【文章內(nèi)容簡介】 、窗，最后把門鎖好，方可離開實(shí)驗(yàn)室。以上細(xì)則，希望大家自覺遵守，如有違反者，實(shí)驗(yàn)室有權(quán)停止實(shí)驗(yàn)，待整改好后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。27 / 27環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)管理?xiàng)l例1．崗位責(zé)任制原則：實(shí)驗(yàn)平臺的常用儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)平臺日常管理由實(shí)驗(yàn)室管理人員負(fù)責(zé)；分子生物學(xué)部分儀器由專人負(fù)責(zé)。2．規(guī)范化原則：各種儀器設(shè)備的使用必須按照該儀器使用說明規(guī)范化操作，以保證管理工作的連續(xù)性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重現(xiàn)性。3．記錄監(jiān)督原則：實(shí)驗(yàn)平臺管理的各方面均要求有及時、準(zhǔn)確的記錄，以保證實(shí)驗(yàn)室所有工作的可追溯性。 4．安全原則：本實(shí)驗(yàn)平臺的水、電、化學(xué)藥品的使用必須遵照重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的統(tǒng)一要求：試驗(yàn)所用的微生物及分子生物學(xué)試劑必須實(shí)行安全保存和排放，以免污染環(huán)境、危害他人健康。5．儀器的培訓(xùn)和維護(hù)由實(shí)驗(yàn)室管理人員和其他各負(fù)責(zé)教師一起完成。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)管理?xiàng)l例1．試劑稱量須知：從冰箱中取出來的固體試劑必須在37度溫箱中加溫，等試劑的溫度高于室溫后方可打開蓋子稱量。2．離心機(jī)使用：高速離心機(jī)用后需將轉(zhuǎn)子取出倒置。最重要的是，不管什么離心機(jī)，一定要將離心管進(jìn)行平衡，不然離心機(jī)軸心會在一次不經(jīng)意的不平衡后，發(fā)生永久性偏軸損傷。3．帶蓋的離心管、試劑瓶等在進(jìn)行高壓滅菌時，需將蓋子擰松或者在瓶口插一片紙。4．PCR須知：定期用50％的酒精擦PCR上的樣品孔，看好時間做實(shí)驗(yàn)，為了儀器壽命，不能讓PCR儀在4℃保溫過夜。PCR實(shí)驗(yàn)特別需要注意的是污染的防止。Taq酶、dNTP都應(yīng)有儲備固定放置，使用后妥善保存。使用PCR儀需提前預(yù)約登記，避免與別人之間的時間沖突。電泳槽更換電泳緩沖液時需注明更換人姓名和日期。5．限制性內(nèi)切酶的酶切反應(yīng)需在37℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行，這樣做是為了避免水分凝結(jié)在管蓋上導(dǎo)致反應(yīng)液中離子濃度偏高。貴重酶要盡量節(jié)省用量。6．Agarose凝膠倒好后不及時用時，需在1小時內(nèi)轉(zhuǎn)移至TAE中保存。7．實(shí)驗(yàn)服只能在實(shí)驗(yàn)區(qū)穿，不能穿出實(shí)驗(yàn)區(qū)。液相色譜儀操作規(guī)程儀器名稱及型號：液相色譜儀Agilent1100型用途及功能：用于監(jiān)測難以氣化的極性化合物的微生物降解情況，如苯及其衍生物蔥、醌、菲等，并探索其在微生物作用條件下的遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律。