dna的結(jié)構(gòu)與特點(diǎn)ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-28 18:15 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 下列因素可導(dǎo)致 DNA變性 ： 變性劑：把能使 DNA發(fā)生變性的 化學(xué)試劑 叫變性劑。 變性原理：變性是 熱處理 或 變性劑 處理的條件下 ,直接或間接 的打斷 DNA中的 H鍵，這時(shí)雙鏈DNA就會(huì)逐漸變成單鏈。 堿變性：把由堿引起的變性叫 堿變性 ； 熱變性：由熱引起的變性叫 熱變性 ，屬于物理變性。 熱變性 是常用的 DNA變性方法之一，因?yàn)樗椒ê?jiǎn)單、容易控制，不改變 DNA溶液的化學(xué)成分，更重要的是它能有效的使 DNA發(fā)生變性。 DNA變性后 DNA物理 、 化學(xué) 性質(zhì)發(fā)生如下變化： （ 1） 流體力學(xué)的性質(zhì)發(fā)生改變：粘度下降 ， 而沉降 速度增加； （ 2） DNA的浮力密度增高； （ 3） 生物功能喪失或改變； （ 4） DNA在 260nm處 吸收值增加 。 增色效應(yīng) （ hyperchromic effect） :由于 DNA變性而引起的 260nm紫外光的光吸收值增加的現(xiàn)象 。 ? 雙鏈 DNA的 A260=（ 濃度為 50μg/ml 時(shí) ， 對(duì)波長(zhǎng) 260nm紫外線的吸收能力 ） ； ? 單鏈 DNA的 A260=； ? 游離堿基 或核苷酸的 A260=。 可見，雙鏈 DNA變?yōu)?單鏈 DNA時(shí)，A260會(huì)逐漸增加。 不同狀態(tài)下 DNA的吸光值： 溶解曲線 與 Tm值 ： 溶解曲線：當(dāng)緩慢而均勻地 (目前可以做到 ℃ ／分 )增加 DNA溶液的溫度，記錄各個(gè)不同溫度下的數(shù)值，即可繪制成 DNA的溶解曲線 ，如圖所示。 返回 Tm 30 50 70 90 溫 度（ ℃ ） 溶 解 曲 線 A260吸光值 解鏈溫度 （ melting temperature, Tm） ：也叫熔點(diǎn) ， 是 A260增加到最大增值一半時(shí)的溫度 ，是變性溫度范圍的中點(diǎn) ， 用 Tm表示 。 ? 在生理?xiàng)l件下 ， 一般來(lái)講 ， 體內(nèi) DNA分子的 Tm值在 85－ 95 ℃ 之間 。 影響 Tm值的因素： ? 外部條件 : DNA的 濃度 和 正離子 的濃度。 DNA濃度低于 ，單價(jià)陽(yáng)離子增高 10倍，Tm增加 ℃ （為什么？） 。 除此之外，凡能影響 H鍵穩(wěn)定的試劑都能降低 Tm. ? 內(nèi)部條件 : GC含量： 當(dāng) GC的含量上升 1%，則 Tm上升 ℃ 馬默多蒂（ MarmurDoty）關(guān)系式： Tm = +(G +C)%， 或 GC%=（ ） 小結(jié)： Tm值的大小取決于 DNA的堿基組成和 變性條件 ： 1）特定的 DNA在特定的條件下所測(cè)得 Tm值是相對(duì)恒定的，但 相同的 DNA在 不同的條件 下或 不同的 DNA在 相同的條件 下， Tm值是不同的。 2） GC含量高 ， AT含量低的 DNA其 Tm值就高 ，反之亦然 。
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