【文章內(nèi)容簡介】 N=（ tR/σ） 2=16(tR)2/W =(tR/W1/2)2 W：峰寬 ； σ：曲線拐點(diǎn)處峰寬的一半，即峰高 。 N為常量時， W隨 tR成正比例變化。 ? 在一張多組分色譜圖上，如果各組份含量相當(dāng)，則后洗脫的峰比前面的峰要逐漸加寬，峰高則逐漸降低。 ? 用半峰寬計(jì)算理論塔板數(shù)比用峰寬計(jì)算更為方便和常用，因?yàn)榘敕鍖捀菀诇?zhǔn)確測定，尤其是對稍有拖尾的峰。 ? N與柱長成正比，柱越長， N越大。用 N表示柱效時應(yīng)注明柱長，如果未注明，則表示柱長為 1米時的理論塔板數(shù)。（一般 HPLC柱的 N在 1000以上。） 檢測器 1）紫外 — 可見光檢測器 :基線噪聲大 ,靈敏度低 , 氘燈壽命 :10003000h 鎢燈壽命 :2022h 一般至少使用 6個月以上，可能接近壽命期限。 b. 流通池 基線有波動，或是基線變高、噪音明顯 ? 流通池內(nèi)有氣泡：用脫氣甲醇，不同流量沖洗。 ? 池堵塞（入口、出口、池內(nèi)）： 用可溶堵塞物的溶劑沖洗 （緩沖鹽用 水沖洗） ? 池污染：異丙醇、二氯甲烷、 6mol/L HNO3沖洗 . C 非線性響應(yīng) 超出線性范圍 :樣品量太大 。 檢測器的衰減超出了其線性動力學(xué)范圍 。 流動相的紫外吸收比較強(qiáng) . 2)溫度影響 環(huán)境溫度變化引起基線漂移。 流動相溫度變化引起折射率改變，紫外光傳導(dǎo)變化。 柱溫變化引起基線漂移。 ? 3)信號線故障 ? 記錄儀和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)信號線插接不緊 ,接觸不良，信號很弱，出現(xiàn)不需要的噪音 ,此時按說明書檢查線路連接。 ? 地線對儀器很重要 , 儀器外殼和信號線的接地很嚴(yán)格，接地不良會出現(xiàn)較大的基線噪聲，接錯線會造成短路，燒毀儀器。 ? 4)波長問題 ? 正確選擇波長 :既照顧到靈敏度 ,又考慮到穩(wěn)定性。 ? HPLC中，波長選擇是依據(jù)待測物質(zhì)最大吸收波長來決定的。 ? 通常，高效液相色譜檢測器為紫外檢測器，所以 HPLC中波長的選擇和紫外波長選擇一致，均為選擇最大吸收波長，這樣能保證檢測的靈敏度和響應(yīng)值最高。 3 與液相色譜儀配套使用的設(shè)備 設(shè)備所在儀器室的輔助設(shè)施 與液相色譜配套的前處理設(shè)備 設(shè)備所在儀器室的輔助設(shè)施 ? 空調(diào)：控制溫度 ? 排氣罩：排除有機(jī)溶液 ? 溫濕度計(jì)：適時記錄溫度、濕度 ? 避光的窗簾：避光 ? 雙層窗戶：防塵 ? 大功率的電源線： 10A、 16A、 20A。 臺面的承重、距離墻面有 5070cm的距離、儀器臺面的寬度：邊臺一般 80cm、中央臺 150cm 與液相色譜配套的前處理設(shè)備 （ 提取 ）（ 凈化 ） 濃縮 ? 水 浴鍋 ? 分液漏斗振蕩器 ? 恒溫水浴振蕩器 ? 振蕩器 ? 超聲波振蕩器 ? 渦旋混合器 ? 固相萃取儀 ? 真空泵（無油隔膜泵） ? 溶劑過濾裝置 ? 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ? 氮吹儀 ? 平行蒸發(fā)儀 ? 離心機(jī)（配置不同的轉(zhuǎn)子或適配器） ? 各種規(guī)格的移液器 ? 瓶口分配器 ? 