疫比濁檢驗技術(shù)原理與進(jìn)展(編輯修改稿)
2025-05-27 02:46 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 影響抗原與抗體的理化性質(zhì)，例如 pH達(dá)到或接近抗原的等電點時，即使無相應(yīng)抗體存在，也會引起顆粒性抗原非特異性的凝集，造成假陽性反應(yīng)。 ? 溫度 ：在一定范圍內(nèi)，溫度升高可加速分子運動，抗原與抗體碰撞機會增多，使反應(yīng)加速。但若溫度高于 56℃ 時，可導(dǎo)致已結(jié)合的抗原抗體再解離，甚至變性或破壞；在 40℃ 時，結(jié)合速度慢，但結(jié)合牢固，更易于觀察。常用的抗原抗體反應(yīng)溫度為 37℃ 。每種試驗都有其獨特的最適反應(yīng)溫度，例如冷凝集素在 4左右與紅細(xì)胞結(jié)合最好， 20℃ 以上反而解離。 ? 其它 ：適當(dāng)振蕩也可促進(jìn)抗原抗體分子的接觸，加速反應(yīng)。 免疫學(xué)檢測技術(shù) 凝集與沉淀 比濁 電位、微天平 放射性核素標(biāo)記 酶標(biāo)記、熒光標(biāo)記和膠體金標(biāo)記 化學(xué)發(fā)光物標(biāo)記或偶聯(lián)化學(xué)發(fā)光反應(yīng) 非標(biāo)記免疫檢測技術(shù) 標(biāo)記免疫檢測技術(shù) 二、免疫沉淀 凝集：細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒抗原，在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集，稱為凝集反應(yīng)（ agglutination）是最經(jīng)典的免疫學(xué)檢測技術(shù)。 二、免疫沉淀 ? 免疫沉淀反應(yīng) :(precipitation) 可溶性抗原與相應(yīng)抗體，在適宜條件下發(fā)生結(jié)合，出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。 免疫沉淀 液體內(nèi)沉淀反應(yīng) 凝膠內(nèi)沉淀反應(yīng) 免疫電泳技術(shù) 免疫濁度技術(shù) 絮狀沉淀試驗 環(huán)狀沉淀試驗 單向擴散試驗 雙向擴散試驗 試管法 平板法 免疫電泳 對流免疫電泳 火箭免疫電泳 免疫固定電泳 透射免疫比濁 turbidimetermeasure 散射免疫比濁 nephelomitermeasure 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 各管抗原倍比稀釋 加入抗血清 各管抗體量不變 振搖 混勻、 37℃ 孵育 沉淀量不同 試管內(nèi)絮狀沉淀試驗 輕搖 絮 狀 沉 示 意 圖 淀 Ag Ab Ag Ab Ag 凝膠內(nèi)沉淀 —— 試管法 單向瓊脂擴散試驗 凝膠內(nèi)沉淀試驗 ——平板法 標(biāo)準(zhǔn)品抗原濃度測定 不同病人抗原濃度測定 原理 將一定量的抗體混入瓊脂凝膠中，使待測抗原在凝膠中自由擴散，與相應(yīng)抗體結(jié)合形成沉淀環(huán)，沉淀環(huán)大小與抗原濃度呈正相關(guān)。 凝膠內(nèi)沉淀 —— 雙向瓊脂擴散原理示意圖 Ab Ag 模擬圖 染色瓊脂圖 三、免疫比濁技術(shù)原理 當(dāng) 可溶性抗原 與相應(yīng)抗體特異結(jié)合，二者 比例合適 時，在 特殊的緩沖液 中它們快速形成一定大小的抗原抗體復(fù)合物，使反應(yīng)液體出現(xiàn)濁度。利用現(xiàn)代光學(xué)測量儀器對濁度進(jìn)行測定從而檢測抗原含量 。 檢測器 光源 透鏡 濾光片 平光線 散 射 透射光 λ 光波 比濁測定法原理示意圖 d 當(dāng)復(fù)合物大于入射光波的 1/20時，形成不對稱前向散射， 在 90o以前的角度測量散射光皆取得最佳效果，散射光 的量代表復(fù)合物的量 當(dāng)復(fù)合物小于入射波長時呈全透射， 透射與散射相當(dāng) 三、免疫比濁技術(shù)原理 免疫比濁技術(shù)分類： 按光路 透射免疫比濁 散射免疫比濁 按測定時間 終點比濁 速率比濁 按增敏劑 無增敏 PEG增敏 膠乳增敏 透射比濁法和 散射比濁法光路 檢測器 A 檢測器 B IC I0 Iθ I θ
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