一、開機(jī)前準(zhǔn)備 1．檢查實(shí)驗(yàn)室電源、溫度和濕度等環(huán)境條件，實(shí)驗(yàn)室溫度保持在10～40℃之間，濕度小于80%。 2．根據(jù)需要選擇合適色譜柱。在容器中放入已過濾脫氣好的流動相，把吸濾過濾頭放入容器中。 3．檢查儀器各部分是否正常，連線是否正確，清洗用的超純水是否需要更換。 二、實(shí)驗(yàn)步驟第一步：準(zhǔn)備工作a、 把水和甲醇分別加入各瓶中b、 打開電源啟動計(jì)算機(jī)操作系統(tǒng)c、 開啟1100各部件電源開關(guān)d、 待1100各部件自檢完畢，并接收到1100信息后，啟動化學(xué)工作站，雙擊計(jì)算機(jī)桌面上的Instrumentonline圖標(biāo)進(jìn)入工作站系統(tǒng)。 第二步：方法編輯⊙化學(xué)工作站啟動后，單擊Vicw→選Method and Run control→進(jìn)入Methodamp。Runcontrol模塊?！言贛ethodamp。Runcontrol界面下，單擊Method菜單，選擇EditEntireMethod …編輯一個完整的方法。完整的方法分為四部分：a、 Method lnfomation ：用于方法信息的輸入b、 Instrument/Acquisition: 儀器參數(shù)和采集參數(shù)，這是設(shè)置的核心c、 DataAnalysis：數(shù)據(jù)分析參數(shù)d、 Run Time Checklist:運(yùn)行時間表，選擇方法，要執(zhí)行項(xiàng)目。編好后按OK。 ……第三步：運(yùn)行樣品⊙手動逆時針打開閥門2—3圈流量5ml/分，待廢液管中無氣泡，把流量設(shè)置回分析值后，手動順時針關(guān)閉閥門，點(diǎn)擊ON啟動命令?！汛€穩(wěn)定后在Methodamp。Runcontrol界面上選擇File→Load→Method，選擇分析方法文件?！言贛ethodamp。Runcontrol界面上選擇Runcontrol→Samplelnfomation，依提示輸入保存路徑、文件名稱、樣品名稱、操作者等信息。⊙進(jìn)樣分析，對自動進(jìn)樣器，單擊Run Method，即開始分析?！逊治鼋Y(jié)束后按STOP，結(jié)束樣品分析試驗(yàn)。第四步：報(bào)告輸出⊙在Instrumentonline主界面上選擇View→DataAnalysis，進(jìn)入DataAnalysis界面?！堰x擇所要處理的數(shù)據(jù)文件，進(jìn)行處理。 ⊙選擇所要選用的報(bào)告格式，輸出報(bào)告。 第五步：關(guān)機(jī)1．待全部樣品分析完后約30min（當(dāng)流動相中有緩沖溶液或鹽時，需用一定比例的甲醇水溶液沖洗流路系統(tǒng)約10分鐘），方可關(guān)機(jī)。 2．用合適溶劑（一般情況用甲醇）清洗進(jìn)樣閥和進(jìn)樣器。3．在InstnnnentOnline主界面上退出色譜工作站。 4．依次關(guān)閉柱箱電源、LC電源和計(jì)算機(jī)電源。5．關(guān)閉總電源。6．在記錄本上記錄使用情況。 CEM密閉微波消解系統(tǒng)操作規(guī)程儀器名稱及型號：微波消解 MARS5X用途及功能：應(yīng)用于分析化學(xué)的樣品消解萃取、濃縮、干燥、實(shí)驗(yàn)化學(xué)的有機(jī)合成等。一、注意事項(xiàng)：1．避免在任何沒有樣品或微波吸收物的情形下，進(jìn)行微波功率發(fā)射的運(yùn)行。