冷卻循環(huán)水裝置 應(yīng)急設(shè)施 ? 延時電源：應(yīng)對突發(fā)事件，如突然停電 ? EPS應(yīng)急電源 :提供一種符合用戶要求的具有獨(dú)立回路的應(yīng)急供電系統(tǒng)，該系統(tǒng)能夠在應(yīng)急狀態(tài)下提供緊急供電，用來解決只有一路市電、缺少第二路電源，或代替發(fā)電機(jī)組構(gòu)成第二電源。 ? 規(guī)格范圍： 3KW—800KW ? 安裝形式：落地式（標(biāo)準(zhǔn)配電柜） ? 靜態(tài)、無噪音、無排煙、無公害、無火災(zāi)隱患；自動切換?？蓪?shí)現(xiàn)無人值守；節(jié)能，非應(yīng)急供電時，基本不耗電；性能穩(wěn)定，安全可靠，使用壽命長；與發(fā)電機(jī)組相比縮合造價低，性能價格比好。 液相色譜實(shí)驗(yàn)室的管理 ? 日常管理：包括衛(wèi)生、開關(guān)門窗、水、電、氣、空調(diào)、溫濕度記錄等等。 ? 設(shè)備的使用記錄：使用前后儀器的狀態(tài)是否正常、檢測樣品名稱或編號、檢測參數(shù)、檢測人、溫濕度等；維護(hù)保養(yǎng)也要記錄、維修也要記錄。 ? H:\檢驗(yàn)室管理檢查表 .doc 儀器室管理內(nèi)容 ? 管理人員上午上班查看整理內(nèi)容 ? 地面：整潔；物品按規(guī)定區(qū)域存放； ? 操作臺面：臺面干凈、物品擺放整齊； ? 試劑架：干凈、試劑擺放整齊； ? 櫥子內(nèi)外：物品整齊、內(nèi)外干凈； ? 抽屜內(nèi)外：抽屜內(nèi)物品整齊，抽屜邊框干凈； ? 通風(fēng)櫥：邊框玻璃干凈，臺面整潔，物品擺放整齊； ? 空調(diào)：干凈整潔； ? 試劑：過期試劑及時清理，試劑瓶干凈，標(biāo)簽粘貼一致規(guī)范； ? 窗臺窗框：擦拭干凈； ? 門：門里、門外、門框清潔干凈； ? 儀器：表面整潔、按區(qū)域存放； ? 儀器使用記錄：固定區(qū)域存放，檢查有無漏簽，干凈整齊； ? 溫度濕度：早 8： 30－ 9： 00記錄室內(nèi)溫度和濕度，及時補(bǔ)充溫濕度計(jì)所需的水； ? 其他：滅火器、線路等保持清潔、順暢。 ? 管理人員在下午下班時逐項(xiàng)檢查并記錄的項(xiàng)目： ? 水：檢查回流水、水管是否關(guān)閉、滴漏； ? 電：檢查照明、儀器等的電源是否關(guān)閉，如有儀器正在使用要注明； ? 氣：檢查鋼瓶、氣路是否關(guān)閉，如有儀器正在使用要注明； ? 窗：應(yīng)關(guān)閉，如有必要開窗，注明原因； ? 門：關(guān)閉。 ? 填表方式： ? 符合要求的打“ √”； ? 不符合要求的打“ ”； ? “水、電、氣、窗”等正在使用或需要打開的注明原因，或填上在用設(shè)備編號。 ? 溫度濕度：早 8： 30－ 9： 00記錄室內(nèi)溫度和濕度，及時補(bǔ)充溫濕度計(jì)所需的水； ? H:\檢驗(yàn)室管理檢查表 .doc 液相色譜儀的管理 ? 專人管理、有限人員的使用 ? 定期檢定 ? 定期維護(hù) ? 定期核查 ? 新上崗人員一定培訓(xùn)后經(jīng)考核合格才能上崗 ? 對新上崗人員做好監(jiān)督 液相色譜儀的管理 ? 起草操作規(guī)程：開機(jī)前準(zhǔn)備工作，如何開機(jī)，各個模塊如何操作，如何編輯檢測方法、如何檢測樣品、圖譜如何讓處理、如何讓關(guān)機(jī)、關(guān)機(jī)后的清理工作等等。 ? 起草維護(hù)保養(yǎng)規(guī)程：多長時間、對什么部件、如何保養(yǎng)。 ? 核查規(guī)程：核查方法？核查結(jié)果分析判定。 ?4 液相色譜在檢測工作中的應(yīng)用 食品分析主要內(nèi)容 ? 食品添加劑 ? 殘留 ? 天然化合物 ? 酸類化合物 ? 抗生素 ? 氨基酸 ? 抗氧化劑 ? 霉菌毒素 ? 糖 ? 防腐劑 ? 農(nóng)藥 ? 酯類 ? 人工甜味劑 ? 環(huán)境污染物 ? 維生素 ? 著色劑 ? 無機(jī)離子 ? 香料化合物 舉例 1農(nóng)獸藥殘留檢測 ? 雞肉中 十種 磺胺類藥物殘留的高效液相色譜紫外檢測（ HPLCUV）分析方法。 ? 采用 C18柱，甲醇 — 水 /甲醇 — 甲酸為流動相梯度洗脫，雞肉樣品經(jīng)過甲醇提取，正己烷脫脂， SLW固相萃取柱凈化，用 HPLC法測定雞肉中十種磺胺類藥物的含量。 ? 結(jié)果表明，當(dāng)雞肉樣品添加十種磺胺類藥物為 ～ mg/kg時，方法回收率為 %～ %，變異系數(shù)為 %～ %， ? 十種磺胺類藥物最低檢出濃度為 mg/g。 食品添加劑檢測 ? 采用 ODSC18柱，甲醇 — 乙酸銨作為流動相，針對不同類型樣品，采用不同前處理方法，樣品處理液最后于液相色譜儀進(jìn)行分析定量。 ? 結(jié)果 :乙?；前匪徕?、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸、阿斯巴甜 在 0～ mg/ml濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好， RSD為%～ %； ? 乙?；前匪徕浖訕?biāo)回收率為 %～ %、苯甲酸為 %～%、山梨酸為 %～ %、糖精鈉為 %～ %、脫氫乙酸為 %～ %、阿斯巴甜為 %～ %。 霉菌毒素檢測 ? 采用高效液相色譜法，使用 Agilent1100色譜柱；在柱溫 30℃ ；乙腈 — 甲醇 — 水（ 1∶ 1∶ 2）為流動相；流速為 ；熒光檢測器；測出 黃曲霉素 在 花生 中的含量，方法重復(fù)性的 RSD為 %，平均回收率為 %。 ? 采用甲醇水溶液提取 糧食 中的黃曲霉毒素，提取液經(jīng)過過濾、稀釋后，用免疫親和柱凈化，以甲醇為流動相洗脫，用高效液相色譜法直接測定。方法重復(fù)性的 RSD為 %，平均回收率為 90%～ 105%。 ? 食品安全分析應(yīng)用的特點(diǎn) ? .樣品種類繁多、基質(zhì)復(fù)雜 ? .極性高或熱不穩(wěn)定的品種越來越多 ? .法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)、待測物種類與數(shù)量數(shù)量迅速增加 ? .檢測標(biāo)準(zhǔn)日益提高 ? LC及 LC/MS已經(jīng)成為安全食品領(lǐng) ? 域極其重要而有效的分析技術(shù)！ 5 檢測方法前處理技術(shù) 樣品前處理的重要性 ? 最低檢測限量的限制 ? 儀器 (LC /LCMS等 )的對樣品潔凈度的高要求 ? 樣品基質(zhì)中的內(nèi)源性物質(zhì)（如脂肪、蛋白、色素、鹽份等等）對目標(biāo)物的分離與檢測的干擾 ? 樣品的增多，要求前處理方法簡單快速 分析過程中各步驟所花費(fèi)的時間采樣6%分析6%數(shù)據(jù)處理27%樣品處理61%分析過程中誤差產(chǎn)生