基礎(chǔ)生物學作業(yè)(編輯修改稿)
2025-05-04 03:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 腫瘤細胞等。在實際上應用中應具體根據(jù)目的條件選擇。（四）細胞轉(zhuǎn)染（tansfection）將目的基因?qū)氚屑毎姆椒ê芏?，大致可分為物理學方法、化學方法、融合法和病毒感染法四類。病毒法已在本節(jié)的“基因的轉(zhuǎn)運”中有基因介紹。目前較多使用的是脂質(zhì)體法。 在目前的技術(shù)狀態(tài)下，一般而言其基因轉(zhuǎn)染效率很難達到100%。故必須首先將轉(zhuǎn)導細胞和未轉(zhuǎn)導細胞加以區(qū)分。這方面的新技術(shù)發(fā)展很快，常用的轉(zhuǎn)導細胞篩選方法有：利用基因表達產(chǎn)物篩選法：（1）標記基因篩選法：在載體上引入一個標記基因，或同時導入標記基因，在轉(zhuǎn)染后的適當時間選用合適劑量的選擇培養(yǎng)基，篩選標記基因表型，那些已導入外源基因的細胞將存活下來，而未轉(zhuǎn)錄的細胞則死于選擇性細胞培養(yǎng)基。如在較多的載體中都有neor標記基因存在，若向培養(yǎng)基中加入G418進行選擇，最后只有轉(zhuǎn)導細胞存活下來。（2）基因缺陷型受體細胞的選擇性：以基因缺陷型細胞作為靶細胞，將正常基因?qū)牖蛉毕菪桶屑毎?，使用選擇性培養(yǎng)基進行篩選。例如將TK基因?qū)隩K的靶細胞，轉(zhuǎn)錄細胞可在HAT培養(yǎng)基中生長，未轉(zhuǎn)導的細胞則不能在HAT培養(yǎng)基中生長。（3）基因共轉(zhuǎn)染技術(shù)：將目的基因表達載體DNA和標記基因表達載體DNA混合后共同轉(zhuǎn)移到靶細胞中，分別使用標記基因和目的基因?qū)倪x擇劑進行兩次篩選，最后得到復合轉(zhuǎn)導的轉(zhuǎn)化子。分子生物學方法：外源基因是否真的轉(zhuǎn)入靶細胞必須用分子雜交方法進行證實。常用的方法有原位雜效，Southern雜交和打點雜交。其中主要問題是探針的選擇。若靶細胞內(nèi)原來不存在所轉(zhuǎn)入的目的基因，可選用目的基因作為探針；靶細胞內(nèi)一般無標記基因存在，故標記基因是良好的探針。探針大小可以是較大的DNA片段，亦可是人工合成的DNA單鏈探針分子。PCR方法目前也已用于轉(zhuǎn)導細胞的鑒定，且該法相對簡單易行。（五）外源基因的表達及檢測在篩選出轉(zhuǎn)化分子后還需要鑒定轉(zhuǎn)導細胞中外源基因的表達狀況。其中包括對目的基因和標記基因表達的鑒定。常用方法有原位雜交，Northrn雜交，NRA打點雜交，免疫組織化學染色等，前幾項是檢測外源基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA，后者則是檢測外源基因翻譯出的蛋白質(zhì)。流式細胞儀是一種較為客觀準確的儀器，可定量分析外源基因的表達狀況。選擇并制備好治療性基因、恰當?shù)妮d體、合適的基因轉(zhuǎn)移方法及篩選方法后，就應該選擇合適的將目的基因?qū)塍w內(nèi)的方式。將治療性基因?qū)塍w內(nèi)的途徑有兩種：in vivo和ex vivo途徑。（六）將目的基因?qū)塍w內(nèi)n vivo途徑該途徑就是指治療性基因通過一定的載體攜帶，在體情況下，直接轉(zhuǎn)導入人體的靶器官的靶細胞中。通常可以使用病毒載體攜帶和脂質(zhì)體包裹等方式將治療性基因?qū)肴梭w中。這種方法導入的基因在體內(nèi)穩(wěn)定表達的時間通常較短暫，運用病毒載體時，可能引起患者產(chǎn)生不良反應，甚至發(fā)生病毒感染，因此比較危險。但是對靶細胞不易體外培養(yǎng)的情況，這種方法很有效。而且，對病毒載體減毒的研究越來越多，病毒載體的危險性也會越來越低。ex vivo途徑該途徑就是指取出患者體細胞進行體外培養(yǎng)，將治療性基因通過病毒載體或非病毒載體轉(zhuǎn)染后，篩選成功轉(zhuǎn)導的細胞，體外擴大培養(yǎng)，再移植到患者的特定部位，通常是重新移植到細胞來源的器官和組織中。理論上講，ex vivo途徑的安全性更高，但是，該途徑的運用范圍較受限制，只有治療用的靶細胞容易取材，容易體外培養(yǎng)、擴增、傳代的情況下，才能使用。三、 治療癌癥的策略與應用二十世紀八十年代基因治療技術(shù)興起以來，基因治療的研究一直在坎坷中發(fā)展，由于在理論和技術(shù)上存在許多不完善之處，因此它曾經(jīng)倍受爭議，并被認為與傳統(tǒng)的倫理道德相悖，有時甚至由于一些偶然事件而被政府和權(quán)威人士明令禁止和抵制。但是，基因治療作為一種全新的疾病治療方法，有著頑強的生命力，相關(guān)的研究一直十分活躍，并不斷取得可喜的成績。最早進行基因治療研究的疾病是單基因遺傳病，這同時也是基因治療應用最為成功的疾病之一。隨后，基因治療研究逐步擴展到嚴重威脅人類健康的惡性腫瘤、心血管疾病、病毒感染及代謝類疾病等，其中，腫瘤以及艾滋病等病毒性疾病的基因治療研究成為目前研究的熱點。上述研究已經(jīng)出臺了一批在體外實驗或動物實驗中有顯著療效的治療方案，其中許多方案有望在臨床上獲準實施。通過以上講解，我們對基因治療有了一定的了解，目前比較熱點的的癌癥方式正是用基因治療的方法。（一）癌癥的定義癌癥（cancer），醫(yī)學術(shù)語亦稱惡性腫瘤（malignant neoplasm），中醫(yī)學中稱巖，由各種致癌物質(zhì)、致癌因素的作用下導致身體正常細胞發(fā)生癌變的結(jié)果。癌細胞的特點是：無限
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