【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 、窗，最后把門(mén)鎖好，方可離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。以上細(xì)則，希望大家自覺(jué)遵守，如有違反者，實(shí)驗(yàn)室有權(quán)停止實(shí)驗(yàn)，待整改好后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。27 / 27環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)管理?xiàng)l例1．崗位責(zé)任制原則：實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的常用儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)平臺(tái)日常管理由實(shí)驗(yàn)室管理人員負(fù)責(zé)；分子生物學(xué)部分儀器由專人負(fù)責(zé)。2．規(guī)范化原則：各種儀器設(shè)備的使用必須按照該儀器使用說(shuō)明規(guī)范化操作，以保證管理工作的連續(xù)性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重現(xiàn)性。3．記錄監(jiān)督原則：實(shí)驗(yàn)平臺(tái)管理的各方面均要求有及時(shí)、準(zhǔn)確的記錄，以保證實(shí)驗(yàn)室所有工作的可追溯性。 4．安全原則：本實(shí)驗(yàn)平臺(tái)的水、電、化學(xué)藥品的使用必須遵照重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室的統(tǒng)一要求：試驗(yàn)所用的微生物及分子生物學(xué)試劑必須實(shí)行安全保存和排放，以免污染環(huán)境、危害他人健康。5．儀器的培訓(xùn)和維護(hù)由實(shí)驗(yàn)室管理人員和其他各負(fù)責(zé)教師一起完成。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)管理?xiàng)l例1．試劑稱量須知：從冰箱中取出來(lái)的固體試劑必須在37度溫箱中加溫，等試劑的溫度高于室溫后方可打開(kāi)蓋子稱量。2．離心機(jī)使用：高速離心機(jī)用后需將轉(zhuǎn)子取出倒置。最重要的是，不管什么離心機(jī)，一定要將離心管進(jìn)行平衡，不然離心機(jī)軸心會(huì)在一次不經(jīng)意的不平衡后，發(fā)生永久性偏軸損傷。3．帶蓋的離心管、試劑瓶等在進(jìn)行高壓滅菌時(shí)，需將蓋子擰松或者在瓶口插一片紙。4．PCR須知：定期用50％的酒精擦PCR上的樣品孔，看好時(shí)間做實(shí)驗(yàn)，為了儀器壽命，不能讓PCR儀在4℃保溫過(guò)夜。PCR實(shí)驗(yàn)特別需要注意的是污染的防止。Taq酶、dNTP都應(yīng)有儲(chǔ)備固定放置，使用后妥善保存。使用PCR儀需提前預(yù)約登記，避免與別人之間的時(shí)間沖突。電泳槽更換電泳緩沖液時(shí)需注明更換人姓名和日期。5．限制性內(nèi)切酶的酶切反應(yīng)需在37℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行，這樣做是為了避免水分凝結(jié)在管蓋上導(dǎo)致反應(yīng)液中離子濃度偏高。貴重酶要盡量節(jié)省用量。6．Agarose凝膠倒好后不及時(shí)用時(shí)，需在1小時(shí)內(nèi)轉(zhuǎn)移至TAE中保存。7．實(shí)驗(yàn)服只能在實(shí)驗(yàn)區(qū)穿，不能穿出實(shí)驗(yàn)區(qū)。液相色譜儀操作規(guī)程儀器名稱及型號(hào)：液相色譜儀Agilent1100型用途及功能：用于監(jiān)測(cè)難以氣化的極性化合物的微生物降解情況，如苯及其衍生物蔥、醌、菲等，并探索其在微生物作用條件下的遷移轉(zhuǎn)化規(guī)律。