植物細胞組織培養(yǎng)技術(編輯修改稿)
2024-11-30 11:38 本頁面
【文章內容簡介】 、有機 物 、生長調節(jié)劑等 ， 個別生長調節(jié)劑要隨配隨用。 蒸 餾 水、 pH試紙 蔗 糖、瓊 脂 等 1 mol/L NaOH 溶液、 1 mol/L HCl溶液 。 二 、方法和步驟 1 量取所配培養(yǎng)基總 體 積的 2/3體 積 的蒸 餾 水 ， 如要配 l升培養(yǎng)基 , 先量取約700 ml體 積的水。 2 根據培養(yǎng)基配方 ， 用量筒量取所需要的各種元素的母液 。 物質 加入體積或重量 大量元素母液 (10 ) 100ml 微量元素母液 (1000 ) 1 ml 有機 物質母液 (1000 ) 1 ml 鐵鹽母液 (1000 ) 10 ml 蔗糖 30 g 瓊脂 8 g 6 吸取母液 時， 注意應先將幾種母液按順序 排 好 ， 不 要 弄錯以免使培養(yǎng)基中藥品成分發(fā)生改變 。在培養(yǎng)不同的外植體時，應加入不同的激素，如本實驗中培養(yǎng)康乃馨側芽或莖段時就加入 1ml的 1 mg/ml的 6BA；而另一個實驗胡蘿卜愈傷組織培養(yǎng)中應加入 2ml的 1 mg/ml的 2,4D。加入一種母液后應先攪拌均勻，避免因不均而使局部濃度過高而引起沉淀，瓊脂可于加入蔗糖調節(jié)完 pH值后再加入，此時應注意攪拌，以免瓊脂或蔗糖沉 淀于燒杯底而炭化。加熱至沸騰片斷，以使瓊脂充分溶解，檢查時可注意燒杯內溶液是否透明。 3 調節(jié)培養(yǎng) 基 的 pH值 ， 用 pH計或 pH試紙測定 培養(yǎng) 基 的 pH按照培養(yǎng)材料的要求分別用 1 mol/L NaOH溶液、 1 mol/L HCl溶液來調節(jié)所配制培養(yǎng)基的 pH值 ， 一般培養(yǎng) 基 的 pH值約為 ， 培養(yǎng)的材料不 同， 對培養(yǎng) 基 的 pH值要求也不同 。 4 分裝 將配制好的培養(yǎng)基分別裝在事先洗凈 的 三角瓶 ， 用 錫鉑 紙封口 ，注明標簽 ， 然后 和用牛皮紙或報紙包好的培養(yǎng)皿及用三角瓶裝好的蒸餾水一道進 行高壓滅 菌。 5 培養(yǎng)基的滅 菌 一般用 手提式 醫(yī)用高壓鍋來滅菌 （方法略），本實驗采用全自動高壓滅菌鍋。 6 培養(yǎng)基的保存 消毒過的培養(yǎng)基通常放在接種室或培養(yǎng)室中保存，一 般 應在消毒后的兩周內用完 ，最好不要超過一個月 。 三、注意事項 激素應在調節(jié) pH 之前加入，因為有些激素是用酸或堿溶解的，在調節(jié) pH好之后加入會改變 pH 值。 pH 過酸或過堿對培養(yǎng)基均是不利的，會導致過軟或過硬的結果，從而影響培養(yǎng)質量。 在本次實驗中將下次實驗所需的其它材料一同滅菌處理。 7 實驗三 康乃馨的離體 快 繁 一、 儀器 設備和試 劑 超凈工作臺 、 帶有吸水紙的成套的培養(yǎng)皿，無 菌水 培養(yǎng)基 N6+1 mg/L 6BA 剪刀、槍型鑷子 量筒 、 酒精燈、濾紙、蒸 餾 水、小刷子 95%乙醇、 70%酒精、 70%酒精棉球、 %升 汞 、甲 醛 、 高錳 酸
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