即使CEM微波系統(tǒng)中已設(shè)計(jì)了過載微波能量的保護(hù)轉(zhuǎn)換，但絕對的長時間空載微波依然可能造成磁控管和傳感器的衰化和損壞。2．以下樣品不適合在微波消解容器中使用，禁止在微波系統(tǒng)內(nèi)隨意操作以下物質(zhì)（根據(jù)CEM公司和國際上發(fā)表的文獻(xiàn)材料）：炸藥（TNT，硝化纖維等） 推進(jìn)劑（肼，高氯酸胺等） 高氯酸鹽二元醇（乙二醇，丙二醇等） 航空燃料（JP1等） 引火化學(xué)品漆 醚（熔纖劑乙二醇苯基醚等） 丙烯醛酮（丙酮，甲基乙基酮等） 烷烴（丁烷，己烷等） 乙炔化合物雙組分混合物（硝酸和苯酚，硝酸和三乙胺，硝酸和丙酮等） 硝酸甘油酯，硝化甘油或其它有機(jī)硝化物3．溫度傳感器為精密裝置，應(yīng)盡量避免折壓。4．在運(yùn)行方法前按“1”鍵檢查方法在“℃”下必須有 “CONTROL” 顯示。5．CEM儀器可自動調(diào)節(jié)功率輸出，但在設(shè)定方法時仍應(yīng)注意功率平臺與容器數(shù)目的匹配關(guān)系：12罐（300W），35罐（600W），6罐以上（1200W），并盡量采用功率最小化原則。6．為延長罐子的使用壽命，應(yīng)當(dāng)作到：⑴ 能用低溫消化的樣品就不用高溫消化；⑵ 升溫速率不可過快；⑶ 高溫下保溫時間不宜過長。二、分析操作1．稱樣消解有機(jī)樣品應(yīng)限制到≤／容器，無機(jī)樣品應(yīng)限制到≤／容器。 2．不熟悉的樣品稱樣量消解時應(yīng)嚴(yán)格限制在：，稱樣量應(yīng)盡量保持一致，其中樣品量較大者作為主控罐。① 在同一批反應(yīng)中，不可同時混用不同型號的反應(yīng)罐或者將不同性質(zhì)的樣品混合消解；② 加樣時不要使樣品沾在容器壁上,如沾附請用溶劑或去離子水洗入溶液內(nèi)。3．同一批反應(yīng)必須使用相同的酸或溶劑，不可同時使用不同的試劑體系。溶劑的選擇：消解時HNO3，HF，HCl的使用無限制，H2SO4，H3PO4會產(chǎn)生高溫，使用時應(yīng)該有嚴(yán)格的溫控， H3ClO4在密閉容器中使用有很大的危險(xiǎn)性，禁止使用。 4．容器安裝：① 必須嚴(yán)格保證主控罐的密閉；② 保證每個內(nèi)襯罐都已安裝好外殼保護(hù)套,同時保證保護(hù)套為干燥狀態(tài)；③ 檢查防爆膜并保證每個排氣鏍帽內(nèi)只裝有一片與壓力罐相符的防爆膜，擰緊排氣鏍帽(OMNI消解罐)。④ 嚴(yán)格確認(rèn)壓力彈片安裝正確（凹槽向上）后，使用輔助工具鎖緊容器，以防泄露。安裝不正確可能會產(chǎn)生嚴(yán)重后果。三、開機(jī)消解樣品1．開機(jī)→自檢→出現(xiàn)press any key后按home(返回主菜單鍵) → 出現(xiàn) (a)編輯/創(chuàng)建方法edit/creative method (b)已有程序load method⊙若選定已有程序后，按（確認(rèn)鍵）SELECT后→出現(xiàn)：（1）CEM dirctory的程序（2）User dirctory自己編程序選擇此項(xiàng)后按SELECT→出現(xiàn)：User dirctory后→用上下尖頭鍵選擇你需要的一程序，按SELECT→出現(xiàn)Start Current Method……后按“1”鍵檢查方法在“℃”下必須有 “CONTROL” 顯示 →再按HOME鍵 →再按運(yùn)行鍵，即開始消解?！讶暨x定編輯/創(chuàng)建方法edit/creative method程序后按SELECT后出現(xiàn)（1） CEM directory（2） User dirctory進(jìn)入此項(xiàng)按SELECT→選New Method→按（確認(rèn)鍵）→出現(xiàn)Select