一、開(kāi)機(jī)前準(zhǔn)備 1．檢查實(shí)驗(yàn)室電源、溫度和濕度等環(huán)境條件，實(shí)驗(yàn)室溫度保持在10～40℃之間，濕度小于80%。 2．根據(jù)需要選擇合適色譜柱。在容器中放入已過(guò)濾脫氣好的流動(dòng)相，把吸濾過(guò)濾頭放入容器中。 3．檢查儀器各部分是否正常，連線是否正確，清洗用的超純水是否需要更換。 二、實(shí)驗(yàn)步驟第一步：準(zhǔn)備工作a、 把水和甲醇分別加入各瓶中b、 打開(kāi)電源啟動(dòng)計(jì)算機(jī)操作系統(tǒng)c、 開(kāi)啟1100各部件電源開(kāi)關(guān)d、 待1100各部件自檢完畢，并接收到1100信息后，啟動(dòng)化學(xué)工作站，雙擊計(jì)算機(jī)桌面上的Instrumentonline圖標(biāo)進(jìn)入工作站系統(tǒng)。 第二步：方法編輯⊙化學(xué)工作站啟動(dòng)后，單擊Vicw→選Method and Run control→進(jìn)入Methodamp。Runcontrol模塊。⊙在Methodamp。Runcontrol界面下，單擊Method菜單，選擇EditEntireMethod …編輯一個(gè)完整的方法。完整的方法分為四部分：a、 Method lnfomation ：用于方法信息的輸入b、 Instrument/Acquisition: 儀器參數(shù)和采集參數(shù)，這是設(shè)置的核心c、 DataAnalysis：數(shù)據(jù)分析參數(shù)d、 Run Time Checklist:運(yùn)行時(shí)間表，選擇方法，要執(zhí)行項(xiàng)目。編好后按OK。 ……第三步：運(yùn)行樣品⊙手動(dòng)逆時(shí)針打開(kāi)閥門(mén)2—3圈流量5ml/分，待廢液管中無(wú)氣泡，把流量設(shè)置回分析值后，手動(dòng)順時(shí)針關(guān)閉閥門(mén)，點(diǎn)擊ON啟動(dòng)命令?！汛€穩(wěn)定后在Methodamp。Runcontrol界面上選擇File→Load→Method，選擇分析方法文件?！言贛ethodamp。Runcontrol界面上選擇Runcontrol→Samplelnfomation，依提示輸入保存路徑、文件名稱、樣品名稱、操作者等信息?！堰M(jìn)樣分析，對(duì)自動(dòng)進(jìn)樣器，單擊Run Method，即開(kāi)始分析。⊙分析結(jié)束后按STOP，結(jié)束樣品分析試驗(yàn)。第四步：報(bào)告輸出⊙在Instrumentonline主界面上選擇View→DataAnalysis，進(jìn)入DataAnalysis界面?！堰x擇所要處理的數(shù)據(jù)文件，進(jìn)行處理。 ⊙選擇所要選用的報(bào)告格式，輸出報(bào)告。 第五步：關(guān)機(jī)1．待全部樣品分析完后約30min（當(dāng)流動(dòng)相中有緩沖溶液或鹽時(shí)，需用一定比例的甲醇水溶液沖洗流路系統(tǒng)約10分鐘），方可關(guān)機(jī)。 2．用合適溶劑（一般情況用甲醇）清洗進(jìn)樣閥和進(jìn)樣器。3．在InstnnnentOnline主界面上退出色譜工作站。 4．依次關(guān)閉柱箱電源、LC電源和計(jì)算機(jī)電源。5．關(guān)閉總電源。6．在記錄本上記錄使用情況。 CEM密閉微波消解系統(tǒng)操作規(guī)程儀器名稱及型號(hào)：微波消解 MARS5X用途及功能：應(yīng)用于分析化學(xué)的樣品消解萃取、濃縮、干燥、實(shí)驗(yàn)化學(xué)的有機(jī)合成等。一、注意事項(xiàng)：1．避免在任何沒(méi)有樣品或微波吸收物的情形下，進(jìn)行微波功率發(fā)射的運(yùn)行。即使CEM微波系統(tǒng)中已設(shè)計(jì)了過(guò)載微波能量的保護(hù)轉(zhuǎn)換，但絕對(duì)的長(zhǎng)時(shí)間空載微波依然可能造成磁控管和傳感器的衰化和損壞。