán)裂開(kāi)、△ 20（ 22）轉(zhuǎn)位及苷元異構(gòu)化 等。 （ 1）?；乃? 在強(qiáng)心苷的苷元或糖基上常有?；嬖?，一般可用堿試劑處理使酯鍵水解脫去?；??！?NaHCO3,KHCO3使 α 去氧糖上的?；?，而 α 羥基糖及苷元上的酰基多不被水解； ▲ Ca(OH)2,Ba(OH)2使 α 去氧糖、 α 羥基糖及苷元上的?；猓? ▲ NaOH堿性太強(qiáng)，不但使所有?；猓€使內(nèi)酯環(huán)破裂，故很少使用。 （ 2）內(nèi)酯環(huán)的水解 NaOH或 KOH的水溶液使內(nèi)酯環(huán)開(kāi)裂，酸化后又閉環(huán)。但在強(qiáng)心苷的醇溶液中加 NaOH或 KOH內(nèi)酯環(huán)開(kāi)裂，酸化后不能閉環(huán)。 甲型強(qiáng)心苷在醇性 KOH溶液中，通過(guò)內(nèi)酯環(huán)的雙鍵轉(zhuǎn)移和質(zhì)子轉(zhuǎn)移形成 C22活性亞甲基， C14羥基質(zhì)子對(duì) C20的親電性加成作用而生成內(nèi)酯型異構(gòu)化苷，再經(jīng)皂化作用開(kāi)環(huán)而生成開(kāi)鏈型異構(gòu)化苷。 OOOHOOOHOOOHK O HE t O H2 02 12 21 4OC O O HC H O HO異 構(gòu) 化 物 （ A ） 異 構(gòu) 化 物 （ B ）乙型強(qiáng)心苷在醇性 KOH溶液中，不發(fā)生雙鍵轉(zhuǎn)移，但內(nèi)酯環(huán)開(kāi)裂生成酯，再脫水形成開(kāi)鏈型異構(gòu)化苷。 OOH O HK O H2 02 12 21 4C O O C H 3C HO異 構(gòu) 化 物C H 3 O HC H O HC O O C H 3 H 2 O五．顏色反應(yīng) 強(qiáng)心苷顏色反應(yīng)很多，根據(jù)顏色反應(yīng)發(fā)生在分子的不同部位可分為 三類： （一）作用于甾體母核的反應(yīng)： （二）作用于 α,β 不飽和內(nèi)酯環(huán)的反應(yīng)： 甲型強(qiáng)心苷 在堿性醇溶液中，發(fā)生雙鍵轉(zhuǎn)移，生成活性亞甲基，故可與活性亞甲基試劑作用而顯色。 乙型強(qiáng)心苷 無(wú) 此類反應(yīng)。 （亞硝酰鐵氰化鈉試劑） ： 取樣品 12mg，溶于 23滴吡啶中，加一滴3%亞硝酰鐵氰化鈉溶液和一滴 2mol/L NaOH溶液，樣品液呈 深紅色 并漸漸褪去。 （間二硝基苯試劑） ： 取樣品約 1mg，以少量的 50%乙醇溶解后加入%間二硝基苯乙醇溶液，搖勻后再加入%NaOH溶液，呈 紫紅色 。 （ 3,5二硝基苯甲酸試劑） 取樣品的甲醇或乙醇溶液于試管中，加入 3,5二硝基苯甲酸試劑 34滴，產(chǎn)生 紅或紫紅色 。 （堿性苦味酸試劑） 取樣品的甲醇或乙醇液于試管中，加入堿性苦味酸試劑數(shù)滴，呈現(xiàn) 橙或橙紅色 。有時(shí)需放置 15min后顯色。 （三）作用于 α 去氧糖的反應(yīng) 1. Kellerkiliani(KK)反應(yīng) 此反應(yīng)是 α 去氧糖 的 特征反應(yīng) ，對(duì)游離的 α 去氧糖或或在反應(yīng)條件下能水解出 α 去氧糖的強(qiáng)心苷都可顯色。取樣品1mg溶于 5ml冰乙酸中，加一滴 20%三氯化鐵水溶液，傾斜試管，沿試管壁加入 5ml濃硫酸，若有 α 去氧糖存在，乙酸層漸呈 藍(lán)或藍(lán)綠色 。但若不顯色，不能說(shuō)明無(wú) α 去氧糖。 : 取樣品加入噸氫醇試劑，置 沸水浴中 3min呈 紅色 。 對(duì)硝基苯胺反應(yīng)： 樣品反應(yīng)后呈 深 黃色 斑點(diǎn)，紫外燈下為棕色背底上現(xiàn) 黃色 熒光 斑點(diǎn)。 硝基苯肼反應(yīng)： 樣品反應(yīng)后呈 紅色或紫 紅色 。對(duì) α 去氧糖和葡萄糖結(jié)合的， KK 反應(yīng)陰性的也可呈陽(yáng)性反應(yīng)。 二甲氨基苯甲醛反應(yīng)： 樣品反應(yīng)后呈 灰 紅色 斑點(diǎn)。 五、強(qiáng)心苷的提取分離 強(qiáng)心苷含量很低，多與 糖類、皂苷、色素、鞣質(zhì) 等共存，這些成分的存在可影響強(qiáng)心苷在溶劑中的溶解度。同時(shí)，強(qiáng)心苷的原生苷和次生苷共存，且很多結(jié)構(gòu)相似的苷同存，故提取較難。 因酸堿可使強(qiáng)心苷發(fā)生水解、脫水和異構(gòu)化，故提取分離時(shí)應(yīng)注意 控制酸堿性 。 ?一、提取 ?原生苷 :抑制酶的活性 (冷凍干燥、快速提取、快速干燥 )MeOH、 70%EtOH提取。 ?次生苷 :利用酶的活性 ,EtOH、 EtOAc提取。 二、純化 1. 用乙醚、氯仿脫脂； 2. 用鉛鹽法除去水溶性雜質(zhì)； 3. 吸附法 三、分離