2．以下樣品不適合在微波消解容器中使用，禁止在微波系統(tǒng)內(nèi)隨意操作以下物質(zhì)（根據(jù)CEM公司和國(guó)際上發(fā)表的文獻(xiàn)材料）：炸藥（TNT，硝化纖維等） 推進(jìn)劑（肼，高氯酸胺等） 高氯酸鹽二元醇（乙二醇，丙二醇等） 航空燃料（JP1等） 引火化學(xué)品漆 醚（熔纖劑乙二醇苯基醚等） 丙烯醛酮（丙酮，甲基乙基酮等） 烷烴（丁烷，己烷等） 乙炔化合物雙組分混合物（硝酸和苯酚，硝酸和三乙胺，硝酸和丙酮等） 硝酸甘油酯，硝化甘油或其它有機(jī)硝化物3．溫度傳感器為精密裝置，應(yīng)盡量避免折壓。4．在運(yùn)行方法前按“1”鍵檢查方法在“℃”下必須有 “CONTROL” 顯示。5．CEM儀器可自動(dòng)調(diào)節(jié)功率輸出，但在設(shè)定方法時(shí)仍應(yīng)注意功率平臺(tái)與容器數(shù)目的匹配關(guān)系：12罐（300W），35罐（600W），6罐以上（1200W），并盡量采用功率最小化原則。6．為延長(zhǎng)罐子的使用壽命，應(yīng)當(dāng)作到：⑴ 能用低溫消化的樣品就不用高溫消化；⑵ 升溫速率不可過(guò)快；⑶ 高溫下保溫時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。二、分析操作1．稱樣消解有機(jī)樣品應(yīng)限制到≤／容器，無(wú)機(jī)樣品應(yīng)限制到≤／容器。 2．不熟悉的樣品稱樣量消解時(shí)應(yīng)嚴(yán)格限制在：，稱樣量應(yīng)盡量保持一致，其中樣品量較大者作為主控罐。① 在同一批反應(yīng)中，不可同時(shí)混用不同型號(hào)的反應(yīng)罐或者將不同性質(zhì)的樣品混合消解；② 加樣時(shí)不要使樣品沾在容器壁上,如沾附請(qǐng)用溶劑或去離子水洗入溶液內(nèi)。3．同一批反應(yīng)必須使用相同的酸或溶劑，不可同時(shí)使用不同的試劑體系。溶劑的選擇：消解時(shí)HNO3，HF，HCl的使用無(wú)限制，H2SO4，H3PO4會(huì)產(chǎn)生高溫，使用時(shí)應(yīng)該有嚴(yán)格的溫控， H3ClO4在密閉容器中使用有很大的危險(xiǎn)性，禁止使用。 4．容器安裝：① 必須嚴(yán)格保證主控罐的密閉；② 保證每個(gè)內(nèi)襯罐都已安裝好外殼保護(hù)套,同時(shí)保證保護(hù)套為干燥狀態(tài)；③ 檢查防爆膜并保證每個(gè)排氣鏍帽內(nèi)只裝有一片與壓力罐相符的防爆膜，擰緊排氣鏍帽(OMNI消解罐)。④ 嚴(yán)格確認(rèn)壓力彈片安裝正確（凹槽向上）后，使用輔助工具鎖緊容器，以防泄露。安裝不正確可能會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重后果。三、開(kāi)機(jī)消解樣品1．開(kāi)機(jī)→自檢→出現(xiàn)press any key后按home(返回主菜單鍵) → 出現(xiàn) (a)編輯/創(chuàng)建方法edit/creative method (b)已有程序load method⊙若選定已有程序后，按（確認(rèn)鍵）SELECT后→出現(xiàn)：（1）CEM dirctory的程序（2）User dirctory自己編程序選擇此項(xiàng)后按SELECT→出現(xiàn)：User dirctory后→用上下尖頭鍵選擇你需要的一程序，按SELECT→出現(xiàn)Start Current Method……后按“1”鍵檢查方法在“℃”下必須有 “CONTROL” 顯示 →再按HOME鍵 →再按運(yùn)行鍵，即開(kāi)始消解。⊙若選定編輯/創(chuàng)建方法edit/creative method程序后按SELECT后出現(xiàn)（1） CEM directory（2） User dirctory進(jìn)入此項(xiàng)按SELECT→選New Method→按（確認(rèn)鍵）→出現(xiàn)Select